目的构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系。方法采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真...目的构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系。方法采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1,构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA,脂质体法转染Tca8113-Tb细胞,G418筛选,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系,RT-PCR、real time PCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达。结果通过PCR技术获取了MICA基因并成功克隆入载体,测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达,RT-PCR、real time PCR及免疫细胞化学检测到目的基因MICA在转染细胞中为过表达。结论 pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础。展开更多
目的:探讨MHC-Ⅰ类相关链基因A(MHC class-Ⅰchain related gene A,MICA)与湖南地区白血病之间的相关性。方法:应用荧光聚合酶链反应-基因扫描技术和聚合酶链反应-序列特异性引物技术分析,对62例白血病患者和112名正常人群进行MICA基因...目的:探讨MHC-Ⅰ类相关链基因A(MHC class-Ⅰchain related gene A,MICA)与湖南地区白血病之间的相关性。方法:应用荧光聚合酶链反应-基因扫描技术和聚合酶链反应-序列特异性引物技术分析,对62例白血病患者和112名正常人群进行MICA基因第5外显子微卫星等位基因分型及MICA基因缺失检测。结果:慢性粒细胞白血病组(n=35)的MICA*A5基因频率显著低于正常对照组(RR=0.635,P=0.0380);急性淋巴细胞性白血病组(n=13)的MICA*A4基因频率显著低于正常对照组(RR=0.120,P=0.0297);而在急性非淋巴细胞性白血病组(n=14),MICA*A5基因频率显著高于正常对照组(RR=2.229,P=0.0218)。结论:本文数据显示,MICA-STR多态性与湖南地区白血病之间存在相关性;不同病理类型的白血病相关格局有所不同。展开更多
分别提取湖南汉族人群108例慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)患者、96例HBV携带者和142例健康对照者外周血基因组DNA,利用聚合酶链反应和基因扫描技术分别对它们的主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关A(major histocompatibility comple...分别提取湖南汉族人群108例慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)患者、96例HBV携带者和142例健康对照者外周血基因组DNA,利用聚合酶链反应和基因扫描技术分别对它们的主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关A(major histocompatibility complex classⅠchain related A,MICA)基因第5外显子进行微卫星多态性分析;应用DNA测序分析对不同的基因型进行验证,同时应用PCR/SSP技术进行MICA*Del检测,确定MICA基因第5外显子基因型。发现本研究的三组中分别检出A4、A5、A5.1、A6、A9五种等位基因,且以A5和A5.1为主;在HBV携带组和健康对照组中分别检出MICA*Del基因。结果同时显示慢性HBV患者组MICA*A5.1/A9基因型频率、慢性HBV患者组的MICA*A9等位基因频率、慢性HBV患者组MICA*A9表型频率和HBV携带组MICA*A5.1/A9基因型频率均低于相应的健康对照组;而湖南地区汉族人群HBV携带者和慢性HBV患者间的基因型频率、等位基因频率和表型频率无显著性差异;因而推测MICA*A5.1/A9基因型和MICA*A9等位基因可能是抗HBV感染的一种保护性等位基因。为今后进一步研究HBV的感染、预防和治疗提供参考依据。展开更多
文摘目的构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系。方法采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1,构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA,脂质体法转染Tca8113-Tb细胞,G418筛选,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系,RT-PCR、real time PCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达。结果通过PCR技术获取了MICA基因并成功克隆入载体,测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达,RT-PCR、real time PCR及免疫细胞化学检测到目的基因MICA在转染细胞中为过表达。结论 pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础。
文摘目的:探讨MHC-Ⅰ类相关链基因A(MHC class-Ⅰchain related gene A,MICA)与湖南地区白血病之间的相关性。方法:应用荧光聚合酶链反应-基因扫描技术和聚合酶链反应-序列特异性引物技术分析,对62例白血病患者和112名正常人群进行MICA基因第5外显子微卫星等位基因分型及MICA基因缺失检测。结果:慢性粒细胞白血病组(n=35)的MICA*A5基因频率显著低于正常对照组(RR=0.635,P=0.0380);急性淋巴细胞性白血病组(n=13)的MICA*A4基因频率显著低于正常对照组(RR=0.120,P=0.0297);而在急性非淋巴细胞性白血病组(n=14),MICA*A5基因频率显著高于正常对照组(RR=2.229,P=0.0218)。结论:本文数据显示,MICA-STR多态性与湖南地区白血病之间存在相关性;不同病理类型的白血病相关格局有所不同。
基金Supported by:the National Natural Science Foundation of China,No.30872530the Natural Science Foundation of Jiangsu Province,No.BK2007056the Key Talents Project of Health Department of Jiangsu Province,No.RC2007079~~
文摘分别提取湖南汉族人群108例慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)患者、96例HBV携带者和142例健康对照者外周血基因组DNA,利用聚合酶链反应和基因扫描技术分别对它们的主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关A(major histocompatibility complex classⅠchain related A,MICA)基因第5外显子进行微卫星多态性分析;应用DNA测序分析对不同的基因型进行验证,同时应用PCR/SSP技术进行MICA*Del检测,确定MICA基因第5外显子基因型。发现本研究的三组中分别检出A4、A5、A5.1、A6、A9五种等位基因,且以A5和A5.1为主;在HBV携带组和健康对照组中分别检出MICA*Del基因。结果同时显示慢性HBV患者组MICA*A5.1/A9基因型频率、慢性HBV患者组的MICA*A9等位基因频率、慢性HBV患者组MICA*A9表型频率和HBV携带组MICA*A5.1/A9基因型频率均低于相应的健康对照组;而湖南地区汉族人群HBV携带者和慢性HBV患者间的基因型频率、等位基因频率和表型频率无显著性差异;因而推测MICA*A5.1/A9基因型和MICA*A9等位基因可能是抗HBV感染的一种保护性等位基因。为今后进一步研究HBV的感染、预防和治疗提供参考依据。