草鱼MHCⅠα基因克隆及其多态性特征分析

主要组织相容性复合体(MHC)是存在于脊椎动物染色体上、呈高度多态性的基因群,与机体的抗病性密切关系。MHCⅠ类分子由α链和β_(2m)微球蛋白组成,α链呈高度多态性。为探究草鱼MHCⅠα基因的多态性特征,本研究对3个草鱼个体的MHCⅠα基因进行克隆和测序,并使用生物信息学方法分析比较草鱼与小鼠、牛和鸡的MHCⅠα基因多态性特征。结果:共获得了5条草鱼MHCⅠα基因型序列,其基因编码332个氨基酸,包括信号肽、α1、α2、α3和TM/CY区域。草鱼MHCⅠα基因的氨基酸变异位点主要分布在α1和α2区域,与小鼠、牛和鸡MHCⅠα基因肽结合区(PBR)空间结构相似,多态性位点分布在抗原递呈的关键部位α螺旋或β折叠上。草鱼MHCⅠα基因的进化受自然环境的负向选择作用,而其他3个物种的进化方式均为正向选择。此外,草鱼MHCⅠα基因与其他脊椎动物亲缘关系较远,单独构成进化树上一大分支,且个体间继续分化为不同的亚支。本研究从基因层面阐述了草鱼MHCⅠα基因多态性特征和分子进化规律,为进一步探究低等脊椎动物MHCⅠα基因的生物学特征奠定基础。

嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙MHCⅠ基因在不同组织的表达

本研究旨在探讨嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)胁迫下MHCⅠ基因在东北林蛙不同组织的表达特征,为揭示两栖类抗感染免疫应答机制提供依据。文中首先构建嗜水气单胞菌感染下的试验动物模型,通过苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察病理学变化;利用RT-PCR克隆东北林蛙MHCⅠ基因α1+α2肽结合区并进行生物信息学分析,再运用荧光定量PCR技术检测Ah胁迫下MHCⅠ在不同组织中的转录水平。结果表明:在Ah感染后,皮肤、肝脏和肌肉等组织均出现细胞结构消失和纹理紊乱等现象;获得MHCⅠ基因α1+α2肽结合区片段494bp,可编码164个氨基酸,与两栖类同源性在77%以上,与哺乳类同源性低至14.96%,表明MHCⅠ基因α1+α2区在不同物种间保守性较低;荧光定量PCR结果显示,在Ah胁迫下,实验组肝脏、脾脏、肾脏、皮肤和肌肉组织MHCⅠ基因的转录水平在72 h前均高于对照组,但是各组织到达峰值的时间具有差异性(P<0.01),表明Ah胁迫下MHCⅠ基因在不同组织的表达时间存在差异。研究结果为进一步探究MHC分子在抗感染中的免疫功能提供了参考依据。

鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。

异基因MHCⅠ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响

目的 :观察异基因MHCⅠ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响 ,探讨MHCⅠ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法 :由逆转录病毒载体pMSCV介导 ,将BALB C小鼠的MHCⅠ类分子H 2Dd 基因导入C5 7BL 6小鼠的骨髓细胞 ,流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应 ,乳酸脱氢酶释放法测定BALB C小鼠NK细胞对H 2Dd 修饰后C5 7BL 6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果 :重组逆转录病毒感染的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞对BALB C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度 ,与未转染和空载体病毒感染的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB C小鼠NK细胞对转染H 2Dd 基因后的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论 :在骨髓移植中用受者MHCⅠ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。

615小鼠MHC Ⅰ cDNA重组逆转录病毒基因治疗载体的构建和包装

目的:制备615小鼠MHCⅠ目的基因(H-2Kk)载体,获得高表达MHCⅠ分子功能的单克隆细胞株。方法:将615小鼠MHCⅠ(H-2Kk)cDNA定向连接至PLXSN逆转录病毒质粒,转染E.coli JM109,限制性酶切分析法筛选出重组质粒PLXSN-H-2Kk,继而转染PA317细胞,经G418筛选获得抗性PA317单克隆细胞株,并转染NIH3T3细胞,依抗性NIH3T3细胞克隆数目,鉴定病毒液的滴度和PA317单克隆细胞株。结果:转染成功的病毒液滴度位于1.6×104～1.1×105 CFU/ml之间,PA317单克隆细胞株成片生长良好,并高表达H-2Kk产物。结论:H-2Kk cDNA重组逆转录病毒质粒的成功构建、包装和滴度鉴定为在615小鼠上进行恶性肿瘤的MHC Ⅰ转基因治疗奠定了物质基础。

新疆哈萨克绵羊MHC Ⅰ类分子基因的克隆与生物信息学分析

为了研究新疆哈萨克绵羊主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子基因序列的多态性,采用PCR和测序的方法分别克隆新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链和轻链的c DNA全长,并进行生物信息学分析。结果表明:成功扩增出新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链、轻链,大小分别为1 107 bp、357 bp;通过生物信息学软件预测蛋白质分子质量分别为90 ku和29.694 ku;等电点(p I)分别为5.00,5.23;重链富含G、C碱基,有两段跨膜螺旋,最大疏水指数为3.622,最小疏水指数为-2.922,预测整条肽链表现为亲水性,在1~84位碱基之间存在信号肽;轻链四种碱基含量基本一致,也有两段跨膜螺旋,在1~63位碱基之间存在信号肽。新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因编码蛋白质的二级结构以无规则卷曲元件的含量最高,该蛋白质的三级结构由一条α链,另一条为β链通过非共价键组成,由α1、α2组成抗原结合槽;NCBI数据库中不同地区的哈萨克绵羊的MHCⅠ类分子基因的同源性在89.87%~99.91%之间,与数据库中牛的MHCⅠ类分子基因同源性达到了98.88%,轻链MHCⅠ类分子基因还与猪和人的同源性相对较高。

不同品系豚鼠MHCⅠ类基因的多态性及差异表达

由前期的研究可知,Zmu-1∶DHP远交系豚鼠对口蹄疫病毒的敏感性为100%,和其他DHP品系相比存在显著差异。本研究利用不同品系豚鼠(Zmu-1∶DHP远交系、Zmu-2∶DHP远交系和DHP品系),提取其脾脏RNA,转录为cDNA后进行聚合酶链式反应扩增,扩增产物经过高通量测序,分析豚鼠MHCⅠ类基因结构、单倍型及多态性信息,以检测各品系间该类基因的表达是否存在差异。结果表明:本研究系统地得到豚鼠的8条MHCⅠ类基因单倍型序列,其中部分单倍型在外显子3存在23个氨基酸缺失,但依旧存在一定程度的表达;部分品系间单倍型表达测序片段(reads)频率差异显著(P<0.05),推测MHCⅠ类基因单倍型表达差异可能和不同品系的免疫能力差异有关。本研究为豚鼠品系应用于疾病模型及疫苗开发奠定了理论基础。

BALB/c小鼠MHCI类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的 构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法 用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果 用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论 成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 。

河北汉族HLA-A、B、DRB1基因多态性与慢性粒细胞白血病相关性研究

目的通过对河北省汉族人群进行慢性粒细胞白血病(CML)与人类白细胞抗原(HLA)基因分布频率的相关性研究,探讨HLA基因与CML发病之间的关联,及其与临床预后的相关性。方法应用序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-sequence specific primers SSP)对河北省汉族人群中142例CML患者和212例正常对照进行HLA-A、B、DRB1基因的检测,比较两者之间HLA基因分布频率的差异,并通过woolf公式计算相对危险率(RR),以甄别出河北省汉族人群对CML发生有统计学意义的"易感基因"和"保护基因"。结果CML患者DRB1*04明显高于正常对照(17.4%vs 10.2%),相对危险系数(RR)=1.929>1(χ2=7.053,P=0.004),而A*02、DRB1*09在CML患者则明显低于正常对照(22.2%vs 33.4%),RR分别为(0.521,0.391),(χ2=8.956,P=0.003;χ2=9.619,P=0.002)。CML患者中A*03、B*13、DRB1*01基因频率与正常对照组相比虽有升高,且RR>1,但通过RR的显著性检验,差异无统计学意义(P>0.05)。结论DRB1*04可能为河北省汉族人群CML患者的"易感基因",而A*02、DRB1*09则可能为河北省汉族人群CML患者的"保护基因",进一步了解遗传因素在河北省汉族人群CML病因发病中的作用,对于CML的诊断、防治和预后判断开辟新的思路。

HBx基因对HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移的影响

目的探究HBx基因对HepG2.2.15细胞侵袭、迁移及主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类链相关基因A(MICA)-A5.1表达的影响。方法体外培养HepG2.2.15细胞系(插入HBV全基因组并持续表达的HepG2细胞),随机分为对照组、HBx过表达质粒组、HBx空载质粒组、HBx siRNA组、HBx siRNA阴性对照组,分别转染质粒及siRNA后,以CKK-8法分别检测24 h、48 h后细胞增殖情况,筛选合适药物作用时间;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞侵袭迁移能力;以免疫印记法检测HBx、MICA-A5.1蛋白和上皮间质转化标志蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;以酶联免疫吸附法检测各组细胞培养基中sMICA水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK q检验。结果与对照组比较,24 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为8.268、4.365,P值分别为<0.001、0.036);48 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为12.680、7.523,P值均<0.001)。与对照组比较,HBx过表达质粒组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均升高,E-cadherin表达降低(q值分别为9.427、6.697、10.500、5.042、22.740、15.720、5.258,P值均<0.05);HBx siRNA组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均降低,E-cadherin表达升高(q值分别为8.133、8.828、7.616、7.673、5.391、7.694、6.226,P值均<0.05)。结论HBx基因调控HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移,上调该基因可促进MICA-A5.1表达,增强HepG2.2.15细胞侵袭转移能力。

蒙古马肌肉中运动相关基因训练前后差异表达分析

为了进一步了解蒙古马超群的耐力性能形成的分子机理,试验对蒙古马训练前后肌肉组织中肌球蛋白(MHC)-Ⅰ和肌钙蛋白1(TNNC1)基因的表达量进行了比较分析,以6匹2岁的雌性蒙古马为试验对象,以自然状态和耐力训练后的状态为变异因素,采用q PCR的方法检测经耐力训练后蒙古马肌肉中MHC-Ⅰ和TNNC1基因在mRNA水平的表达变化。结果表明:经训练后蒙古马肌肉中MHC-Ⅰ基因的表达量极显著低于训练前(P<0.01),而TNNC1基因的表达量极显著高于训练前(P<0.01)。

不同分化程度的肝细胞癌患者血清可溶性MICA水平及MICA等位基因多态性分析

目的研究肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清可溶性MICA(soluble MHC class-Ⅰchain related gene A,sMICA)水平及MICA等位基因多态性与HCC分化程度的关系,为HCC的预防和治疗提供新的思路。方法按照Edmondson-Steiner四级(Ⅰ-Ⅳ)分级法将113例HCC患者分为高分化(Ⅰ-Ⅱ级)组(n=74)和低分化(Ⅲ-Ⅳ级)组(n=39),同时招募80例无亲缘关系的健康志愿者作为正常对照。收集对照组和HCC患者的外周血,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清sMICA水平,采用聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)对各组MICA等位基因进行测序分型。结果HCC组血清ALT、AST、AFP、sMICA的浓度高于对照组(P<0.001)。HCC低分化组的血清sMICA浓度高于HCC高分化组(P=0.007),HCC高分化组和低分化组的血清ALT、AST、AFP浓度差异无统计学意义(P>0.05)。MICA-A4在HCC组的频率(11.5%)明显低于对照组(23.1%)(Pc=0.01),而MICA-A5在HCC组的频率(48.2%)则高于对照组(34.4%)(Pc=0.03),但MICA-A4、MICA-A5在HCC高分化组与低分化组的分布频率无明显差异(Pc值分别为0.67、0.31)。MICA*010在HCC组的频率(36.7%)明显高于对照组(15.6%)(Pc<0.001),而MICA*045在HCC组的频率(3.1%)低于对照组(13.1%)(Pc<0.001),但MICA*010、MICA*045在HCC高分化组与低分化组的分布频率差异无统计学意义(Pc值分别为0.28、0.42)。结论血清sMICA水平可作为HCC恶性程度的一种重要标志,MICA-A5和MICA*010可能是HCC的一个易感因素,MICA-A4和MICA*045可能是HCC的一个保护因素。

大熊猫Ⅰ类MHC基因的分离及分型技术的建立

濒危野生动物人工圈养繁育是防止或减缓物种走向灭绝的重要保护措施之一,已在诸多濒危动物的重引入工程及野生种群的复壮工程中,发挥了极为关键的作用.由于功能基因的多态性信息是制定圈养种群繁育计划的至关重要的遗传参数,因此,在脊椎动物基因组中一类具有高度多态性和在机体的免疫应答与环境适应中发挥关键作用的功能基因家族--主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC),便成为检测和评估濒危野生动物人工圈养种群免疫应答与环境适应能力的理想分子标记,并藉此制定科学的繁育计划.大熊猫是世界濒危野生动物保护的旗舰物种,而人工圈养种群的管理信息中尚缺乏MHC这一遗传参数.鉴此,本文通过构建大熊猫Ⅰ类MHC基因的克隆重叠群,共分离得到了6个Ⅰ类MHC功能基因,并将其分别命名为Aime-C,Aime-F,Aime-I,Aime-K,Aime-L和Aime-1906.组织表达检测和cDNA的全序列分析表明,Aime-C,Aime-F,Aime-I和Aime-L均具有广泛的组织表达和正常的外显子结构,为经典的Ⅰ类MHC基因;Aime-K和Aime-1906为特异性组织表达,且exon7的结构异常,为非经典的Ⅰ类MHC基因.本文进一步通过位点特异的单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)和测序分析,建立了大熊猫4个经典的Ⅰ类MHC基因exon2和exon3的特异性基因型分型方法.运用该方法对成都大熊猫繁育研究基地的大熊猫圈养种群进行遗传变异检测,发现Aime-F是单态位点,而Aime-C,Aime-I和Aime-L则呈现不同程度的多态性(3个基因的exon2均有4条等位基因,exon3分别有6条、5条和5条等位基因).此结果经由已知大熊猫圈养家系的分型验证,表明其准确有效,从而为同领域获取大熊猫Ⅰ类MHC基因的相关信息,提供了可靠的技术方法.

MHCⅠ类基因转移诱导移植免疫耐受的研究

本研究用体内外实验观察MHC Ⅰ类基因转移对移植物免疫原性的影响。并用小鼠心肌移植模型, 探讨通过MHCⅠ类基因转移延长移植物存活的可行性。结果表明, 正常对照组小鼠的心肌移植物平均存活时间(MST) 为9-4d±1-84d。诱导耐受组小鼠的心肌移植物MST为45-7d±6-0d, 比对照组明显延长( P<0-05) 。提示将供体MHC Ⅰ类基因转移到受体造血细胞, 可以降低移植物的免疫原性,

丙戊酸钠诱导人肺癌细胞MICA表达上调增强NK细胞对其杀伤作用的研究

目的观察丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对人肺癌细胞A549、SP-CA-1、NCI H446中的MHCⅠ类链相关基因A(MICA)表达的影响,并比较肺癌细胞经VPA处理前后NK细胞对其杀伤作用的差异。方法将0.75～12.0 mmol/L VPA作用于A549、SP-CA-1、NCI H446细胞,与未加VPA的对照组进行比较,观察VPA对人肺癌细胞生长的影响。选择对细胞生长无影响的1.50 mmol/L和3.00 mmol/L VPA诱导3株肺癌细胞4 d,通过RT-PCR反应和免疫荧光法分别检测MICA在mRNA和蛋白质水平的变化。LDH法检测VPA处理肺癌细胞前后其被NK细胞杀伤程度的变化。结果>6.0 mmol/L VPA对3株肺癌细胞均表现出抑制其生长。用1.50mmol/L和3.00 mmol/L VPA诱导4 d后的3株肺癌细胞,与对照组比较,其MICA的mRNA转录水平和蛋白质表达提高(P<0.05);1.50 mmol/L和3.00 mmol/L VPA诱导表达MICA后的肺癌细胞均比未经VPA处理的肺癌细胞被NK杀伤的程度高(P<0.05)。3.00 mmol/L VPA浓度组3株肺癌细胞的MICA mRNA、蛋白质表达水平及其被NK细胞杀伤的程度均高于1.50 mmol/L VPA浓度组(P<0.05)。结论VPA通过上调MICA抗肺癌作用的新机制,为肺癌临床免疫生物治疗提供了实验依据。

可溶性MICA抗原在湖南地区汉族恶性肿瘤患者血清中的分布及临床意义

目的研究湖南地区汉族人群中可溶性MHCⅠ类链相关基因A(sMICA)分子在恶性肿瘤中的分布及诊断价值。方法双抗体夹心法检测512例恶性肿瘤患者和141例正常对照血清中sMICA浓度含量,分析sMICA含量在不同疾病中含量变化及其与疾病的相关性。结果 sMICA含量在恶性肿瘤中只有肝癌有诊断价值(AUC=0.843),而其他恶性肿瘤的诊断价值意义不大。肝癌患者血清中的sMICA含量最高,为743.4±304.1pg/mL(P=0.003),明显高于其他恶性肿瘤,胃癌次之,最差的为女性生殖系统肿瘤和恶性淋巴瘤,分别为162.5±116.1 pg/mL(P=0.115)和140.9±137.6 pg/mL(P=0.205)。结论肝癌患者血清sMICA含量明显增加,sMICA含量可应用于肝癌的诊断,而对其他恶性肿瘤的诊断价值意义不大。

丙戊酸钠在体内外影响NK细胞对人肺癌细胞杀伤作用的研究

目的观察丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对人肺癌细胞A549、SP-CA-1、NCIH446中的MHCⅠ类链相关基因A(MICA)表达的影响,并比较经VPA处理前后NK细胞对肺癌细胞杀伤作用的差异,及肺癌荷瘤小鼠动物模型瘤组织重量、大小的差异。方法将0.75～12.0mmol/L VPA作用于A549、SP-CA-1、NCIH446细胞,与未加VPA的对照组进行比较,观察VPA对人肺癌细胞生长的影响。选择对细胞生长无影响的1.50mmol/L和3.00mmol/L VPA诱导三株肺癌细胞4d,通过RT-PCR反应检测MICA在mRNA水平的变化。LDH法检测VPA处理肺癌细胞前后其被NK细胞杀伤程度的变化。建立肺癌荷瘤小鼠动物模型,加入不同剂量VPA,体内观察VPA对肺癌瘤组织重量、大小的影响。结果用1.50mmol/L和3.00mmol/L VPA诱导4d后的三株肺癌细胞,与对照组比较,其MICA的mRNA转录水平提高,被NK杀伤的程度提高(P<0.05);高VPA浓度组三株肺癌细胞的mRNA水平及其被NK细胞杀伤的程度均高于低浓度组(P<0.05);VPA高剂量和/或低剂量组抑制荷瘤鼠皮下肿瘤的生长作用与对照组差异有统计学意义,P<0.05,抑瘤率分别为52.9%和35.9%。结论 VPA通过上调MICA抗肺癌作用的新机制,为肺癌临床免疫生物治疗提供了实验依据,具有治疗肺癌的潜在价值,VPA在体内对肺癌细胞A549的增殖也存在明显的抑制作用,为探讨肺癌治疗新方法及其机制提供一个新途径。

MICA＊A5．1与沙眼衣原体感染的相关性

目的研究MICA＊A5．1基因与沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）感染的关系。方法聚合酶链反应（P（R）-SSP检测样本中的MICA＊A5．1基因，荧光定量-聚合酶链反应（FQ-PCR）检测Ct-DNA。结果在122例不孕患者组中有33例Ct感染阳性，140例对照组中有16例Ct感染阳性，2组Ct感染率分别为27．1％和11．4％。经PCR-SSP方法检测，不孕患者组中MICA＊A5．1基因阳性个体有35例，ct感染阳性且同时MICA^＋A5．1基因阳性的个体有5例；对照组中MICA＊A5．1基因阳性个体有43例，Ct感染阳性且同时MICA＊A5．1基因阳性的个体有1例。MICA。A5．1基因阳性个体和MICA＊A5．1基因阴性个体之间Ct感染率的差异具有统计学意义（不孕患者组P=0．046；对照组P=0．022；两组合并P=0．01）。结论不孕患者组Ct感染率要高于对照组；与MICA＊A5．1基因阴性个体相比，MICA＊A5．1基因阳性个体的Ct感染率较低。

高免疫原性胶质瘤细胞疫苗体外抗瘤时靶细胞超微结构变化

目的观察高免疫原性人多形性胶质母细胞瘤(GBM)U251细胞疫苗体外诱发产生效应细胞杀伤靶细胞的超微结构变化。方法以500U/mL干扰素-γ(IFN-γ)诱导48h+热43℃休克2h诱导膜型热休克蛋白70(HSP70)及主要组织相容性抗原复合体I类分子(MHC-I)双高表达,经丝裂霉素(MMC)灭活制成高免疫原性细胞疫苗。体外刺激健康捐献者外周血单个核细胞(PBMCs)作为效应细胞(MHC-HSP-CTL),进行肿瘤特异性杀伤试验;MTT比色法检测其杀伤活性;透射电镜观察靶细胞受攻击后情况。结果MHC-HSP-CTL对野生型U251细胞特异性的杀瘤活性明显高于HSP70分子单高表达的细胞疫苗刺激组(HSP-CTL)、MHC-I类分子单高表达的细胞疫苗刺激组(MHC-CTL)以及野生型对照组(W-CTL)(P<0.05),透射电镜显示靶细胞受到攻击后出现不同程度凋亡样坏死和胀亡样坏死,胀亡样坏死细胞在高免疫原性细胞疫苗刺激的效应细胞组较多。结论介导细胞胀亡是高免疫原性即膜型HSP70和MHC-I类分子双高表达疫苗的U251细胞疫苗一种重要主动特异性抗瘤机制。

MICA基因与肿瘤

主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A（MICA）位于人第6号染色体的主要组织相容性复合物Ⅰ（MHC-Ⅰ）类区域中，该基因包含6个外显子，编码的蛋白分子结构域与经典的Ⅰ类分子α链相似，包括3个胞外结构域：α1、α2和α3，以及跨膜区和胞质区，但不含β2微球蛋白。MICA表达于内皮细胞、上皮细胞以及大多数上皮性肿瘤细胞表面，参与多种肿瘤细胞的分化、增殖和浸润过程。可溶性MICA（sMICA）可以作为部分恶性肿瘤的预后预测因子。MICA基因在多种恶性肿瘤的发病机制中具有重要作用，可能为恶性肿瘤防治带来新的思路。