胃窦癌组织中LAG-3 FGL1 MHC-Ⅱ的表达与预后的关系

目的:探索新型免疫检查点淋巴细胞激活基因3(lymphocyte-activation gene 3,LAG-3)、纤维蛋白原样蛋白1(fibrinogenlike protein 1,FGL1)、主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡ,MHC-Ⅱ)在胃窦癌(gastric antral cancer,GAC)中的表达情况与预后的相关性。方法:收集2012年1月至2014年12月于天津医科大学肿瘤医院诊断为GAC的67例患者病理标本,分别进行石蜡切片制作,采用免疫组织化学法检测LAG-3、FGL1、MHC-Ⅱ三个指标的表达情况,并用统计学方法分析组间差异。采用Kaplan-Meier法评估LAG-3、FGL1、MHC-Ⅱ的表达水平与GAC患者预后之间的关系并绘制生存曲线。结果:GAC患者中,肿瘤大小<4 cm的患者和无淋巴结转移的患者LAG-3免疫细胞阳性率更高(P<0.05);女性患者MHC-Ⅱ免疫细胞阳性率更高(P<0.05)。免疫细胞中LAG-3、MHC-Ⅱ高表达的患者总生存期(overall survival,OS)较好(P<0.05);肿瘤细胞中MHC-Ⅱ高表达的患者OS、无病生存期(disease-free survival,DFS)较差(P<0.05);而FGL1在免疫细胞和肿瘤细胞中的表达与OS、DFS无显著相关性(P>0.05)。结论:GAC患者LAG-3、MHC-Ⅱ在不同区域的表达量存在差异,GAC患者LAG-3及其配体在免疫细胞的表达对预后产生积极影响,提示免疫细胞中LAG-3/MHC-Ⅱ可以作为GAC患者预后标志物,为临床个体化免疫治疗提供新的依据。

The SNPs C.513A>T in the MHC B-F gene and rs15001532 in the SPOCK1 gene are associated with Salmonella pullorum disease resistance in chickens

supported by the Earmarked Fund for the Modern Agroindustry Technology Research System, China （CARS-41）;the National High Technology Research and Development Program of China （2011AA100301）

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中TLR4介导的MyD88依赖性途径的影响

试验旨在探讨不同剂量中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低剂量组和对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h收集细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6mRNA的表达量(P<0.05);中、低剂量组AA基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于高剂量组(培养16h时TLR4基因除外),高剂量组BB基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养32和48h时TLR4基因除外)),低剂量组BC基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养16h时TLR4基因除外)。结果表明,中药复方多糖发挥机体免疫调节作用的机制是通过与淋巴细胞表面TLR4结合,激活下游MyD88依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,且不同MH-C B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。

MHCⅠ类分子及ICAM-1在IL-2、IL-4、IL-6基因转染的瘤苗在诱导CTL中的作用

本文研究了IL-2、IL-4、IL-6基因转染后B16黑色素瘤细胞表面MHCⅠ类抗原及ICAM-1的表达水平,并探讨了其在CTL诱导过程中的作用.结果表明,IL-2、IL-4、IL-6基因转染的B16黑色素瘤细胞表面MHCⅠ类抗原及ICAM-1表达均高于野生型B16黑色素瘤细胞及转染对照质粒的B16黑色素瘤细胞.体内接种后,小鼠脾脏CTL活性明显增强,CTL培养体系中IFN-γ、TNF-α的分泌水平也增高.在CTL诱导体系中加入抗ICAM-1单抗可以抑制CTL的活化,加入抗MHCⅠ类分子单抗后可使CTL的活化完全阻断.这提示细胞因子基因转染可能通过使肿瘤细胞表面MHCⅠ类抗原、ICAM-1的表达增加,从而增强瘤苗的免疫原性.

DF-1细胞MHC单倍型的分子鉴定

为了鉴定鸡胚成纤维细胞(DF-1细胞)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)单倍型,试验选取生长状态良好的DF-1细胞,提取其总RNA并将总RNA反转录成cDNA;以DF-1细胞cDNA为模板,采用PCR方法扩增鸡MHC B基因座的微卫星LEI0258和MCW0371及BF2、BLB2基因并测序,同时采用“PCR+1”方法扩增BF2基因并测序,以根据上述序列及结构特征判定DF-1细胞的MHC单倍型。结果表明:微卫星LEI0258和MCW0371序列长度分别为357,205 bp,其中微卫星LEI0258含有1个CTATGTCTTCTTT重复单元和16个CTTTCCTTCTTT重复单元,与MHC B基因座B130、B131、B201、B5.1、B6.1、B21、B75单倍型的微卫星长度、重复单位的结构和数量完全相同;BF21基因序列长度为1117 bp,与GenBank收录3条鸡MHC B21单倍型的BF2基因序列(登录号分别为AF013493.1、S78682.1、NM-001031338.2)完全一致。说明DF-1细胞来源于MHC B21单倍型纯合鸡胚。

肿瘤浸润性树突状细胞在口腔部鳞状细胞癌组织中的表达及价值

目的探讨口腔部鳞状细胞癌病人癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞的表达及其价值。方法选择2017年6月至2018年6月河北省儿童医院收治的50例口腔部鳞状细胞癌病人作为观察组,选取50例同时期来该院进行治疗的口腔良性肿物病人作为本次研究的对照组。取两组病人的肿物组织标本进行免疫组织化学染色法分析肿瘤浸润性树突状细胞密度,采用流式细胞仪计数肿瘤浸润性树突状细胞的人主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ)阳性细胞比例和白细胞抗原54(CD54)阳性细胞比例。结果观察组肿瘤肿瘤淋巴结转移分类(TNM)分期为Ⅲ期的肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例及CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例均明显低于Ⅰ/Ⅱ期[(7.61±1.43)比(8.65±1.42),P=0.014;(5.31±1.80)%比(7.46±1.95)%,P=0.000;(6.62±2.11)比(8.21±1.86)%,P=0.008];肿瘤组织的最大直径≥5 cm的肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例及CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例均明显低于肿瘤组织直径<5 cm的病人[(7.14±1.85)比(9.07±2.11),P=0.001;(5.42±1.84)比(7.73±1.85),P=0.000;(6.34±2.06)比(8.47±1.91),P=0.000];观察组肿瘤分化程度不同的病人上述指标相比均差异无统计学意义(P>0.05);观察组肿瘤浸润性树突状细胞密度明显低于对照组[(8.27±2.11)比(9.68±2.38),P=0.002],MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例明显低于对照组[(6.67±2.20)比(9.79±2.58),P=0.000],CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例明显低于对照组[(7.46±2.31)比(9.83±2.54),P=0.000]。结论口腔部鳞状细胞癌病人癌组织内肿瘤浸润性树突状细胞的密度下降、MHC-Ⅱ阳性及CD54阳性的细胞比例降低,且随着TNM分期及肿瘤直径的增大,肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平更低。

hB7-1基因转染对人卵巢癌SKOV3细胞生物学特性及MHC Ib与HLA-DR抗原表达的影响

目的研究hB7-1基因转染对人卵巢癌SKOV3细胞生物学特性及MHCIb和HLA-DR抗原表达的影响。方法以腺病毒为载体将hB7-1基因转染SKOV3细胞,噻唑蓝还原法检测SKOV3细胞生长曲线;流式细胞技术观察转染前后细胞周期改变以及hB7-1、MHCIb、HLA-DR分子表达;电镜观察细胞形态学变化。结果hB7-1基因转染人卵巢癌SKOV3细胞前后细胞生长曲线无明显差异(P>0.05);SKOV3细胞感染病毒48h后在相同条件下形态上较感染前无明显改变;hB7-1基因转染48h后,SKOV3细胞表面MHCIb、HLA-DR抗原表达较转染前分别增高1.10±0.22和1.03±0.17,80%细胞表面有较高水平hB7-1基因表达,差异显著(P<0.05)。结论hB7-1基因转染人卵巢癌SKOV3细胞后对细胞生长能力、细胞周期、细胞超微结构变化等生物学特性无明显影响,可显著增强人卵巢癌SKOV3细胞表面的MHCIb和HLA-DR抗原表达,为实现卵巢癌基因治疗提供理论基础。

肿瘤精准免疫治疗的临床实践

目的通过二代高通量测序,评估肿瘤组织的潜在驱动突变和人类白细胞抗原(HLA)I类基因突变,预测肿瘤患者对主要组织相容性复合物I类分子(MHC-I)限制性的免疫治疗手段,如程序性死亡受体1(PD-1)单抗或多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗技术(MASCT)的有效性。方法对35例肿瘤组织样本进行333个肿瘤相关基因二代高通量测序,根据肿瘤组织样本中基因突变信息将35例肿瘤样本进行Dirichlet Multinomial Mixture(DMM)分类分析,并根据肿瘤组织HLA-I类基因突变量,结合对患者肿瘤组织中检测到的点基因突变位点,分析预测能引起免疫响应的新生抗原肽数目,预测患者对MHC-I类分子限制性免疫治疗——PD-1单抗或MASCT单用或联用治疗中的临床疗效,并根据实际治疗结果对预测方法进行优化和改进。结果 35例肿瘤组织样本根据肿瘤相关基因测序和DMM分类分析,形成2个分组。DMM 2个分组中,HLA-I类基因突变量差异显著(P=1.076e-5)。其中5例患者接受免疫治疗,对结果进行个案分析:2例HLA-I类基因高突变量患者进行MHC-I类分子限制性免疫治疗PD-1单抗联用MASCT,或单用MASCT治疗3次或3次以上,患者临床评估为疾病进展;3例HLA-I类基因低突变量患者,进行PD-1单抗单用或联用MASCT 4次以上,2例患者临床评估为疾病控制,1例患者临床评估为疾病稳定。结论通过特定的基因测序,检测患者肿瘤组织驱动突变和HLA-I类基因突变量,对患者进行分类,筛选适合MHC-I类分子限制性肿瘤免疫治疗适应证人群,提高临床肿瘤免疫治疗有效率,达到精准免疫治疗的目的。

B7基因转导非免疫原性肿瘤B16并联合应用IFN-γ的抗肿瘤研究

目的探索非免疫原性肿瘤的免疫基因治疗。方法将Ｂ７１基因导入非免疫原性肿瘤细胞Ｂ１６，在体外经ＩＦＮγ处理后，观察细胞表面分子的表达变化，以及肿瘤细胞在小鼠体内的成瘤性。结果单独Ｂ７基因转导的Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内持续生长。体外用ＩＦＮγ处理肿瘤细胞，可明显增加细胞表面ＭＨＣＩ类分子的表达，与Ｂ７－Ｂ１６比较，Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内的成瘤性明显降低。结论单独Ｂ７基因导入并表达，不能改变Ｂ１６在体内恶性增殖的特性。同时提高细胞表面Ｂ７与ＭＨＣＩ分子的表达，两者可协同发挥作用，诱发肿瘤排斥。

海南汉族和黎族人群1型糖尿病患者MICA基因多态性研究

目的探讨主要组织相容性复合体I类分子链相关基因A （MICA）基因多态性在海南汉族、黎族人群中的分布情况，分析MICA基因多态性与1型糖尿病（T1DM）的相关性。方法病例对照研究。选取2015年6月至2016年12月来自海南省五指山市、陵水县、琼中县、白沙县、乐东县、昌江县、东方市、海口市就诊的，海口市人民医院、海南省第二人民医院的汉族、黎族T1DM患者各55例及健康体检者各55名（其中汉族T1DM患者，男35例，女20例；汉族健康体检者，男28名，女27名。黎族T1DM患者，男33例，女22例；黎族健康体检者，男28名，女27名）。采用聚合酶链反应－直接测序分型（PCR－SBT）方法进行MICA基因分型。采用χ2检验对MICA等位基因频率进行相关性分析。结果海南汉族健康人群共检测出11种MICA序列等位基因和5种MICA－STR序列等位基因，黎族健康人群分别为13种和5种，其中汉族MICA＊008：01和A5检出频率最高[分别为30.85%（29/94例），41.49%（39/94例）]，黎族MICA＊002：01和A4检出频率最高[分别为21.57 %（22/102例），36%（36/100例）]；汉族T1DM患者人群共检测出10种MICA序列等位基因和5种MICA－STR序列等位基因，黎族分别为9种和5种，其中汉族MICA＊002：01和A9检出频率最高[分别为29%（29/100例），29.29%（29/99例）]，黎族MICA＊012：01、MICA＊002：01和A4最常见[分别为21.15%（22/104例），21.15%（22/104例），38.24%（39/102例）]。海南汉族人群与T1DM患者人群MICA＊002：01、MICA＊010、MICA－A5、MICA－A6和MICA－A9等位基因的频率（健康人群分别为：5.32%，22.34%, 41.49 %，9.58%，6.38%；T1DM患者人群分别为：29%，7%，26.26%，2.02%，29.29%），差异有统计学意义（χ2值分别为：18.799，9.233，5.218，5.197，16.762；P值分别为：0.000，0.002, 0.025，0.024，0.000，P〈0.05）；黎族健康人群各MICA等位基因频率（分别为：17.65%，21.57%，12.75%，5.88%，19.61%，2.94%，10.78%，1.96%，1.96%，0.98%，1.96%，0.98%，0.98%；36%，22%，14%，2%，27%），黎族T1DM患者人群检出的各MICA等位基因频率（分别为：21.15%，21.15%，11.54%，5.77%，14.42%，5.77%，16.35%，1.92%，1.92%；38.24%，28.43%，11.76%，1.96%，19.61%），差异均无统计学意义（χ2值分别为：0.405，0.005，0.070，0.001，0.982，0.986，1.356，0.000，0.000，1.025，2.059，1.025，1.025，0.108，1.497，0.225，0.000，1.545；P均〉0.05）。结论海南汉族健康人群以MICA＊008：01和MICA－A5等位基因频率最高，黎族健康人群为MICA＊002：01和MICA－A4。MICA＊002：01、MICA－A9在海南汉族T1DM患者人群为高频率等位基因，而MICA＊010、MICA－A5和MICA－A6为低频率等位基因。未发现在海南黎族健康人群与T1DM患者人群有明显差异的MICA等位基因。

可手术肺腺癌主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A和B的表达及临床意义

目的检测可手术肺腺癌组织中主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子链相关蛋白A和B（MICA/B蛋白）的表达，探讨其临床意义。方法回顾分析郑州人民医院2002年1月至于2003年12月诊治的可手术肺腺癌100例。免疫组织化学染色法检测其MICA/B蛋白的表达，按照免疫组织化学染色评分标准≥5分者为高表达组，〈5分者为低表达组。运用χ2检验分析MICA/B蛋白与患者临床病理特征的关系。Kaplan－Meier生存曲线及Log－rank检验计算MICA/B蛋白表达与可手术肺腺癌总生存期之间的关系。采用Cox回归模型分析各个协变量单一及联合效应。结果MICA/B蛋白在可手术肺腺癌组织中的高表达率为38%（38/100）。MICA/B蛋白表达在EGFR基因突变组中的高表达率显著高于EGFR基因野生组（93.8%比11.8%，P〈0.001），而在患者不同年龄、性别、TNM分期、T分期、组织学分级及淋巴结转移之间差异均无统计学意义。MICA/B蛋白高表达组的总生存期显著短于低表达组（10.4比28.9个月，P＝0.005）。结论 可手术肺腺癌组织中MICA/B蛋白高表达，与EGFR基因突变型及总生存期有密切关系，有可能是可手术肺腺癌患者预后不良的指标。