SED超抗原MHCⅡ类分子结合位点的研究

目的 :运用定点突变技术确定SED超抗原的MHCⅡ结合位点。方法 :首先检测突变体的促T淋巴细胞增殖活性 ;用FITC标记SED ,对增殖活性降低的突变体 ,进一步用竞争结合实验检测其MHCⅡ结合活性。结果 :突变体SEDN2 3A、SEDN2 3A H2 6R和SEDF4 5A 的促增殖活性均显著降低 ,初步推测 2 3、2 6和 4 5位氨基酸可能参与了SED与MHC的相互作用。竞争结合实验证明F4 5位氨基酸是SED与MHCⅡ类分子结合的关键位点。结论 :F4 5位氨基酸是SED与MHCⅡ类分子结合的关键位点 ;2 3和 2 6位氨基酸可能参与了SED与T细胞受体 (TCR)Vβ的识别 。

MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用

目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞。用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达。结果未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达。转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子。结论CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础。

绵羊MHCⅡ类基因遗传多态性研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是广泛存在于脊椎动物体内的一类高度紧密连锁的基因群,绵羊MHC又称为绵羊淋巴细胞表面抗原(ovine lymphocyte antigen,OLA),位于绵羊20号染色体上,分为Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类区域,其中MHCⅡ类基因具有高度的基因多态性。文章综述了绵羊MHCⅡ类基因的分子结构及遗传多态性,重点总结了近十年来国内外不同绵羊品种MHCⅡ类基因遗传多态性的研究进展,并对绵羊MHCⅡ类基因未来的研究重点进行了展望。

MHCⅡ类分子转录激活因子锤头状核酶的生物学活性

目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)锤头状核酶抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。方法设计并克隆针对CⅡTA第464位点的锤头状核酶(Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性鉴定,进一步将Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464),并稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR-、DP-、DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTA mRNA水平。结果细胞外活性鉴定表明,Rz464具有明显的切割活性。细胞内切割实验显示:pRz464阳性Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低了75.93%、64.14%、78.32%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论抗CⅡTA锤头状核酶Rz464可有效抑制MHCⅡ类抗原的表达。

移植心Th细胞免疫偏离与MHCⅡ类抗原表达的关系

目的 :探讨Th细胞免疫偏离与移植心MHCⅡ类抗原表达的关系。方法 :建立大鼠心脏移植模型 ,以同系移植和无移植动物作为对照 ,采用逆转录PCR技术测定移植心Ⅰ、Ⅱ类细胞因子IL - 2、IL - 4mRNA水平变化 ,用免疫组化技术和单克隆抗体测定移植心MHCⅡ类抗原表达。结果 :IL - 2mRNA水平和MHCⅡ类抗原表达随着移植心急性免疫排斥病变发展而显著增加 (P <0 0 1) ,IL - 4mRNA水平则显著降低 (P <0 0 1) ,急性免疫排斥发展到一定阶段Ⅰ、Ⅱ类细胞因子水平出现偏离时MHCⅡ类抗原由低表达变为高表达。结论 :移植心脏急性免疫排斥过程中 ,Th细胞免疫偏离与MHCⅡ类抗原表达变化有相关性 。

几种黏膜免疫佐剂对小肠树突状细胞、MHCⅡ类分子及核转录因子NF-kB的影响

目的研究黏膜免疫佐剂在小肠局部的抗原递呈方式和信号转导途径。方法应用大鼠肠道原位结扎灌注模型观察大豆黄酮、CpGDNA和乳酸杆菌3种黏膜免疫佐剂对树突状细胞、MHCⅡ类分子和核转录因子NF-κB的影响。结果1)CpGDNA和乳酸杆菌能够显著增加小肠树突状细胞的面积,促进局部疫苗抗原的递呈;2)大豆黄酮、CpGDNA和乳酸杆菌能在24h内促进大鼠空肠MHCⅡ类分子的显著表达。提示黏膜免疫佐剂可能通过增强黏膜局部抗原递呈细胞的活性和MHCⅡ类分子的含量促进局部特异性免疫反应;3)CpGDNA可以在24h内显著增加细胞内NF-κB蛋白的含量,在0.25h作用最明显;乳酸杆菌在6h内可极显著增加NF-κB蛋白的表达;而大豆黄酮对细胞内NF-κB蛋白的含量作用不明显。结论提示细菌类佐剂CpGDNA和乳酸杆菌是通过活化NF-κB途径激发免疫活性细胞,大豆黄酮可能不通过该途径。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠创伤后MHCⅡ类分子表达的改善作用

目的：探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对创伤小鼠巨噬细胞抗原提呈功能的影响。方法：以双股骨骨折致伤小鼠，伤后连续５天注射ＧＭ－ＣＳＦ，观察巨噬细胞Ｉａ抗原的表达。结果：创伤后小鼠巨噬细胞Ｉａ表达明显降低，ＧＭ－ＣＳＦ治疗组Ｉａ表达恢复早而快，伤后第３天开始显著高于对照组。结论：ＧＭ－ＣＳＦ能够促进创伤后巨噬细胞抗原提呈功能的恢复。

MHCⅡ类抗原与扁平苔藓

ＭＨＣⅡ类抗原与扁平苔藓湖北医科大学口腔医学院管志江，赵心臣综述李辉审校ＭＨＣⅡ类抗原在人类称为ＨＬＡ－Ⅱ类抗原，它是存在于第六对染色体短臂上一组密切连锁基因群的表达产物，在机体的免疫反应中起调节作用。扁平苔藓（ＬＰ）是较为常见的皮肤、粘膜病，被ＷＨ...

MHCⅡ类反式激活因子与病毒感染的关系

MHCⅡ类反式激活因子(ClassⅡtransactivator,CⅡTA)通过调控细胞是否表达MHCⅡ类分子及其水平而决定宿主是否对外来病毒感染产生免疫应答及其程度,从而影响病毒感染的发生、发展与转归。本文介绍了CⅡTA的结构与功能、IFNγ诱导MHCⅡ类基因表达的机制及CⅡTA分子与病毒间的相互作用。

恒定链胞浆尾部在MHCⅡ类分子递呈抗原中的作用研究进展

ＭＨＣⅡ类分子的主要作用是递呈外源性抗原，恒定链（Ｉｉ）是其递呈抗原过程中的重要辅助分子。恒定链的作用包括其胞外部分对ＭＨＣⅡ类分子抗原结合位点的阻断作用，其胞浆尾部所提供的ＭＨＣⅡＩｉ复合体的分选／内化信号以及Ｉｉ自身的初步降解释放ＭＨＣⅡ类分子的信号。本文综述了Ｉｉ胞浆尾部ＭＨＣＩｉ复合体分选／内化信号的定位、结构和功能。

CⅡTA核酶对肝细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制

目的:探讨抗CⅡTA核酶对肝细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制作用。方法:设计并克隆针对CⅡTA第134、218及464位点的核酶(分别为Rz134、Rz218、Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性筛选。将切割作用明显的Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464)进行细胞内切割分析。pRz464稳定转染人胎肝细胞,流式细胞术检测MHCⅡ(HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTAmRNA水平。结果:pRz464肝细胞表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ的诱导型表达分别为(1.01±0.51)%、(4.37±1.28)%和(1.98±0.42)%,与对照组比较分别下调90.65%、89.11%及65.32%;同时CⅡTA的诱导型mRNA含量明显减少(P<0.01)。结论:抗CⅡTA核酶-Rz464降低了CⅡTA的mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。

抗CⅡTA的核糖核酸酶P对Jurkat细胞MHCⅡ类分子表达的抑制作用

本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-3408-GS亚克隆入psNAV载体并稳定转染Jurkat细胞株,采用流式细胞术检测该细胞表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平。结果表明:在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,M1-3408-GS阳性Jurkat细胞株与对照组比较,其表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ抗原诱导型表达分别降低了83.17%、94.12%及84.31%;同时CⅡTA的mRNA含量明显降低(P<0.05,t=4.89)。结论:抗CⅡTA的M1-RNA(M1-3408-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。

异基因型和同基因型MHCⅡ类基因转染对小鼠肥大细胞瘤免疫原性的影响

目的 :提高肿瘤细胞的免疫原性。方法 :将异基因型或同基因型的MHCⅡ类基因转染至小鼠肥大细胞瘤P815中 ,用此细胞接种同系小鼠 ,1个月后给不成瘤的小鼠再接种野生型P815细胞 ,观察小鼠的存活情况。结果 :转同基因型MHCⅡ基因的P815细胞接种同系小鼠后 ,4/ 10不成瘤 ,而异基因型MHCⅡ基因转染组 ,10 / 10不成瘤。 1个月后给不成瘤的小鼠再接种野生型的P815细胞 ,同基因型转染组 2 / 4不成瘤 ,异基因型转染组 7/ 10不成瘤。结论 :研究说明MHCⅡ基因转染具有使肿瘤细胞的致瘤性下降、免疫保护能力提高的作用 ;并且异基因型比同基因型MHCⅡ类基因转染的效果更佳。

MHCⅡ类分子在CNS胶质细胞上的表达

本文简要介绍了MHCⅡ类分子表达的调控机制 ,MHCⅡ类分子及其协同刺激因子在CNS中的小胶质细胞及星形胶质细胞上的表达及其在多发性硬化发病过程中所起的作用。

内蒙古地区布氏田鼠种群MHCⅡ类基因第二外显子的遗传分析

以MHCⅡ类基因第二外显子(MHC classⅡexon 2)为分子标记,用限制性酶切多态性和直接测序的方法对分布于内蒙古地区的8个布氏田鼠种群共460个个体进行种群遗传结构的分析.结果显示,酶切共检测到6个等位基因,13个酶切多态性位点,卡方检验显示,各种群在6个酶切多态性位点上基因型频率不符合Hardy-Weinberg平衡.序列分析显示,在长度261 bp的核苷酸序列中,有57个变异位点,定义21种单倍型,其中有1个单倍型为不同区域种群所共享,其余20个单倍型均为各区域种群所特有.7个地理种群的单倍型多样性和核苷酸多样性较高,1个地理种群较低.谱系分析显示,8个布氏田鼠地理种群分为3个进化分支,分别与采集的地理种群相吻合:同一地理种群内单倍型之间遗传差异小,而不同地理来源的单倍型之间存在较大区别.Mentel检测表明,布氏田鼠的遗传分化与地理距离呈现正相关.AMOVA分析结果同样表明地理种群之间存在差异:各区域类群间变异组分占总变异比率的60.48%,区域内种群间变异组分占总变异比率的7.78%,种群内个体间变异组分占总变异比率的28.14%;遗传分化系数和基因流分析显示,布氏田鼠种群出现一定程度的分化,但正镶白旗种群与其他种群之间遗传分化显著.布氏田鼠的这种遗传结构特点可能是该物种稳定的地下生活环境和有限的迁移造成的,且浑善达克沙漠形成布氏田鼠分化最强烈的隔离因素.

尼罗鳄MHCⅡ类B基因第二外元的序列变异分析

利用一对简并引物扩增了尼罗鳄MHCⅡ类分子B基因第二外元的部分片段,并对PCR产物进行了克隆和测序,结果得到8种不同的序列,序列长度为166 bp;经分析,序列中有56个变异位点,核苷酸的非同义替换多于同义替换,造成30个位点氨基酸的改变,氨基酸的替换趋于集中在假定的抗原结合位点附近。核苷酸和氨基酸序列与已报道的扬子鳄和密河鳄的MHCⅡ类B基因第二外元序列有较高的同源性,利用PAUP4.0软件构建的NJ树显示,鳄类的MHCⅡ类B基因存在跨种多态性现象。

黑线仓鼠MHCⅡ类DQA基因外显子2的克隆与序列分析

为了探明黑线仓鼠MHC的结构与功能并寻找分子标记,对MHCⅡ类DQA基因的外显子2进行克隆和序列分析.提取黑线仓鼠3个群体(吴村、沂南和临朐)的基因组DNA构建基因池,利用PCR技术扩增得到249 bp的片段,将该目的片段连接到pMD18-T载体中,重组质粒转入大肠杆菌DH5α后利用蓝白斑法筛选阳性克隆,测序后得到该目的片段的核苷酸序列(Genbank登录号:FJ209306)并推导出氨基酸序列.结果表明:黑线仓鼠、人类、大鼠、小鼠、猪、马、牛、兔之间DQA基因外显子2的核苷酸序列同源性为68.7%-85%,氨基酸序列同源性为56.8%-83.5%,黑线仓鼠与大鼠、小鼠亲缘关系更近.测序得到的DQA基因外显子2的序列在物种间具有丰富的多态性,可以作为物种遗传分析的分子标记.