稀有鮈鲫MHCⅡβ基因克隆及鲁氏耶尔森菌感染后的表达分析

为探究稀有鮈鲫MHCⅡβ基因的分子特征及其表达特点,采用PCR扩增技术获得了稀有鮈鲫MHCⅡβcDNA序列810 bp,包括开放阅读框(ORF)759 bp,编码252个氨基酸。生物信息分析表明,MHCⅡβ氨基酸序列存在4个保守的半胱氨酸残基和GXXGXXXGXXXXXXG结构,与其他亲缘鱼类的一致性为51.78%~80.56%,其编码的蛋白质分子包括1个信号肽、1个MHCⅡβ(β-1)结构域、1个IGc1(β-2)结构域和1个跨膜螺旋区域。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,MHCⅡβ在脾脏表达量最高,头肾、鳃、皮肤表达量较高。人工感染鲁氏耶尔森菌后,6 h时在头肾表达呈显著上调,肝脏中在12 h开始出现极显著上调,皮肤中在24 h和48 h表达极显著,鳃中在6~24 h表达极显著,脾脏中则是在6 h出现极显著下调,于96 h接近对照组表达水平。初步研究表明,MHCⅡβ在鱼类抵御细菌感染的免疫反应中发挥着重要作用,为进一步揭示稀有鮈鲫MHC家族的功能提供了参考依据。

RNAi干扰MHCⅡ基因表达后的骨髓间充质干细胞向血管内皮样细胞分化的研究

目的 慢病毒沉默BMSCs中的MHCⅡ基因表达,再向血管内皮样细胞诱导分化;检测慢病毒感染后的BMSCs的增殖活性、分化效应及分化后的免疫原性变化。方法 从大鼠骨髓中分离、培养BMSCs,用慢病毒(LV)沉默MHCⅡ基因的表达,观察其增殖情况。使用血管内皮生长因子(VEGF)诱导感染后的BMSCs向血管内皮样细胞(VEC)分化,观察分化后细胞的形态、蛋白及mRNA是否有变化,电镜下观察细胞质是否出现Weibel-Palade小体。结果 慢病毒感染后的BMSCs生长曲线与未感染的BMSCs无明显差别,增殖活性不受影响。LV-CIITA-BMSCs、LV-NC-BMSCs及BMSCs经过诱导后细胞形态发生变化,细胞质中出现Weibel-Palade小体,诱导后BMSCs的表面标志物CD34、Ⅷ因子及Flt-1 mRNA明显高于未诱导组,各个诱导组之间无统计学意义;LV-CIITA-BMSCs的MHCⅡ蛋白及mRNA表达明显低于LV-NC-BMSCs及诱导后的BMSCs。结论 BMSCs经过慢病毒感染后,不影响其增殖活性及向VEC分化。BMSCs经过分化后,其MHCⅡ蛋白及mRNA表达升高;但是LV-CIITA-BMSCs诱导后MHCⅡ蛋白及mRNA的上升幅度较LV-NC-BMSCs及BMSCs低。

扬子鳄MHCⅡ类B基因第二外元的克隆及序列分析

3头扬子鳄血样取自宣城安徽省扬子鳄繁殖研究中心。利用一对简并引物对MHCⅡ类B基因第二外元的部分片段进行扩增 ;通过克隆、单链构象多态性分析、测序 ,并将测得序列与下载的 8个物种MHC序列比对 ,确定序列差异和变异位点 ;利用MEGA软件构建NJ树 ,PAUP4 0构建MP树。结果得到 10种不同的序列 ,片段长 16 6bp。核苷酸序列中有 38个变异位点 ,氨基酸序列中有 2 3个变异位点 ;推定的抗原结合位点非同义替换 (dN)明显高于同义替换 (dS)。 10种序列的NJ树和MP树极为相似 ,均为A、B两个分支 ,两个分支明显的特异性位点核苷酸序列中有 9个 ,氨基酸序列中有 7个。表明扬子鳄MHCⅡ类B基因第二外元有较高的多态性 ,有利于扬子鳄饲养种群的遗传保护。

西伯利亚鲟MHCⅡβ基因克隆、组织分布及细菌感染后的表达变化

为研究鲟鱼主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443 bp,包括开放阅读框(OFR)801 bp,编码184个氨基酸。Blast分析显示,由MHCⅡβcDNA基因推导的氨基酸序列同其他物种的一致性为46%～83%,通过Smart站点分析,该序列具有SMART MHC_Ⅱ_beta结构域、SMART IGc1结构域和跨膜螺旋结构域;实时定量分析表明,正常情况下MHCⅡβ mRNA在西伯利亚鲟10种组织中均有表达,其中脾、头肾和血液中表达量较高,皮肤和肉中表达量极低(P<0.05);感染维氏气单胞菌Aeromonas veronii 40 h后,脾脏中MHCⅡβ mRNA的表达量显著低于未感染的对照组(P<0.05),直至93 h时恢复至对照组水平且有显著性变化(P<0.05)。研究表明,MHCⅡβ基因参与了西伯利亚鲟的免疫反应。

健脾解毒方延长脾虚肝癌大鼠带瘤生存与MHCⅠ/MHCⅡ的关系

目的:探讨健脾解毒方延长脾虚肝癌模型大鼠带瘤生存及与MHCⅠ/MHCⅡ的关系。方法:105只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、肝癌模型组、脾虚模型组、脾虚肝癌模型组、胸腺五肽组及健脾解毒方低、高剂量组,进行造模和干预。实验中记录动物的体质量、生存时间、肝癌大鼠濒死状态时恶液质积分并采集标本。免疫组化与Western blot方法检测大鼠肝组织及肝癌组织MHCⅠ/MHCⅡ分子表达。结果:健脾解毒方高剂量组和胸腺五肽组累积生存率高于其余各组(P<0.05),且其恶液质评分低于其余各组(P<0.05)。各造模组中,MHCⅠ分子在肝组织中的表达水平高于癌组织,肝组织和癌组织中均以健脾解毒方高剂量组表达最强(P<0.01)。MHCⅡ分子在癌组织表达强于肝组织,肝组织中以健脾解毒方高剂量组表达最强(P<0.01),癌组织中以脾虚肝癌组表达最强(P<0.01)。结论:健脾解毒方能对抗移植瘤导致的恶液质的发生和进展,显著延长荷瘤鼠的生存时间,其作用可能与上调MHCⅠ/MHCⅡ有关。

鸡恒定链分子跨膜区2个氨基酸残基在形成MHCⅡ-Ii复合物中的作用

本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征。用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体。同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡα和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体。用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系。结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象。免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物。因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的。

SED超抗原MHCⅡ类分子结合位点的研究

目的 :运用定点突变技术确定SED超抗原的MHCⅡ结合位点。方法 :首先检测突变体的促T淋巴细胞增殖活性 ;用FITC标记SED ,对增殖活性降低的突变体 ,进一步用竞争结合实验检测其MHCⅡ结合活性。结果 :突变体SEDN2 3A、SEDN2 3A H2 6R和SEDF4 5A 的促增殖活性均显著降低 ,初步推测 2 3、2 6和 4 5位氨基酸可能参与了SED与MHC的相互作用。竞争结合实验证明F4 5位氨基酸是SED与MHCⅡ类分子结合的关键位点。结论 :F4 5位氨基酸是SED与MHCⅡ类分子结合的关键位点 ;2 3和 2 6位氨基酸可能参与了SED与T细胞受体 (TCR)Vβ的识别 。

绵羊MHCⅡ类基因遗传多态性研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是广泛存在于脊椎动物体内的一类高度紧密连锁的基因群,绵羊MHC又称为绵羊淋巴细胞表面抗原(ovine lymphocyte antigen,OLA),位于绵羊20号染色体上,分为Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类区域,其中MHCⅡ类基因具有高度的基因多态性。文章综述了绵羊MHCⅡ类基因的分子结构及遗传多态性,重点总结了近十年来国内外不同绵羊品种MHCⅡ类基因遗传多态性的研究进展,并对绵羊MHCⅡ类基因未来的研究重点进行了展望。

MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用

目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞。用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达。结果未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达。转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子。结论CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础。

MHCⅡ类分子转录激活因子锤头状核酶的生物学活性

目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)锤头状核酶抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。方法设计并克隆针对CⅡTA第464位点的锤头状核酶(Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性鉴定,进一步将Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464),并稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR-、DP-、DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTA mRNA水平。结果细胞外活性鉴定表明,Rz464具有明显的切割活性。细胞内切割实验显示:pRz464阳性Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低了75.93%、64.14%、78.32%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论抗CⅡTA锤头状核酶Rz464可有效抑制MHCⅡ类抗原的表达。

移植心Th细胞免疫偏离与MHCⅡ类抗原表达的关系

目的 :探讨Th细胞免疫偏离与移植心MHCⅡ类抗原表达的关系。方法 :建立大鼠心脏移植模型 ,以同系移植和无移植动物作为对照 ,采用逆转录PCR技术测定移植心Ⅰ、Ⅱ类细胞因子IL - 2、IL - 4mRNA水平变化 ,用免疫组化技术和单克隆抗体测定移植心MHCⅡ类抗原表达。结果 :IL - 2mRNA水平和MHCⅡ类抗原表达随着移植心急性免疫排斥病变发展而显著增加 (P <0 0 1) ,IL - 4mRNA水平则显著降低 (P <0 0 1) ,急性免疫排斥发展到一定阶段Ⅰ、Ⅱ类细胞因子水平出现偏离时MHCⅡ类抗原由低表达变为高表达。结论 :移植心脏急性免疫排斥过程中 ,Th细胞免疫偏离与MHCⅡ类抗原表达变化有相关性 。

几种黏膜免疫佐剂对小肠树突状细胞、MHCⅡ类分子及核转录因子NF-kB的影响

目的研究黏膜免疫佐剂在小肠局部的抗原递呈方式和信号转导途径。方法应用大鼠肠道原位结扎灌注模型观察大豆黄酮、CpGDNA和乳酸杆菌3种黏膜免疫佐剂对树突状细胞、MHCⅡ类分子和核转录因子NF-κB的影响。结果1)CpGDNA和乳酸杆菌能够显著增加小肠树突状细胞的面积,促进局部疫苗抗原的递呈;2)大豆黄酮、CpGDNA和乳酸杆菌能在24h内促进大鼠空肠MHCⅡ类分子的显著表达。提示黏膜免疫佐剂可能通过增强黏膜局部抗原递呈细胞的活性和MHCⅡ类分子的含量促进局部特异性免疫反应;3)CpGDNA可以在24h内显著增加细胞内NF-κB蛋白的含量,在0.25h作用最明显;乳酸杆菌在6h内可极显著增加NF-κB蛋白的表达;而大豆黄酮对细胞内NF-κB蛋白的含量作用不明显。结论提示细菌类佐剂CpGDNA和乳酸杆菌是通过活化NF-κB途径激发免疫活性细胞,大豆黄酮可能不通过该途径。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠创伤后MHCⅡ类分子表达的改善作用

目的：探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对创伤小鼠巨噬细胞抗原提呈功能的影响。方法：以双股骨骨折致伤小鼠，伤后连续５天注射ＧＭ－ＣＳＦ，观察巨噬细胞Ｉａ抗原的表达。结果：创伤后小鼠巨噬细胞Ｉａ表达明显降低，ＧＭ－ＣＳＦ治疗组Ｉａ表达恢复早而快，伤后第３天开始显著高于对照组。结论：ＧＭ－ＣＳＦ能够促进创伤后巨噬细胞抗原提呈功能的恢复。

靶向CⅡTA基因siRNA对大鼠角膜基质细胞MHCⅡ基因表达影响的研究

目的:探讨靶向主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类抗原转录激活因子(MHCⅡtransactivator CⅡTA)的化学合成小干扰RNA(small interfering RNA)抑制大鼠角膜基质细胞表面的MHCⅡ类抗原表达的可行性。方法:设计并合成靶向CⅡTA基因的5条siRNA,分离并培养大鼠角膜基质细胞,经重组大鼠IFN-γ刺激后,在阳离子脂质体的介导下,将siRNA转染大鼠角膜基质细胞。于转染后24h收集细胞,用荧光定量PCR方法检测CⅡTA和MHCⅡmRNA水平的变化;流式细胞仪检测MHCⅡ抗原表达的变化。结果:大鼠角膜基质细胞经重组大鼠IFN-γ刺激后,CⅡTA和MHCⅡ的表达大幅增强。荧光定量PCR检测显示化学合成的5条siRNA通过脂质体转染大鼠角膜基质细胞后,均能不同程度地抑制CⅡTA和MHCⅡ的表达,与对照组具有显著差异(P<0·01)。其中siRNA-4组的抑制作用最明显,对CⅡTA、MHCⅡ基因的mRNA抑制率分别为95·10%±1·25%、82·70%±1·95%。流式细胞仪检测显示siR-NA-4组对MHCⅡ抗原分子表达抑制率为81·90%±1·23%。结论:在大鼠角膜基质细胞中,靶向CⅡTAsiRNA抑制了自身mRNA表达,并阻止其调控的MHCⅡ类分子的相应表达。从而为进一步研究利用siRNA技术抑制MHCⅡ的表达防治角膜缘移植排斥反应提供了实验依据。

内毒素对创伤小鼠巨噬细胞凋亡和MHCⅡ抗原表达的作用

目的 探讨内毒素注射对创伤小鼠巨噬细胞凋亡和MHCII抗原表达的作用。方法 60只小鼠以双股骨骨折及软组织挤压致伤 ,伤后次日静脉注射内毒素 (1mg·kg-1 ) ,对照组注射等量生理盐水。观察腹腔和肺泡巨噬细胞凋亡和Ia抗原的表达。结果 创伤后巨噬细胞凋亡数量逐渐增多 ,内毒素注射后明显增多 ,两组比较差异显著。创伤后小鼠巨噬细胞Ia表达明显降低 ,伤后第 1天为最低水平 ,第 7天恢复至接近正常。注射内毒素后Ia表达降低更为剧烈 ,持续在较低水平。结论 创伤后巨噬细胞发生凋亡和MHCⅡ表达异常 。

MHCⅡ类抗原与扁平苔藓

ＭＨＣⅡ类抗原与扁平苔藓湖北医科大学口腔医学院管志江，赵心臣综述李辉审校ＭＨＣⅡ类抗原在人类称为ＨＬＡ－Ⅱ类抗原，它是存在于第六对染色体短臂上一组密切连锁基因群的表达产物，在机体的免疫反应中起调节作用。扁平苔藓（ＬＰ）是较为常见的皮肤、粘膜病，被ＷＨ...

MHCⅡ类反式激活因子与病毒感染的关系

MHCⅡ类反式激活因子(ClassⅡtransactivator,CⅡTA)通过调控细胞是否表达MHCⅡ类分子及其水平而决定宿主是否对外来病毒感染产生免疫应答及其程度,从而影响病毒感染的发生、发展与转归。本文介绍了CⅡTA的结构与功能、IFNγ诱导MHCⅡ类基因表达的机制及CⅡTA分子与病毒间的相互作用。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织树突细胞CD80、CD86、MHCⅡ表达的影响

目的观察平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织树突细胞(DCs)CD80、CD86、MHCⅡ表达的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为空白组、哮喘组、自噬抑制剂组、平喘颗粒组,每组10只。除空白组外,其余各组均注射卵清蛋白(OVA)致敏液造成慢性哮喘动物模型,空白组则以生理盐水代替OVA激发。空白组、哮喘组给予生理盐水灌胃;自噬抑制剂组在第2次致敏后第4天开始给予60μg/g氯喹腹腔注射,激发阶段则每次激发前1 h给予氯喹腹腔注射;平喘颗粒组给予中药药液灌胃,时间同自噬抑制剂组。取各组大鼠肺组织切片,光镜下检测肺组织炎性浸润情况、DCs浸润情况,采用流式细胞仪检测DCs表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平。结果与空白组比较,哮喘组大鼠肺组织中可见明显的炎性细胞浸润灶,DCs浸润数量增多(P<0.05);与哮喘组比较,自噬抑制剂组和平喘颗粒组肺组织炎性浸润情况及DCs浸润数量均有不同程度的减轻(P<0.05)。与空白组比较,哮喘组DCs表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平升高(P<0.05);与哮喘组比较,自噬抑制剂组和平喘颗粒组DCs表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平降低(P<0.05);与自噬抑制剂组比较,平喘颗粒组DCs表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平相当(P>0.05)。结论平喘颗粒可以通过降低哮喘大鼠肺组织DCs表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平,改善哮喘大鼠肺组织中的炎症反应及DCs浸润情况,抑制哮喘的发生。

MHCⅡ类分子与自身免疫性疾病

ＭＨＣⅡ类分子与自身免疫性疾病杨志章综述吴雄文，赵修竹审阅自身免疫性疾病（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是指机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答，产生自身抗体及（或）自身致敏淋巴细胞，攻击自身靶抗原细胞和组织，使其产生病理改变和功能障碍而导...