急性低氧及力竭运动对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响

研究急性低氧及力竭运动对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链 (MHC)亚型基因表达的影响。取健康 SD雌性大鼠 80只 ,随机分成 4大组 :常氧对照组 (C) ,常氧力竭组 (NE) ,低氧对照组 (HC)和低氧力竭组 (HE)。采用半定量反转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)法 ,测定各组骨骼肌 MHCI、IIa、IIx、IIb4种亚型的 m RNA基因表达。结果表明 ,MHC各亚型 m RNA所占百分比分析显示 ,单纯低氧能刺激 MHC亚型 m RNA表达出现“由慢到快”的趋势 ;力竭运动则能刺激 MHCm RNA表达出现“由快到慢”的趋势。关于 MHC亚型转变在功能上的意义还有待进一步研究。

血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A、C-反应蛋白、α1-酸性糖蛋白对恶性妇科肿瘤诊断的临床检测

随着分子生物学的进展,当前血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A、C-反应蛋白、α1-酸性糖蛋白是用于妇科肿瘤诊断的可行方法。本研究将构建受试者工作特征ROC曲线模型,综合评价血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A(MICA)、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(α1-AG)三种方法诊断恶性妇科肿瘤的效果并进行对比分析,以期为我国恶性妇科肿瘤寻找最佳的实验诊断方法。通过平均值的显著性t检验,可以看出在1%的显著性水平下,恶性妇科肿瘤患者的MICA、CRP、α1-AG指标均显著大于对照组的数值。经过ROC分析,MICA监测AR灵敏度、特异度和AUROC为97.8%、76.2%、0.810;CRP为97.8%、57.1%、0.918;α1-AG为93.5%、95.2%、0.835。ROC曲线下面积反映诊断试验的准确性,实验结果提示AUROC:CRP>α1-AG>MICA。可以认为,相比于其他两种监测方法,CRP的诊断准确性最好,更有助于指导临床的恶性妇科肿瘤的诊断。

骨肉瘤组织中MICA、MMP-9和NF-κB蛋白的表达及相关性

目的探讨骨肉瘤组织中MHCⅠ类链相关蛋白A(MHC class Ⅰ chain-related A,MICA)、MMP-9和NF-κB的表达及相互间的关系,为研究骨肉瘤组织中MICA蛋白表达和脱落机制提供组织学依据。方法应用免疫组织化学方法检测66例骨肉瘤、11例骨母细胞瘤,8例骨化性纤维瘤和6例正常骨组织中MICA蛋白的表达情况,并检测66例骨肉瘤组织中MMP-9和NF-κB蛋白的表达情况。结果(1)MICA蛋白在骨肉瘤组织、骨母细胞瘤、骨化性纤维瘤和正常骨组织的表达率分别为51.6%(34/66)、9%(1/11)、0(0/8)、0(0/6),骨肉瘤组织中MICA表达与骨母细胞瘤(P=0.01)、骨化性纤维瘤(P<0.01)和正常骨组织(P<0.05的差异有显著性。(2)骨肉瘤组织中MMP-9和NF-κB表达率分别为55%(36/66)和73%(48/66);NF-κB与MICA(r=0.373,P<0.01)和MMP-9(r=0.536,P<0.01)的表达呈正相关关系。结论MICA蛋白可作为骨肉瘤诊断的分子标志物;NF-κB可能参与MICA蛋白表达和脱落的分子机制,NF-κB可作为骨肉瘤免疫治疗的候选靶点。

家兔半膜肌各亚部肌球蛋白重链表达差异的实验研究

目的利用家兔半膜肌各亚部肌纤维类型的分布特征,观察骨骼肌两型肌纤维肌球蛋白重链(MHC)的构成特点,为进一步探讨两型肌纤维的区别以及两型肌纤维转化机制奠定基础。方法取成年家兔半膜肌,通过改良肌球蛋白ATP酶染色法观察半膜肌四个亚部肌纤维类型的构成,应用RT-PCR方法检测各亚部4种MHC亚型mRNA的表达情况。结果固有半膜肌只含有慢肌(Ⅰ型)肌纤维,表达MHCⅠ型和少量MHCⅡa型基因。副半膜肌腹侧亚部除含有少量Ⅰ型肌纤维外,主要含有快肌(Ⅱ型)肌纤维,表达少量MHCⅠ型基因以及MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因等四种类型;而副半膜肌背侧和外侧亚部只含有Ⅱ型肌纤维,仅表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因。结论家兔半膜肌各亚部肌纤维类型几乎均呈单一类型分布。固有半膜肌亚部主要表达MHCⅠ型基因;副半膜肌各亚部主要表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因,以MHCⅡx型基因为主,各亚部之间存在细微差别。

重组可溶性MICA蛋白负调控NK细胞对白血病细胞的杀伤活性

目的:体外研究重组可溶性MHCⅠ类分子相关A(soluble MHC classⅠchain-related gene A,sMICA)蛋白对自然杀伤细胞(natural killer cell,NK cell)表面活化性受体NKG2D(natural killer group 2 member D)的表达、杀伤白血病细胞的活性和分泌IFN-γ的影响。方法:免疫磁珠分选健康人外周血NK细胞,分为空白对照组、重组sMICA组(200、500、800μg/L三亚组),相互作用24 h后,流式细胞术检测NK细胞NKG2D表达水平,LDH释放法检测NK细胞对白血病细胞K562的杀伤活性,ELISA法检测培养上清中IFN-γ的水平。结果:200、500、800μg/L sMICA作用组与对照组相比,NK细胞表面NKG2D的表达均下调[(68.79±6.87)%,(55.75±9.31)%、(45.14±5.70)%vs(92.75±6.91)%,P<0.05或P<0.01],均抑制NK细胞杀伤白血病细胞K562的活性[(18.67±2.35)%、(15.01±2.25)%、(7.33±2.52)%vs(36.33±2.51)%,P<0.05或P<0.01],均抑制IFN-γ的分泌[(164.48±22.48)、(112.71±10.89)、(70.23±9.64)vs(313.72±16.06)pg/ml,P<0.05,P<0.01]。结论:急性白血病细胞表面脱落的sMICA可下调NK细胞NKG2D的表达和IFN-γ的分泌,抑制了NK细胞对白血病细胞的杀伤活性。

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

慢性低氧及跑台训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响

为研究慢性低氧及跑台训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响,对揭示肌肉收缩蛋白性能的变化机制具有特定的意义。取健康SD雄性大鼠28只,随机分成4组进行试验,采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,测定骨骼肌MHCⅠ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb四种亚型的mRNA基因表达。结果表明:与常氧对照组(C)相比,HC及NT组MHC各亚型mRNA表达量总体呈上升趋势(P<0.05),仅仅低氧训练组(HT)MHC-Ⅱa亚型mRNA表达量明显下降(P<0.05);另一方面,MHC各亚型mRNA所占百分比分析显示,慢性低氧能导致MHC亚型mRNA表达出现"由慢到快"变化趋势。另外,慢I型百分比并未受慢性低氧及训练的影响。

青海高原藏族胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体D及其配体MICA表达的研究

目的:研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA的表达,探讨宿主NKG2D在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对33例高原藏族胃癌患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血NKG2D的表达状况,RT-PCR和免疫组织化学技术检测在局部肿瘤组织和癌旁正常组织标本中MICA的表达。结果:高原藏族胃癌患者外周血NKG2D的表达为(13.47±5.26)%,明显低于正常组(32.62±10.08)%,2组之间差异显著(P<0.05);藏族胃癌组织MICAmRNA的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁正常组织中为(21.21%,7/33),胃癌组织阳性率为(78.79%,26/33),高分化组(60.00%,3/5),中分化组(72.73%,8/11),低分化组(88.24%,15/17),组间差异显著(P<0.05),而与肿瘤的大小、性别、年龄、淋巴结转移无关(P>0.05)。Spearman相关分析显示,MICA表达水平与mRNA的表达水平显著正相关(r=0.903,P<0.01)。结论:高原藏族胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MICA的表达升高有关,高原藏族胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D配体MICA的基因表达可能与高原胃癌患者的恶性转化有一定的相关性。

一个生产可移植细胞的方法

在一项用小鼠做的试验中，研究人员分离出一个在被称为“孤雌生殖”过程中生产的胚胎干细胞。孤雌生殖是指从未受精卵开始发育的胚胎，由于该胚胎仅有母系基因组的两个拷贝，而不是一个父系和一个母系基因组拷贝，它们应该与卵子的供体有更具体的匹配，尤其能与细胞表面名为MHC的抗原紧密匹配。当一个外源物质进入身体时，MHC蛋白成为免疫系统T细胞的靶标，所以MHC的不匹配是移植的器官和组织被排斥的主要原因。KitaiKim和同事们用来自有丝分裂两个不同阶段的小鼠卵细胞诱导了孤雌生殖发育过程，并从胚胎中分离出干细胞，这些千细胞带有卵子供体全部的MHC蛋白。上述干细胞能产生许多、但不是全部的组织，这也许与缺少父系印记的基因组有关。该方法需要大量的卵细胞，是否能用于人类还有待研究。

过度训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响

目的:探索过度训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响,为进一步研究其蛋白水平及基因水平的变化机制提供依据。方法:将雄性SD大鼠随机分为2组:A、安静对照组(Control,n=10),B、过度训练组(Over-training,OT,n=10)。过度训练组:进行持续性大运动量跑台力竭训练8周,两组均于安静状态下宰杀,迅速选取股外侧肌样本液氮保存。用实时荧光-PCR法,测定骨骼肌MHC I,IIa,IIx,IIb四种亚型的mRNA基因表达。结果:过度训练组MHC I mRNA及MHC IIb mRNA明显高于安静对照组(P<0.05);MHC IIa mRNA及MHC IIx mRNA两组与对照无明显差异(P>0.05)。另一方面,MHC各亚型所占百分比亦有相应的变化,即训练组MHC I和MHC IIb mRNA百分比较对照组显著增加,而MHC IIa和MHC IIx mRNA百分比则略有下降。由于慢I型比例很小,从快II亚型来看,可见"由快变慢"的变化趋势。提示本运动模型下,各亚型的变化并不一致,具有选择性。这就为下一步研究成肌调节因子的调节机制提供了依据。

蒙古马肌肉中运动相关基因训练前后差异表达分析

为了进一步了解蒙古马超群的耐力性能形成的分子机理,试验对蒙古马训练前后肌肉组织中肌球蛋白(MHC)-Ⅰ和肌钙蛋白1(TNNC1)基因的表达量进行了比较分析,以6匹2岁的雌性蒙古马为试验对象,以自然状态和耐力训练后的状态为变异因素,采用q PCR的方法检测经耐力训练后蒙古马肌肉中MHC-Ⅰ和TNNC1基因在mRNA水平的表达变化。结果表明:经训练后蒙古马肌肉中MHC-Ⅰ基因的表达量极显著低于训练前(P<0.01),而TNNC1基因的表达量极显著高于训练前(P<0.01)。

CⅡTA基因在五种人类恶性血液病细胞株细胞中的表达及意义

目的:探讨5种血液病细胞株细胞的HLA-Ⅱ类抗原表达,以及对IFN-γ诱导HLA分子表达的反应性与MHCⅡ类分子反式激活因子(CⅡTA)表达的关系。方法:采用流式细胞术和免疫组化法检测肿瘤细胞HLA分子及CⅡTA蛋白的表达,RT-PCR检测肿瘤细胞CⅡTA基因表达。混合淋巴细胞反应检测肿瘤细胞刺激外周血T细胞反应的能力。结果:肿瘤细胞HLAⅡ类分子表达与CⅡTA表达一致;结构型或诱导型表达CⅡTA的肿瘤细胞,经IFN-γ作用后其HLAⅠ、Ⅱ类抗原表达增高;IFN-γ诱导后仍不表达CⅡTA的肿瘤细胞,其对IFN-γ促HLAⅡ表达的作用不反应。Jurkat诱导后刺激T细胞表达高水平的IL-2mRNA。结论:某些恶性血液病细胞株细胞对IFN-γ不能诱导HLA分子表达与CⅡTA诱导型表达缺陷有关,表明CⅡTA参与调控肿瘤细胞HLAⅠ、Ⅱ类抗原表达,可能在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。

监测免疫细胞新方法

为防止被体内免疫系统的杀伤,正常细胞带有一种白色标示物--表面蛋白.有了表面蛋白,免疫系统就把它们识别为自身的成份.到目前为止,研究人员仅仅证明了一种类型的标识物,即所谓的Ⅰ型主要组织兼容性复合MHC蛋白--也称作转移抗原,主要分布于大多数健康细胞表面.但是新的发现打破了MHC蛋白在自我标识物方面的独有性.

HER2阳性乳腺癌组织中MICA/B的表达及其临床意义

目的:通过检测MHC-Ⅰ类分子链相关蛋白A/B(MHC classⅠchain-related protein A/B,MICA/B)在HER2阳性乳腺癌组织中的表达水平,探讨其与患者临床病理特征的关系。方法:收集2009年1月至2010年6月在南方医科大学附属郑州人民医院乳腺外科手术切除的HER2阳性乳腺癌标本62例及其临床资料,免疫组化法检测乳腺癌组织中MICA/B的表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系。结果:MICA/B表达率为90.32%,高表达为64.52%。MICA/B的表达与患者的临床分期、ER、PR表达有关(均P<0.05),与绝经、淋巴结转移、组织学分级无关(均P>0.05)。结论:MICA/B的表达可能与HER2阳性乳腺癌的发生发展有关,有望成为免疫治疗的新靶点。

cd36基因在斑马鱼抗鳗弧菌免疫调控中的作用

为了研究清道夫受体CD36在鱼类抗细菌免疫调控中的作用,本文将鳗弧菌(Vibrio anguillarum)腹腔注射到cd36基因敲除的斑马鱼(cd36^(-/-))和野生型斑马鱼(WT)中,发现突变体斑马鱼的活跃度和存活率均低于野生斑马鱼。分别取鳗弧菌(V.anguillarum)感染的cd36^(-/-)和WT斑马鱼头肾组织进行转录组学测序分析,发现二者差异表达的基因主要富集在补体系统(Complement system)、系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus)、细胞因子之间的相互作用(Interaction between cytokines)和病毒致癌机理(Viral carcinogenesis)等与免疫相关的信号途径中。运用实时荧光定量PCR技术进一步证实,与野生型斑马鱼相比,cd36-/-斑马鱼中参与抗原呈递的mhc1和cd8基因、穿孔素基因、补体系统关键基因c3以及细胞因子基因il-4的表达都显著下调。综上,本研究证实CD36在斑马鱼抗鳗弧菌免疫调控中发挥重要作用。

高表达CREB对食管腺癌细胞增殖、侵袭及NK细胞杀伤活性的影响

目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(CREB)对食管腺癌细胞增殖、侵袭及NK细胞杀伤活性的影响。方法选取2017年3月至2019年12月陕西省人民医院收治的23例食管腺癌患者,免疫组织化学法检测食管腺癌组织和癌旁正常组织中CREB的蛋白表达,体外培养食管腺癌细胞TE-10,将转染si-NC的TE-10细胞设置为对照组,将转染si-CREB的TE-10细胞设置为si-CREB组。Western blot检测细胞中CREB、MHCⅠ类链相关蛋白A(MICA)与MHCⅠ类链相关蛋白B(MICB)的表达;流式细胞术检测MICA与MICB的表达;克隆形成实验与Transwell实验检测TE-10细胞的增殖及侵袭能力;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对TE-10细胞的杀伤活性。结果食管腺癌组织中CREB的表达高于癌旁正常组织(P<0.05);食管腺癌细胞TE-10中CREB的蛋白表达量高于人正常食管上皮细胞HEEC(P<0.05)。si-CREB组TE-10细胞增殖及侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),MICA与MICB的蛋白表达量、NK细胞对TE-10细胞的杀伤率显著高于对照组(P<0.05)。结论CREB在食管腺癌组织及细胞中高表达。沉默CREB可抑制食管腺癌细胞增殖与侵袭,上调MICA与MICB表达,增强NK细胞对食管腺癌细胞的杀伤敏感性。