异基因MHCⅠ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响

目的 :观察异基因MHCⅠ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响 ,探讨MHCⅠ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法 :由逆转录病毒载体pMSCV介导 ,将BALB C小鼠的MHCⅠ类分子H 2Dd 基因导入C5 7BL 6小鼠的骨髓细胞 ,流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应 ,乳酸脱氢酶释放法测定BALB C小鼠NK细胞对H 2Dd 修饰后C5 7BL 6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果 :重组逆转录病毒感染的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞对BALB C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度 ,与未转染和空载体病毒感染的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB C小鼠NK细胞对转染H 2Dd 基因后的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论 :在骨髓移植中用受者MHCⅠ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。

MHCⅠ类基因逆转录病毒表达载体的构建及其在造血细胞中的表达

目的构建BALB/c小鼠MHCⅠ类基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在C57BL/6小鼠造血细胞中的表达。方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/c小鼠的H-2Dd基因导入C57BL/6小鼠的造血细胞中,并用逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达。结果用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定证实,H2Dd基因正确插入载体pMSCV。重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠造血细胞整合了BALB/c小鼠的H2Dd基因,且能转录为mRNA,在其细胞膜上有H2Dd分子的表达。结论成功构建小鼠H-2Dd编码基因的逆转录病毒载体,该基因已稳定地整合进C57BL/6小鼠造血细胞的基因组内,且在细胞中得到表达。

基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

RIG-I基因剔除小鼠表型的初步分析

目的通过对视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-I基因)剔除小鼠表型的分析,在整体动物水平揭示RIG-Ⅰ的生物学功能。方法Northern blotting和半定量RT-PCR检测小鼠组织中RIG-I基因的表达;对小鼠的表型分析包括体质量的测量、外周血细胞分类计数、代谢指标测定及病理组织学检查。结果RIG-Ⅰ在小鼠多种组织中广泛表达,但表达水平存在一定差异。RIG-Ⅰ基因剔除后,小鼠未见明显发育异常;无明显预期的粒系分化受阻表现;但RIG-Ⅰ基因剔除小鼠外周血相中的粒/淋比明显倒置,且对条件性致病菌易感。结论RIG-Ⅰ在小鼠抗细菌免疫过程中具有重要作用。