芪竹方对人胃腺癌MGC-803细胞Caspase-3及端粒酶增殖与凋亡的影响

[目的]观察芪竹方对人胃腺癌MGC-803细胞Caspase-3及端粒酶增殖与凋亡的影响,探讨中药复方在抗肿瘤治疗中的作用机制。[方法]选用芪竹方500μg/ml在4、8、12、16 h 4个不同时间点及125、250、500μg/ml3个不同浓度在24 h作用人胃腺癌细胞MGC-803,分别采用Caspase-3分光光度法及TRAP银染法端粒酶活性检测法检测Caspase-3和端粒酶在人胃腺癌细胞MGC-803中的表达。[结果]芪竹方500μg/ml在16 h时可明显提高人胃腺癌细胞MGC-803中Caspase-3的活化程度,在250、500μg/ml作用24 h时可明显降低人胃腺癌细胞MGC-803端粒酶的活性。[结论]芪竹方可能通过介导人胃腺癌MGC-803细胞中Caspase-3的增殖及诱导端粒酶凋亡等多途径多靶点而发挥作用。

基于VEGF/PI3K/AKT通路探讨消岩汤联合阿帕替尼抑制胃癌MGC-803细胞增殖的作用机制研究

[目的]明确消岩汤通过血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路治疗胃癌的作用机制。[方法]通过CCK-8检测消岩汤对MGC-803细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测消岩汤对MGC-803细胞凋亡和周期的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测消岩汤、阿帕替尼及其联合用药作用于MGC-803细胞后VEGF/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。[结果]消岩汤呈剂量依赖性抑制MGC-803细胞的增殖(P<0.05),其半抑制浓度(IC_(50))为63.56 mg/mL;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的总凋亡率逐渐升高(P<0.05);随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的G0/G1期细胞所占百分比逐渐降低(P<0.05),S期细胞所占百分比逐渐升高(P<0.05),G2/M期细胞所占百分比变化不大(P>0.05);与空白对照组比较,消岩汤组、阿帕替尼组及其联合用药组的p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、血管内皮生长因子A(VEGFA)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)蛋白的表达量显著下调(P<0.05),Cleaved Caspase-9和Bax蛋白的表达量显著上调(P<0.05),相较于单药组,联合用药组对相关蛋白的调控作用更强。[结论]消岩汤能有效抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡以及S期阻滞,抗胃癌作用机制与其对VEGF/PI3K/AKT信号通路的调控相关。

槲皮素对胃癌MGC-803细胞VEGF-C及VEGFR-3表达水平的影响

目的:研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分为对照组和40μmol/L槲皮素处理组两组。采用免疫组化和RT-PCR方法,检测槲皮素对VEGF-C及其受体VEGFR-3表达水平的作用。结果:槲皮素处理48h后VEGF-C和VEGFR-3表达水平均有下调,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:槲皮素可下调胃癌MGC-803细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达。

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。

重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用

目的研究重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测重楼总苷对MGC-803细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡率,并分析E-phA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长,并且呈时间-剂量依赖关系;可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论其作用机制可能与下调EphA2和survivin的表达以及促进Caspase-3的表达有关。

二烯丙基三硫通过Caspase-3途径诱导人胃癌MGC803细胞凋亡

背景与目的:大蒜及其烯丙基硫化物具有抗肿瘤作用,但其具体的作用机制尚不十分清楚。本研究探讨二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。方法:采用荧光显微镜和电子显微镜观察以及流式细胞术和Westernblot检测等方法,观察DATS诱导MGC803细胞凋亡的作用及对活化的Caspase-3的影响。结果:在荧光显微镜及电子显微镜下,DATS作用的胃癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变;流式细胞术检测出现明显的亚G1峰;12mg/L的DATS处理MGC803细胞0、4、8、12、24h后,活化的Caspase-3的表达率分别为1.9%、3.0%、7.3%、14.4%、27.6%,提示DATS呈时间依赖性促进活化的Caspase-3的表达;用特异的Caspase-3抑制剂预处理细胞后,再用12mg/LDATS处理细胞24h,与单用DATS组相比,凋亡率从23.0%降低到5.1%(P<0.01),提示Caspase-3的抑制剂能抑制DATS诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。Westernblot显示酶原形式的Caspase-3被水解活化。结论:DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与活化Caspase-3有关。

半乳糖凝集素3表达抑制对人胃癌MGC-803细胞中Bcl-2和Bax表达的影响及其促凋亡作用

目的:探讨抑制半乳糖凝集素3(galectin-3)的表达对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,为基因靶向治疗提供潜在靶点。方法:人胃癌MGC-803细胞分为siRNA干扰组、空白对照组和阴性对照组,siRNA干扰组MGC-803细胞转染靶向galectin-3的siRNA,空白对照组MGC-803细胞只加转染试剂,阴性对照组MGC-803细胞转染阴性对照的siRNA。采用流式细胞术和碘化丙啶(PI)染色法检测各组细胞凋亡率和细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组细胞中galectin-3、Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:与阴性对照组和空白对照组比较,siRNA干扰组细胞中galectin-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。PI染色,siRNA干扰组凋亡细胞数量明显增加,凋亡细胞出现细胞核固缩、染色质浓集、新月形和凋亡小体等细胞凋亡特征,阴性对照组仅有少量散在的凋亡细胞。流式细胞术和Western blotting法检测,与阴性对照组和空白对照组比较,siRNA干扰组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平未发生明显变化(P>0.05)。结论:抑制galectin-3表达可促进MGC-803细胞的凋亡,提示galectin-3对胃癌细胞发挥癌基因作用,具有成为靶向治疗靶点的可能性。

健脾化瘀方对胃癌MGC-803细胞侵袭转移相关基因表达的影响

目的探讨健脾化瘀方抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭转移的作用机制。方法分别采用Real-time q PCR和Western Blot技术检测健脾化瘀方对胃癌MGC-803细胞侵袭转移基因转录和蛋白表达的影响。结果健脾化瘀方作用于人胃癌MGC-803细胞24h后,MMPs、VEGF随着给药浓度增加其mRNA和蛋白表达下降,RECK随着给药浓度增加其mRNA和蛋白表达上升,STAT3基因转录和蛋白表达未见明显变化,而p-STAT3蛋白表达量随着给药浓度增加下降。结论健脾化瘀方具有体外抑制MGC-803细胞侵袭转移的作用,其分子机制可能与抑制STAT3蛋白磷酸化和RECK基因转录、表达,进而影响下游VEGF、MMPs等有关。

半乳糖凝集素3低表达对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的探讨半乳糖凝集素3(galectin-3)表达抑制对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖产生的影响。方法将胃癌细胞系MGC-803细胞分为3组,siRNA干扰组(转染靶向galectin-3的特异siRNA),空白对照组(只加转染试剂)和阴性对照组(转染非特异性的siRNA)。用Western blotting法检测转染后细胞中galectin-3蛋白的抑制效率,应用MTT法、集落形成实验检测galectin-3基因低表达对MGC-803细胞增殖的影响;用Western blotting和免疫组织化学法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果 siRNA干扰组细胞中galectin-3蛋白的表达与阴性对照组和空白对照组相比明显降低(P<0.05);细胞集落形成实验和MTT显示,siRNA干扰组细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组细胞比较显著降低(P<0.05);cyclin D1和PCNA蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组(P<0.05)。结论 Galectin-3低表达可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖能力,这可能与抑制cyclin D1和PCNA的表达有关。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨“理气化湿方”对接种胃癌MGC-803细胞裸鼠肿瘤组织关键因子β-catenin、Wnt3a、Lgr5+表达的影响

目的:观察理气化湿方对皮下接种胃癌MGC-803细胞裸鼠肿瘤组织的干预作用及其对瘤体β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因和蛋白表达的影响。方法:将胃癌MGC-803细胞接种于健康雄性裸鼠腋下,成瘤后将裸鼠随机分为模型组、胃复春组(0.56 g/kg)和理气化湿方低、中、高剂量(3.9、7.8、15.6 g/kg)组,每组7只。各组分别灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,共灌胃4周。灌胃结束后处死所有裸鼠,取肿瘤组织,切片、染色,显微镜下观察病理组织学改变。另一部分肿瘤组织应用RT-PCR法、Western Blot法检测β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因和蛋白的表达情况。结果:模型组肿瘤组织细胞大小形态不一,核浆比例增大,核分裂明显,个别腺体呈共壁现象或囊状扩张;理气化湿方中、高剂量组肿瘤组织细胞形态较均匀,固有腺体排列整齐紧密,偶有淋巴细胞浸润,腺上皮和腺管分界清楚。与模型组比较,各给药组肿瘤组织β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因与蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),其中理气化湿方中、高剂量组上述基因与蛋白表达水平明显低于胃复春组(P<0.05),而中、高剂量组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:理气化湿方可通过抑制β-catenin、Wnt3a、Lgr5+增殖,调控Wnt/β-catenin信号通路的异常活化,从而改善瘤体的病理状态、分化程度。

四君子汤对脾虚证胃癌MGC803细胞周期凋亡及Caspase-3表达的影响

目的:探讨四君子汤对脾虚证胃癌MGC803细胞周期凋亡及Caspase-3表达。方法:采用倒置显微镜观察人胃癌MGC803细胞形态学变化,透射电镜观察染色情况,采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,采用免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果:倒置显微镜下5umol/L四君子汤组作用48 h后胃癌细胞数目减少,细胞分裂不明显,体积明显缩小,可发现核固缩现象以及圆形体积变小的凋亡小体形成;透射电镜下5umol/L四君子汤处理后细胞膜微绒毛减少,胞质有所浓缩且细胞体积变小,核染色聚集与核膜,电子密度高,可见明显的凋亡小体;流式细胞仪检测结果显示,四君子汤可诱导MGC803发生凋亡,细胞周期检测显示G0/G1期比值明显增加,而在S其与G2/M期则降低,故在G0/G1期发生阻滞;5umol/L四君子汤组Caspase-3表达显著高于0.1%DMSO组,差异有统计学意义。结论:四君子汤对脾虚证胃癌MGC803具有明显促凋亡作用,细胞周期阻滞在G0/G1期,且通过增加Caspase-3表达而促进其凋亡。

数字化高灵敏度荧光显微镜在As_2O_3诱导MGC-803细胞核凋亡产生钙振荡研究中的应用

利用数字化高灵敏度荧光显微镜对As2O3诱导MGC-803细胞核凋亡过程中的钙振荡进行研究,通过图像中荧光强度随时间变化的规律反应钙振荡的频率和强度变化。结果证实As2O3诱导MGC-803细胞核凋亡过程中,的确引发了钙振荡,说明核钙参与了凋亡过程,并且钙振荡的频率以低频为主。对两相邻细胞核的钙振荡信号观察分析发现,两核钙强度变化曲线低频部分异常相似,几乎在同一时刻达到最高点和最低点。尽管钙波动的幅度不同,但基本频率相同,由此可初步预测钙信号以频率变化为表达特征。两细胞核凋亡呈同步化趋势,证明在受到As2O3刺激后,细胞核的凋亡不是个别现象。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

迷迭香酸衍生物RAD-9通过PI3K/Akt和p38 MAPK信号通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的研究迷迭香酸衍生物RAD-9诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及其机制。方法 MTT法观察RAD-9对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞的凋亡;Hoechst 33258染色法观察RAD-9对MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;Western blot检测RAD-9干预MGC-803细胞36 h后,对Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的影响。结果MTT结果显示,RAD-9呈时间、浓度依赖性抑制胃癌MGC-803细胞增殖;流式细胞术结果显示,RAD-9对胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用(P<0.01);Hoechst 33258染色实验结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;Western blot结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax、caspase-3蛋白表达水平明显提高,Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调,p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论 RAD-9能抑制胃癌MGC-803细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt和激活p38 MAPK信号通路相关。

熊果酸对胃癌细胞株MGC-803凋亡和自噬的调控及其作用机制

目的:观察熊果酸(UA)对胃癌细胞株MGC-803 自噬和凋亡的调控作用,并探讨UA基于PI3K/AKT/mTOR信号通路诱发MGC-803 细胞自噬的机制。方法:体外培养人胃癌细胞株MGC-803,分为空白对照组、UA干预组和UA+3-MA组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染细胞法检测各组细胞自噬发生情况,qPCR实验检测各组细胞LC3B、BAX、Bcl-2 mRNA的表达水平,WB实验检测各组细胞Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR、ULK1、LC3B、BAX、Bcl-2 蛋白的表达水平。结果:与空白对照组相比,UA干预组细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染法显示,与空白对照组相比,UA 干预组绿色和红色荧光亮点数均显著增加(P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组绿色和红色荧光亮点数均显著减少(P<0.05)。qPCR和WB实验结果显示,与空白对照组相比,UA干预组BAX和LC3B mRNA和蛋白以及ULK1 蛋白表达水平均显著上调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平以及Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著下调(均P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组BAX、LC3B mRNA和蛋白表达水平显著下调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平显著上调(均P<0.05),Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR 和ULK1 蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。结论: UA诱导的自噬可以促进胃癌细胞MGC-803 的凋亡,其机制可能与UA参与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达有关。

PTP4A3基因在胃癌患者中的表达及对肿瘤细胞MGC-803活性的影响

目的探讨PTP4A3基因在胃癌患者中的表达及对肿瘤细胞MGC-803活性的影响.方法收集胃癌组织标本156例,癌旁正常胃组织标本32例,检测PTP4A3基因编码蛋白的表达水平.使用脂质体2000试剂将特异性沉默PTP4A3基因的siRNA序列转入MGC-803细胞(PTP4A3-siRNA组),将空载体基因序列转入MGC-803细胞(PTP4A3-NC组),同时设置空白对照组,检测细胞增殖、迁移、侵袭能力.结果胃癌组织中PTP4A3基因编码蛋白相对表达量为0.92±0.04,明显高于正常胃组织中的0.21±0.07,差异具有统计学意义(P<0.01);PTP4A3-siRNA组MGC-803细胞中PTP4A3 mRNA和蛋白相对表达量明显低于空白对照组、PTP4A3-NC组,差异具有统计学意义(P<0. 01);培养48、72、96 h时,PTP4A3-siRNA组MGC-803细胞增殖能力明显低于空白对照组、PTP4A3-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);PTP4A3-siRNA组迁移和侵袭细胞数明显少于PTP4A3-NC组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 PTP4A3基因编码蛋白在胃癌组织中呈高表达,下调PTP4A3基因表达能有效降低胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,可作为胃癌治疗的靶基因进行深入研究.

circ0023642通过调控miR-508-3p/ERBB4分子轴促进胃癌GMC-803细胞的恶性生物学行为

目的:探讨circ0023642通过调控miR-508-3p/ERBB4分子轴对胃癌GMC-803细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法:选取2015年5月至2018年3月南通市第二人民医院手术切除的31例胃癌患者癌组织及配对的癌旁组织标本和胃癌细胞系,使用qPCR检测胃癌组织、癌旁组织和细胞系中circ0023642和miR-508-3p的表达情况;WB实验检测MGC-803细胞中ERBB4、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;CCK-8和Transwell实验检测调控circ0023642和miR-508-3p的表达对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因验证miR-508-3p是否能够结合circ0023642和ERBB4的3’UTR。结果:circ0023642在胃癌组织和细胞系中的表达水平分别显著高于癌旁组织和正常胃黏膜细胞(P<0.05或P<0.01),且在MGC-803细胞中表达水平最高。敲降circ0023642后MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)受到明显抑制(均P<0.05或P<0.01);circ0023642与ERBB4均可以靶向结合miR-508-3p的作用位点,并进一步实验证实circ0023642通过海绵吸附miR-508-3p促进MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:circ0023642通过与ERBB4竞争性结合miR-508-3p的作用位点,进而促进胃癌MGC-803细胞增殖和转移,其可作为胃癌临床诊断的标志物。

曲古霉素A诱导胃癌细胞系BGC-803凋亡的机制研究

目的利用曲古霉素A(TSA)处理人胃癌细胞系BGC-803后观察细胞增殖情况并研究了凋亡相关基因表达量的变化。方法本研究通过TSA处理胃癌细胞系BGC-803细胞后,利用MTT、Real-time PCR、Western blot等试验方法,采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。结果 75 ng/m L的TSA处理48 h相较其他试验组,可显著抑制胃癌细胞系BGC-803细胞增殖(P<0.05),且其抑制作用具有剂量、时间依赖性;使促凋亡蛋白BAX、Caspase-3的mRNA、蛋白表达量升高,从而发挥促进细胞凋亡的作用。结论 TSA诱导BGC-803调亡是通过Caspase依赖途径进行的,且随着时间和剂量的增加,TSA对胃癌细胞的抑制效果越来越显著。

PI3K p55γ调节亚单位N末端24个氨基酸抑制胃癌细胞增殖

目的 p55γ是磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)的调节亚单位之一,在调节PI3K活性上具有重要的作用,本研究旨在观察p55γN末端24个氨基酸对胃癌细胞增殖的影响。方法 用脂质体介导将表达质粒pEGFPC1和pEGFPC24转染MGC 803细胞,通过荧光显微镜鉴定转染基因的蛋白表达;MTT法观察转染细胞的生长情况;软琼脂集落形成实验确定单个细胞的增殖力;最后用流式细胞仪分析细胞周期时相的变化。结果 (1)建立了稳定表达GFP和GFP N24的MGC 803细胞系,分别命名为C1/803和C24/803。(2)与对照组C1/803相比,C24/803细胞生长速度减慢,其在软琼脂中集落形成率下降了86.8%。(3)C1/803和C24/803细胞周期G0 /G1期百分率分别为52.5%和59.5%,两者相比差异有显著性(P<0.05)。结论 p55γN末端24个氨基酸能够抑制胃癌细胞的生长和增殖,引起细胞周期G1 /S期延长,提示N24p55γ可能成为治疗胃癌的潜在的分子药物。

吲哚美辛通过Akt/GSK3β/NAG-1信号通路诱导胃癌细胞的凋亡

目的:探讨非选择性环氧合酶抑制剂吲哚美辛诱导胃癌细胞凋亡作用与Akt/GSK3β/NAG-1信号通路的关系。方法:MTT法测定胃癌细胞的活力;Hoechst 33258染色检测细胞形态学改变,流式细胞术检测DNA含量的变化,Western blotting检测蛋白表达的变化。结果:吲哚美辛通过caspase通路诱导胃癌细胞MGC-803的凋亡,明显降低Akt和GSK3β的磷酸化水平,同时上调NAG-1的表达。单独抑制PI3K或Akt的活性亦可上调NAG-1的表达,而GSK3β抑制剂预处理后则取消吲哚美辛上调NAG-1表达的作用。结论:吲哚美辛可通过Akt/GSK3β/NAG-1信号通路诱导胃癌细胞MGC-803的凋亡。