SED超抗原MHCⅡ类分子结合位点的研究

目的 :运用定点突变技术确定SED超抗原的MHCⅡ结合位点。方法 :首先检测突变体的促T淋巴细胞增殖活性 ;用FITC标记SED ,对增殖活性降低的突变体 ,进一步用竞争结合实验检测其MHCⅡ结合活性。结果 :突变体SEDN2 3A、SEDN2 3A H2 6R和SEDF4 5A 的促增殖活性均显著降低 ,初步推测 2 3、2 6和 4 5位氨基酸可能参与了SED与MHC的相互作用。竞争结合实验证明F4 5位氨基酸是SED与MHCⅡ类分子结合的关键位点。结论 :F4 5位氨基酸是SED与MHCⅡ类分子结合的关键位点 ;2 3和 2 6位氨基酸可能参与了SED与T细胞受体 (TCR)Vβ的识别 。

清化宁络方联合美沙拉秦治疗轻中度溃疡性结肠炎活动期疗效及对炎性因子和结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ类分子表达影响

目的观察清化宁络方联合美沙拉秦治疗轻中度溃疡性结肠炎活动期患者的临床疗效及对炎性因子和结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ类分子表达影响。方法将64例溃疡性结肠炎轻中度活动期患者随机分为2组,西药组32例给予美沙拉秦口服,中西医结合组32例给予美沙拉秦联合清化宁络方治疗,治疗1个月后,统计2组中医证候疗效、综合疗效,观察2组治疗前后血沉、C反应蛋白、TNF-α水平变化情况,免疫组化SP法检测2组治疗前后结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ类分子表达情况。结果治疗后中西医结合组中医证候疗效、综合疗效均明显优于西药组(P均<0.05);2组治疗后血沉、C反应蛋白、TNF-α水平及结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ类分子表达量均显著降低(P均<0.05),且中西医结合组血清TNF-α水平及结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ类分子表达量均明显低于西药组(P均<0.05),而2组治疗后血沉及C反应蛋白水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论清化宁络方联合美沙拉秦治疗轻中度溃疡性结肠炎活动期患者疗效好,可明显减轻炎症反应,降低结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ类分子表达。

弥漫大B细胞淋巴瘤中MHC Ⅱ类分子的表达及其意义

目的检测弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中主要组织相容性复合物Ⅱ(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)类分子的表达,探讨其临床病理学意义。方法收集123例DLBCL和30例淋巴结反应性增生(reactive hyperplasia,RH)石蜡标本,采用免疫组化EnVision两步法对DLBCL进行免疫分型,并检测良恶性淋巴组织中MHCⅡ类分子的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 DLBCL组织中MHCⅡ类分子阳性率(49.5%,61/123)显著低于RH淋巴组织(86.7%,26/30);活化B细胞(activated B-cell-like,ABC)型DLBCL中MHCⅡ阳性率(38%,27/71)显著低于生发中心型B细胞样(germinal center B-cell-like,GCB)(65.3%,34/52)。DLBCL中MHCⅡ类分子的低表达与患者结外病灶受累多、体能状态评分高和国际预后指数评分高危组有关(P均<0.05)。在ABC型DLBCL患者中,MHCⅡ低表达组患者的总生存率明显低于MHCⅡ高表达组患者。ABC型DLBCL中MHCⅡ类分子表达与MUM1表达呈负相关(P<0.01)。结论 MHCⅡ类分子在DLBCL中存在低表达,其异常表达可能在DLBCL发生和浸润中发挥重要作用,其表达丢失提示DLBCL患者预后不良。

MHC II类分子表达调控的研究进展

MHCII类分子提呈经过加工的抗原给CD4 + T淋巴细胞 ,在诱发免疫反应中起重要作用。MHCII类分子不正常表达会引起严重的免疫缺陷疾病 ,如裸淋巴细胞综合征 (BLS)等。目前已识别出四种不同的MHCII调控基因。这些基因分别编码RFXANK、RFX5、RFXAP和CIITA。其中 ,前三个是RFX复合物的亚基 ,RFX是一种结合于所有MHCII类基因启动子上的泛式表达的因子。CIITA是MHCII类分子表达的主要调控因子 ,其严密调控的表达模式决定了MHCII类分子表达的细胞特异性 ,及能否被诱导且在何种水平上表达。

MHC Ⅱ类分子在肝细胞癌组织的细胞定位与术后复发关系的研究

目的研究MHCⅡ类分子在肝细胞癌(HCC)组织中的细胞定位,探讨MHCⅡ类分子在HCC组织中的表达与术后复发的关系。方法采用双重免疫组化方法对术后3年内复发和不复发HCC患者的原发瘤组织石蜡切片染色,随机选取视野检测MHCⅡ分子表达,然后统计分析。结果 MHCⅡ分子在术后3年内不复发HCC组织的表达高于1～3年内复发组织(38.5%vs 12.2%,P<0.05),MHCⅡ分子在HCC组织中主要表达在浸润的巨噬细胞、淋巴细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)等。MHCⅡ分子表达与HCC患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤数目、有无包膜、门静脉癌栓、乙肝表面抗原、Edmonson分级等因素无明显相关(P>0.05)。结论 MHCⅡ分子与HCC的术后3年内是否复发风险密切相关,HCC组织中MHCⅡ分子高表达患者3年内不易复发。提示MHCⅡ分子可能可以作为HCC判断预后的分子指标之一。

MHCⅡ类分子转录激活因子锤头状核酶的生物学活性

目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)锤头状核酶抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。方法设计并克隆针对CⅡTA第464位点的锤头状核酶(Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性鉴定,进一步将Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464),并稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR-、DP-、DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTA mRNA水平。结果细胞外活性鉴定表明,Rz464具有明显的切割活性。细胞内切割实验显示:pRz464阳性Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低了75.93%、64.14%、78.32%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论抗CⅡTA锤头状核酶Rz464可有效抑制MHCⅡ类抗原的表达。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠创伤后MHCⅡ类分子表达的改善作用

目的：探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对创伤小鼠巨噬细胞抗原提呈功能的影响。方法：以双股骨骨折致伤小鼠，伤后连续５天注射ＧＭ－ＣＳＦ，观察巨噬细胞Ｉａ抗原的表达。结果：创伤后小鼠巨噬细胞Ｉａ表达明显降低，ＧＭ－ＣＳＦ治疗组Ｉａ表达恢复早而快，伤后第３天开始显著高于对照组。结论：ＧＭ－ＣＳＦ能够促进创伤后巨噬细胞抗原提呈功能的恢复。

几种黏膜免疫佐剂对小肠树突状细胞、MHCⅡ类分子及核转录因子NF-kB的影响

目的研究黏膜免疫佐剂在小肠局部的抗原递呈方式和信号转导途径。方法应用大鼠肠道原位结扎灌注模型观察大豆黄酮、CpGDNA和乳酸杆菌3种黏膜免疫佐剂对树突状细胞、MHCⅡ类分子和核转录因子NF-κB的影响。结果1)CpGDNA和乳酸杆菌能够显著增加小肠树突状细胞的面积,促进局部疫苗抗原的递呈;2)大豆黄酮、CpGDNA和乳酸杆菌能在24h内促进大鼠空肠MHCⅡ类分子的显著表达。提示黏膜免疫佐剂可能通过增强黏膜局部抗原递呈细胞的活性和MHCⅡ类分子的含量促进局部特异性免疫反应;3)CpGDNA可以在24h内显著增加细胞内NF-κB蛋白的含量,在0.25h作用最明显;乳酸杆菌在6h内可极显著增加NF-κB蛋白的表达;而大豆黄酮对细胞内NF-κB蛋白的含量作用不明显。结论提示细菌类佐剂CpGDNA和乳酸杆菌是通过活化NF-κB途径激发免疫活性细胞,大豆黄酮可能不通过该途径。

恒定链胞浆尾部在MHCⅡ类分子递呈抗原中的作用研究进展

ＭＨＣⅡ类分子的主要作用是递呈外源性抗原，恒定链（Ｉｉ）是其递呈抗原过程中的重要辅助分子。恒定链的作用包括其胞外部分对ＭＨＣⅡ类分子抗原结合位点的阻断作用，其胞浆尾部所提供的ＭＨＣⅡＩｉ复合体的分选／内化信号以及Ｉｉ自身的初步降解释放ＭＨＣⅡ类分子的信号。本文综述了Ｉｉ胞浆尾部ＭＨＣＩｉ复合体分选／内化信号的定位、结构和功能。

重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子Kb(Kb EGFP融合蛋白 ) ,并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子KbcDNA ,克隆入真核表达载体pEGFP N1中EGFP分子的上游 ,脂质体转染COS 7细胞 ,G4 18加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒 ,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误 ,转染COS 7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光 ,特征性地分布于细胞质膜 ,及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的Kb EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布 ,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征 。

抗CⅡTA的核糖核酸酶P对Jurkat细胞MHCⅡ类分子表达的抑制作用

本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-3408-GS亚克隆入psNAV载体并稳定转染Jurkat细胞株,采用流式细胞术检测该细胞表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平。结果表明:在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,M1-3408-GS阳性Jurkat细胞株与对照组比较,其表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ抗原诱导型表达分别降低了83.17%、94.12%及84.31%;同时CⅡTA的mRNA含量明显降低(P<0.05,t=4.89)。结论:抗CⅡTA的M1-RNA(M1-3408-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。

MHCⅡ类分子在CNS胶质细胞上的表达

本文简要介绍了MHCⅡ类分子表达的调控机制 ,MHCⅡ类分子及其协同刺激因子在CNS中的小胶质细胞及星形胶质细胞上的表达及其在多发性硬化发病过程中所起的作用。

MHCⅠ类分子在内质网中的组装研究进展

MHCI类分子在内质网中组装形成肽 MHC复合体。抗原肽主要来自于胞内蛋白 ,在蛋白酶体作用下形成的 8～ 10个氨基酸小肽。内质网中的多个伴侣分子与I类分子相互作用形成肽组装复合体。这些伴侣分子对于Ⅰ类分子的有效组装以及配体的选择均有重要作用。

CⅡTA核酶对肝细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制

目的:探讨抗CⅡTA核酶对肝细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制作用。方法:设计并克隆针对CⅡTA第134、218及464位点的核酶(分别为Rz134、Rz218、Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性筛选。将切割作用明显的Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464)进行细胞内切割分析。pRz464稳定转染人胎肝细胞,流式细胞术检测MHCⅡ(HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTAmRNA水平。结果:pRz464肝细胞表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ的诱导型表达分别为(1.01±0.51)%、(4.37±1.28)%和(1.98±0.42)%,与对照组比较分别下调90.65%、89.11%及65.32%;同时CⅡTA的诱导型mRNA含量明显减少(P<0.01)。结论:抗CⅡTA核酶-Rz464降低了CⅡTA的mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。

MHC Ⅰ类分子限制性抗原的加工与递呈

MHC分子限制性抗原的加工与递呈是近年基础免疫学研究热点之一。MHCⅠ类分子将加工后的抗原递呈给CD8T淋巴细胞，此路径的抗原加工与递呈由于其重要性而受到广泛重视，本文就近年来这一领域的研究成果作一综述。

腺病毒介导CIITA突变体基因转移抑制MHC II类分子表达的体外研究

目的:构建携带小鼠MHCII类分子反式激活因子(MHC class II molecule transactivator,CIITA)突变体基因的腺病毒,并观察腺病毒介导该基因的表达情况以及表达产物的体外功能。方法:采用常规分子生物学方法从IFN-γ诱导后的BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中获得IV型CIITA cDNA;利用重叠延伸PCR法构建CIITA突变体基因,并克隆入表达载体pIRES;采用pAdEasy-1系统获得具有感染能力的、携带CIITA突变体基因的缺陷型重组腺病毒(Ad-CIITAm)和空载对照病毒(Ad-GFP),并经大量扩增、纯化及滴度测定;将Ad-CIITAm和Ad-GFP分别感染HeLa细胞和Raji细胞,流式细胞术观察对诱导型和组成型HLA-DR分子表达的影响。结果:成功克隆了小鼠CIITA突变体基因,并构建了携带小鼠CIITA突变体基因的重组腺病毒Ad-CIITAm;经流式细胞术证实感染Ad-CIITAm的Hela和Raji细胞较感染Ad-GFP的细胞,其表面HLA-DR分子的表达均受到明显的抑制。结论:本实验证实了重组腺病毒介导表达的小鼠CIITA突变体在体外能够有效地抑制MHCII类分子的表达。

可溶性MHCⅡ类分子四聚体的制备及其应用

可溶性MHCⅡ类分子四聚体可被用于计数、分离CD4+T细胞以及分析其生物学性状,而且MHCⅡ类分子四聚体在制备、标记和应用方面显示出与MHCⅠ类分子四聚体明显不同的特点,是探索自身免疫性疾病的发病机理和筛选T细胞肽表位(tetramerguidedepitopemapping,TGEM)时必不可少的工具。

MHCⅡ类分子反式激活因子(CⅡTA)的研究进展

MHCⅡ类分子反式激活蛋白 (CⅡTA ,classⅡtransactivator)的发现是近年来国际免疫学研究的一项重大突破 ,CⅡTA及其突变体在免疫调节和免疫治疗中具有诱人前景。本文对CⅡTA的结构、功能及其反式激活MHCⅡ类分子的机制作一综述 ,并对CⅡTA及其突变体的应用前景作一简要介绍。

鸡MHC Ⅱ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆和间接ELISA筛选阳性细胞株。[结果]共得到1株分泌鸡MHCⅡα链抗体和2株MHCⅡβ链抗体的杂交瘤细胞,分别命名为MHCⅡα-4、Ⅱβ6-2和Ⅱβ6-31,其腹水效价分别为1∶256000、1∶256000和1∶1280000。Western blotting分析表明其特异性强,能与相应蛋白结合。[结论]成功获得了3株稳定分泌抗鸡MHCⅡ类分子抗体的杂交瘤细胞。