禽流感病毒T细胞表位与体外重建鸡MHCⅠ类分子结合试验

为探讨体外重建的MHCⅠ复合体BF2-linker-β2 m鉴定病毒抗原肽系统能否在体外结合抗原多肽,以及不同类的MHCⅠ类分子结合相同和不同抗原多肽表位能力的差异,本研究采用人工合成的禽流感病毒的3条多肽,猪口蹄疫病毒的2条多肽,以及来源于草鱼呼肠孤病毒的2条多肽分别与4类体外重建的串联鸡MHCⅠ类分子复合体BF2-linker-β2 m进行了体外结合试验。BF2-linker-β2 m与不同的病毒抗原九肽按照1∶10的摩尔比进行混合,作用后取反应混合物离心除去未与MHCⅠ类分子结合的抗原多肽;然后取BF2-linker-β2 m分别与抗原多肽形成的复合体,利用酸洗法将结合的多肽自MHCⅠ类分子的抗原多肽结合槽中洗脱,洗脱后的蛋白和多肽混合物离心收集洗脱的多肽溶液,随后利用C18柱对洗脱的多肽进行去盐、脱酸处理;将多肽样品冻干,用基质溶解后直接点样进行一级质谱(MS)和二级质谱(MSMS)测定,结果表明,3类体外重建的BF2-linker-β2 m可与禽流感病毒多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV结合,而不与禽流感病毒多肽TIGECPKYV以及猪口蹄疫病毒和草鱼呼肠孤病毒的4条多肽结合。证实由于MHCⅠ类分子的多态性导致复等位基因的MHCⅠ类分子结合病毒抗原表位的能力存在差异;病毒的T细胞抗原表位是MHCⅠ类分子限制性的;KILTIYSTV和LLLAIVSLV是禽流感病毒的候选表位。

乳腺癌组织中C-erbB-2蛋白和MHCⅠ类分子表达与预后的关系

目的了解乳腺癌组织中C-erbB-2蛋白和MHCⅠ类分子表达与预后的关系。方法58例乳腺癌根据有无淋巴结转移分为淋巴结转移组和淋巴结未转移组;根据组织学分级分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级。应用免疫组织化学S-P法检测乳腺癌组织C-erbB-2蛋白表达;应用流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达。结果乳腺癌淋巴结转移组C-erbB-2蛋白的阳性表达率(84.2%)明显高于淋巴结未转移组(41.0%);C-erbB-2蛋白在Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级的阳性表达率分别为42.1%、55.5%和75.0%;MHCⅠ类分子在Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级的阳性表达率分别为50.21%±15.70%、30.17%±16.23%和14.27%±9.36%。结论C-erbB-2蛋白和MHCⅠ类分子的表达可作为判断乳腺癌预后的重要指标。

重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子Kb(Kb EGFP融合蛋白 ) ,并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子KbcDNA ,克隆入真核表达载体pEGFP N1中EGFP分子的上游 ,脂质体转染COS 7细胞 ,G4 18加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒 ,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误 ,转染COS 7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光 ,特征性地分布于细胞质膜 ,及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的Kb EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布 ,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征 。

MHCⅠ类分子在内质网中的组装研究进展

MHCI类分子在内质网中组装形成肽 MHC复合体。抗原肽主要来自于胞内蛋白 ,在蛋白酶体作用下形成的 8～ 10个氨基酸小肽。内质网中的多个伴侣分子与I类分子相互作用形成肽组装复合体。这些伴侣分子对于Ⅰ类分子的有效组装以及配体的选择均有重要作用。

MHC Ⅰ类分子限制性抗原的加工与递呈

MHC分子限制性抗原的加工与递呈是近年基础免疫学研究热点之一。MHCⅠ类分子将加工后的抗原递呈给CD8T淋巴细胞，此路径的抗原加工与递呈由于其重要性而受到广泛重视，本文就近年来这一领域的研究成果作一综述。

新疆哈萨克绵羊MHC Ⅰ类分子基因的克隆与生物信息学分析

为了研究新疆哈萨克绵羊主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子基因序列的多态性,采用PCR和测序的方法分别克隆新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链和轻链的c DNA全长,并进行生物信息学分析。结果表明:成功扩增出新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链、轻链,大小分别为1 107 bp、357 bp;通过生物信息学软件预测蛋白质分子质量分别为90 ku和29.694 ku;等电点(p I)分别为5.00,5.23;重链富含G、C碱基,有两段跨膜螺旋,最大疏水指数为3.622,最小疏水指数为-2.922,预测整条肽链表现为亲水性,在1~84位碱基之间存在信号肽;轻链四种碱基含量基本一致,也有两段跨膜螺旋,在1~63位碱基之间存在信号肽。新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因编码蛋白质的二级结构以无规则卷曲元件的含量最高,该蛋白质的三级结构由一条α链,另一条为β链通过非共价键组成,由α1、α2组成抗原结合槽;NCBI数据库中不同地区的哈萨克绵羊的MHCⅠ类分子基因的同源性在89.87%~99.91%之间,与数据库中牛的MHCⅠ类分子基因同源性达到了98.88%,轻链MHCⅠ类分子基因还与猪和人的同源性相对较高。

细胞因子对小鼠肺癌细胞MHC Ⅰ类分子和共刺激分子的调节作用

目的观察T细胞活化因子对小鼠肺癌细胞表达MHCⅠ类分子和共刺激分子的调节作用,探讨细胞因子增强特异性抗肿瘤应答的免疫效果。方法用rhIL-2和IFN-γ分别活化对数生长期的小鼠lewis肺癌3LL细胞48h,FACS检测细胞因子活化前后3LL细胞表达MHCⅠ类分子(H-2)和共刺激分子(CD80)的荧光强度。结果3LL细胞低表达H-2和CD80,经rhIL-2和IFN-γ活化48h后,3LL表达H-2和CD80的荧光强度明显增强,rhIL-2的活化的两种分子荧光强度高于IFN-γ。结论rhIL-2和IFN-γ能上调小鼠lewis肺癌3LL细胞表面MHCⅠ类分子和共刺激分子的表达,增强体内特异性抗肿瘤免疫应答。

MHC Ⅰ类分子胞内组装、转运及其调控机制的研究进展

MHC Ⅰ类分子是启动机体免疫应答的重要分子。当细胞遭受病毒感染或本身发生癌变,MHCⅠ类分子能结合病毒或癌变细胞蛋白降解形成的多肽,向CD8+T细胞报告病毒或者肿瘤的存在,从而促使其对异常细胞的杀伤。在此过程中,MHCⅠ类分子的胞内转运途径精密调控着免疫应答的效率,但目前对MHCⅠ类分子在胞内转运途径的机制了解不多。本综述就MHCⅠ类分子在内质网的组装、外运以及内吞后降解或再循环过程中的主要机制做一阐述,并且介绍一些新发现的相关调控分子。

基于TAP分子亲和力模型预测MHCⅠ类分子提呈短肽的免疫原性

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子亲和力模型有助于筛选出候选短肽,为实验确定可以与MHCⅠ类分子形成复合物从而激活细胞毒性T细胞的短肽提供帮助;抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)分子亲和力模型也可用于筛选候选短肽;如何更好利用两类亲和力模型筛选出候选短肽、这两类亲和力模型对短肽选择性的异同以及这种选择性异同的生物学机制尚不清楚.本文重新整理了TAP亲和力测试集,使训练样本达到699个;使用核函数平衡矩阵算法建立的TAP亲和力模型预测精度高于同类算法,5折交叉检验Pearson相关系数0.89;结合HLA A3分子亲和力模型、TAP亲和力模型显著提高免疫原性短肽预测精度,AUC值从~0.82上升到0.87.提高的原因是两个亲和力模型对第2、9位置"最佳"氨基酸不同偏好性和这种不同偏好的互补性造成的.TAP分子与短肽模拟对接结果反映了这个结论.TAP亲和力可在线预测(http://www.bilologymaths.top/mbtwo/major.aspx).

NK细胞识别MHC Ⅰ类分子的机理

人及鼠Ｎ细胞上抑制性受体的结构功能已研究得较为清楚了，其识别ＭＨＣⅠ类分子的机理公认的为“失去自己”假说，具体作用模式为效应抑制模式和靶干扰模式，前者已越来越为实验所证实。本文对效应抑制模式的信号传导机制及ＮＫ细胞抑制性受体识别ＭＨＣⅠ类分子位点的研究进行了综述。

经典MHCⅠ类分子在神经系统中功能的研究进展

经典MHCⅠ类分子是在免疫系统中被发现并发挥重要作用的免疫蛋白。既往研究认为中枢神经系统是免疫豁免区。在正常生理条件下,神经细胞不表达经典MHCⅠ类分子。然而近年来发现其不仅在中枢神经系统中呈时空特异性表达并调节大脑发育和突触可塑性,且在众多神经系统疾病中异常表达并发挥一定作用。本文就经典MHCⅠ类分子在神经系统中功能的研究进展进行综述,以期全面理解MHCⅠ类分子在神经系统中的作用。

K562和K562/AO2细胞HLA I类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLAI类分子和MHCI类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAI类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAI类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHCⅠ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化。结果表明:K562和K562/AO2细胞均不表达HLAI类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2明显增高(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比10∶1时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性。结论:MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLAI类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。

淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析

典型的主要组织相容性复合体（MHC）是抗原递呈的关键分子,具有重要的免疫功能,与多种疾病密切相关。为深入了解地方品种鸡MHCⅠ类α分子的特征,尤其是抗原结合区域的特点,通过RT-PCR技术获得了29个淮南麻黄鸡完整的α链基因,并进行了分析。结果显示,淮南麻黄鸡MHCⅠα分子高度多态,但主要集中在α1和α2区域,该区变异氨基酸位点共68个,其中高度变异22个。淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域氨基酸序列同源性介于79.3%-99.5%之间,仅少部分序列完全一致。鸡氨基酸序列同源性与鸭较高,介于57.6%-64.1%之间;其次为人和鼠。进化分析显示,淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域分属于两个类群,但未显示明显的品种差异。此外,鸡与鸭的亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。研究结果表明,淮南麻黄鸡MHC分子在进化过程中呈现高度的多态性,但受到病原体的选择压力,多态性主要位于抗原肽结合部分的α1和α2区域。

主要组织相容性复合体I类分子抗原肽

被主要组织相容性复合体(MHC)I类分子呈递在细胞表面的抗原肽大部分来源于细胞内新合成蛋白质的降解产物,抗原肽直接体现细胞内功能蛋白质的部分变化,蛋白酶体、氨肽酶和抗原转运体(TAP)参与调控抗原肽的生成。在MHC的组装、折叠过程中,抗原肽促进各亚基的结合和折叠进程;而在起始细胞的免疫应答过程中,抗原肽不仅诱导T细胞抗原受体的特异结合,更为重要的是延长MHC同T细胞抗原受体特异结合的作用时间。

癌胚抗原低亲和力表位改造中的分子对接

目的通过分子对接方法筛选表位改造后的高亲和力CTL表位。方法在图形工作站上,将癌胚抗原来源的低亲和力表位及其N末端第一位残基以酪氨酸替换后的突变体,分别与MHCⅠ类分子进行对接,对接所得最佳构象进行600ps分子动力学模拟修正。结果改造后的突变体与MHC分子间存在较强的氢键和疏水相互作用,组成肽结合槽口袋A的残基Tyr7、Tyr171和Tyr159与多肽N末端形成稳定的氢键作用网络,并且P1位酪氨酸上的苯环可与Trp167上的苯环发生ππ堆积作用。结论分子对接模型预测的肽MHC复合物作用模式,提示改造后的突变体与MHCⅠ类分子间具有更高的亲和力,与实验结果一致。

非经典MHC Ⅰ类分子与免疫调节

从线虫到人类,在病原体识别、信号转导途径及效应机制等方面均高度相似,这些防御机制有着共同的进化起源。至今研究过的脊椎动物中,都存在结构与功能相似的主要组织相容性复合体(MHC),即一组紧密连锁的高度多态性基因组成的染色体区域,其产物表达在不同细胞表面。人类MHC,又称白细胞抗原(HLA)系统,位于第6号染色体短臂(6p21.31),跨度3.6 Mb,是免疫功能相关基因最集中、基因密度最高、多态性最丰富、与疾病关联最密切的一个区域。

点突变p53抗原肽的预测及其与MHCⅠ类分子的结合

目的从肿瘤抗原的全长氨基酸序列中预测肿瘤抗原肽，据此指导肿瘤肽疫苗的设计和制备。方法采用基序（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓｍｏｔｉｆ）预测法，经计算机ＰＥＰＭＯＴＩＦ软件预测含点突变的小鼠ｐ５３蛋白肽，并建立一个计分系统来估测预测肽与ＭＨＣⅠ类分子结合的可能性，进一步通过ＭＨＣⅠ类分子－肽结合试验和ＭＨＣⅠ类分子－肽结合稳定性试验检测它们与ＭＨＣⅠ类分子的结合力和亲和力。结果预测了３条肽，其中ｍｐ５３Ｐ１３２Ｆ（ＬＮＫＬＦＦＱＬ）能与Ｈ－２Ｋｂ结合而不与Ｈ－２Ｄｂ结合；ｍｐ５３Ｐ２４６Ｓ（ＭＧＧＭＮＲＳＰＩＬ）和ｍｐ５３Ｐ２７０Ｃ（ＧＲＤＳＦＥＶＣＶ）既不与Ｈ－２Ｋｂ结合也不与Ｈ－２Ｄｂ结合。肽与ＭＨＣⅠ类分子之间的结合与用计分系统计算的肽积分高低有关，即高分值的肽能与相应的ＭＨＣⅠ类分子结合。结论计算机ＰＥＰＭＯＴＩＦ软件配合肽计分是简便有效的ＭＨＣⅠ类分子结合肽预测法。

人NK细胞对同种和异种内皮细胞MHCⅠ类分子的差异识别

以ＨＵＶＥＣ和ＰＡＥＣ为靶细胞，人ＰＢＮＫ和ＮＫ９２为效应细胞，研究了人ＮＫ 细胞对同种和异种内皮细胞杀伤的差异性；并通过酸处理内皮细胞及抗体封闭 ＭＨＣＩ 类分子、ＣＤ９４和ＫＩＲ（ＮＫＢ１），研究了ＭＨＣⅠ类分子对人ＮＫ细胞杀伤ＨＵＶＥＣ和ＰＡＥＣ 的影响．结果表明，ＰＢＮＫ和ＮＫ９２对ＰＡＥＣ的杀伤均大于对ＨＵＶＥＣ的杀伤．酸处理 后，两种ＮＫ细胞对ＨＵＶＥＣ杀伤的增加幅度大于对ＰＡＥＣ的；此外，抗ＣＤ９４单抗未 能改变ＮＫ的杀伤效应；ＫＩＲ（ＮＫＢ１）封闭使ＰＢＮＫ杀伤ＨＵＶＥＣ增加９５％，杀伤ＰＡＥＣ 仅增加 ２９％．以上结果提示： ＮＫ细胞对异种内皮细胞 ＭＨＣⅠ类分子的差异识别作用 可能是ＮＫ细胞杀伤ＰＡＥＣ的主要原因，而ＫＩＲ很可能是ＮＫ杀伤内皮细胞时主要的 传递抑制信号的受体．