表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定

目的 研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。 方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２ ０００处有１条可与抗ＭＧ７ ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。

利用细菌内重组腺病毒系统构建胃癌MG7-Ag模拟表位疫苗

目的:以复制缺陷的腺病毒为疫苗载体,构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒疫苗.方法:将编码MG7-Ag模拟表位的互补序列设计到上游引物的5/端.以含有HBcAg全序列的质粒p1.2Ⅱ为模板,通过PCR扩增,获得MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因.经序列测定证实后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组.经抗性筛选及酶切鉴定的重组质粒,再用导入293细胞进行包装,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:序列测定证实,PCR产物为胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片段;酶切鉴定表明胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片断插入了pAdTrack-CMV穿梭质粒,卡那霉素进行抗性筛选及PacⅠ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.PacⅠ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d后见明显的绿色荧光蛋白表达.回收病毒,可重复感染293细胞,证实有感染能力的病毒颗粒包装成功.结论:胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒载体的构建成功,为进一步研究胃癌MG7-Ag模拟表位诱发抗胃癌免疫打下了基础.

胃粘膜癌前病变组织中MG7-Ag的表达

胃粘膜癌前病变组织中ＭＧ７┐Ａｇ的表达６１００８３成都成都军区成都总医院汤礼军田伏洲麻晓林①晏才杰①周丁华①关键词胃肿瘤；抗原，肿瘤中国图书资料分类号Ｒ７３５．２萎缩性胃炎、胃粘膜肠上皮化生（肠化生）及胃粘膜上皮异型增生（异型增生）是内镜活检及手术切...

基于胃癌MG7-Ag模拟表位基因疫苗的构建

目的 构建以胃癌 MG7- Ag模拟表位为基础的DNA疫苗 .方法 将 H ind 酶切位点、MG7- Ag模拟表位和通用性辅助性 T细胞 (Th细胞 )表位编码序列的反向互补序列顺次设计于下游引物中 ,通过 2次聚合酶链式反应将 2种表位连接于一段载体基因 ,H ind 酶切位点位于载体片段与表位基因之间 .将目的基因插入 p UCm - T载体 ,酶切鉴定和序列测定证实后 ,利用 p UCm- T载体和 pc DNA3.1(+)载体共有的 Kpn 和 Xba 酶切位点 ,将目的基因亚克隆入真核表达载体 pc DNA3.1(+)载体 .酶切鉴定后 ,利用目的基因和pc DNA3.1(+)载体上的 H ind 酶切位点 ,H ind 酶切去除载体基因片段 ,得到胃癌 MG7- Ag模拟表位和通用性 Th细胞表位的真核表达载体 .结果 经序列测定证实 :PCR产物为载体基因、H ind 酶切位点、MG7- Ag模拟表位及通用性Th细胞表位的融合片段 ;最终得到的重组 pc DNA3.1(+)质粒含有正确编码以上 2种表位的基因片段 .结论 以胃癌MG7- Ag模拟表位为基础的 DNA疫苗构建成功 。

胃癌MG_7-Ag模拟表位口服DNA疫苗的研制

目的 利用减毒鼠伤寒沙门氏菌研制胃癌MG7 Ag模拟表位的口服DNA疫苗 ,并观察其对小鼠的免疫效能及保护作用。方法 构建MG7 Ag模拟表位和通用性辅助性T细胞表位融合基因的真核表达载体。将真核表达载体转入减毒鼠伤寒沙门氏菌得到模拟表位的口服DNA疫苗。以 1× 10 8cfu疫苗菌口服免疫C5 7BL/6J小鼠 ,以携带空载体的沙门氏菌和PBS口服作为对照。以ELISA法检测小鼠血清中抗MG7 Ag抗体的滴度 ,以H TDR掺入法检测小鼠脾淋巴细胞对人工合成的MG7 Ag抗原肽刺激的增殖能力。同时 ,用表达MG7 Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击 ,观察疫苗对小鼠的保护作用。结果 口服疫苗可诱导小鼠产生MG7抗体 ,但各组小鼠脾淋巴细胞体外刺激增殖实验差异无显著性。肿瘤攻击 2周后 ,疫苗免疫组 7只小鼠中有 2只未见肿瘤形成 ,而对照组 4只小鼠则全部成瘤。结论 胃癌MG7 Ag模拟表位的口服DNA疫苗具有免疫原性 ,可以诱导小鼠产生抗肿瘤免疫 。

胃癌及非癌组织中环氧合酶-2和人胃癌相关MG7抗原表达及意义

目的 研究胃癌中环氧合酶2 (COX- 2 )和人胃癌相关抗原(MG7- Ag)表达的相关性及意义。方法 采用ABC免疫组化法检测10 0例藏族胃癌手术患者癌组织及其相应非癌组织和部分远处脏器转移灶中COX -2和MG7- Ag的表达;用甲苯胺蓝染色和改良Giemsa染色法同时检测胃癌组织中幽门螺杆菌(Hp)感染状况。结果 胃癌中COX -2和MG7 -Ag的阳性检出率分别为88.0 %和92 .0 % ;在非癌组织中COX- 2和MG7 Ag的阳性检出率从慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生到不典型增生均呈递增趋势;伴淋巴结和远处脏器转移的胃癌中COX- 2的阳性表达率高于无淋巴结转移(P <0 .0 5 )和无远处脏器转移的胃癌组织(P <0 .0 5 ) ;4 1例Hp阳性胃癌组织中COX- 2阳性表达率明显高于Hp阴性的胃癌组织(P <0 .0 5 ) ;COX -2和MG7- Ag在胃癌中的表达呈正相关(r =0 .4 8,P <0 .0 1)。结论 COX -2与MG7- Ag可能在胃癌的演进过程中起着既独立又相互协同的作用。