LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的:分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A and B,MICA/B)的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法:用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶(ataxia telangiectasia mutated and Rad3-related kinase,ATM/ATR),加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pynolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB),观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果:三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到(1.68±0.17)、(2.54±0.25)、(3.42±0.15)倍(P<0.05);MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍(P<0.05)。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高(P<0.05)。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高(P<0.05)。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达(P<0.05),且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、5、10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍(P<0.001),MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍(P<0.05),MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍(P<0.001),表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC(10、50、100μmol/L),MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制(P<0.05),提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论:拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。

血浆可溶性MICA/B水平与慢性HIV感染者疾病进展的相关性研究

目的探讨主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子链相关抗原A/B(MICA/B)与HIV感染及疾病进展的关系。方法选取2013年1月至2014年12月首都医科大学附属北京佑安医院未经抗病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)的慢性HIV感染者60例,采用流式细胞术检测CD4+T细胞计数,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中可溶性MICA/B(sMICA/B)水平,Spearman秩和检验分析sMICA/B水平与CD4+T细胞的计数和病毒载量(viral load,VL)的相关性。结果与健康对照组比较,HIV感染者血浆sMICA水平显著增高[(109.7±69.8)pg/ml比(32.0±17.1)pg/ml,P<0.001],血浆sMICB水平与健康对照组比较差异无统计学意义[(694.8±251.3)pg/ml比(535.6±191.0)pg/ml,P=0.050]。HIV感染者中,10 000拷贝/ml≤VL≤100 000拷贝/ml组血浆sMICA水平显著高于健康对照组、VL>100 000拷贝/ml组和VL<10 000拷贝/ml组(P<0.001,P=0.002,P=0.001),而VL>100 000拷贝/ml组血浆sMICB水平显著高于健康对照组(P=0.027)。此外,血浆sMICB水平与VL显著相关(r=0.384,P=0.003)。结论血浆中sMICA/B的水平与慢性HIV感染者病毒载量增加相关,可能成为预测HIV感染者疾病进展的标志。

高浓度葡萄糖通过Bmi1促进小儿肾母细胞瘤免疫逃逸的机制研究

目的:探讨B细胞特异性MLV整合位点-1(Bmi1)在高浓度葡萄糖介导的小儿肾母细胞瘤逃逸自然杀伤细胞(NK细胞)免疫杀伤中的作用及其机制。方法:免疫组化检测小儿肾母细胞瘤组织和肾母细胞瘤细胞G401中Bmi1的表达;实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法和流式细胞术检测不同浓度葡萄糖处理的G401细胞中Bmi1、MHCⅠ类多肽相关序列A(MICA)、MICB的mRNA及蛋白表达水平;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对不同浓度葡萄糖处理的G401细胞的杀伤敏感性。结果:Bmi1在小儿肾母细胞瘤组织和G401细胞中高表达;高浓度葡萄糖处理G401细胞可促进Bmi1表达,抑制MICA和MICB表达,降低NK细胞对G401细胞的杀伤敏感性;沉默Bmi1促进高浓度葡萄糖处理的G401细胞的MICA和MICB表达,增强NK细胞对G401细胞的杀伤敏感性。结论:高浓度葡萄糖通过促进Bmi1表达,抑制MICA和MICB表达,降低NK细胞对G401细胞的杀伤敏感性。

肿瘤对自然杀伤细胞的杀伤敏感性研究

自然杀伤细胞(NK细胞)是机体抗肿瘤的第一道防线,是机体天然免疫的主要承担者,也是获得性细胞免疫的核心调节细胞。NK细胞对肿瘤的杀伤活性与其细胞表面受体和肿瘤细胞表面的配体密切相关,由于肿瘤细胞表面配体表达不同致使对NK细胞杀伤的敏感性有很大差异,临床疗效不一。我们简要介绍了影响肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性的机制,对目前提高肿瘤细胞敏感性的策略和方法进行了总结。

高表达CREB对食管腺癌细胞增殖、侵袭及NK细胞杀伤活性的影响

目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(CREB)对食管腺癌细胞增殖、侵袭及NK细胞杀伤活性的影响。方法选取2017年3月至2019年12月陕西省人民医院收治的23例食管腺癌患者,免疫组织化学法检测食管腺癌组织和癌旁正常组织中CREB的蛋白表达,体外培养食管腺癌细胞TE-10,将转染si-NC的TE-10细胞设置为对照组,将转染si-CREB的TE-10细胞设置为si-CREB组。Western blot检测细胞中CREB、MHCⅠ类链相关蛋白A(MICA)与MHCⅠ类链相关蛋白B(MICB)的表达;流式细胞术检测MICA与MICB的表达;克隆形成实验与Transwell实验检测TE-10细胞的增殖及侵袭能力;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对TE-10细胞的杀伤活性。结果食管腺癌组织中CREB的表达高于癌旁正常组织(P<0.05);食管腺癌细胞TE-10中CREB的蛋白表达量高于人正常食管上皮细胞HEEC(P<0.05)。si-CREB组TE-10细胞增殖及侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),MICA与MICB的蛋白表达量、NK细胞对TE-10细胞的杀伤率显著高于对照组(P<0.05)。结论CREB在食管腺癌组织及细胞中高表达。沉默CREB可抑制食管腺癌细胞增殖与侵袭,上调MICA与MICB表达,增强NK细胞对食管腺癌细胞的杀伤敏感性。