IFN-γ上调的单核细胞表面MHC-I类链相关分子促进NK细胞活化

目的:研究IFN-γ诱导上调表达的单核细胞MHC-I类链相关分子(MICs)分子对NK细胞的活化作用。方法:采用密度梯离离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),以免疫磁珠法从PBMC中特异性分选单核细胞及NK细胞,以细胞因子IFN-γ、TNF-α刺激单核细胞后,再将单核细胞与NK细胞共培养,以流式细胞术(FCM)检测NK细胞表面CD69分子及胞内IFN-γ表达,以51Cr释放试验检测NK细胞对K562细胞的杀伤效应。结果:IFN-γ上调人单核细胞表面MICs表达;IFN-γ刺激的单核细胞能促进异体NK细胞CD69及胞内IFN-γ表达,能增强NK细胞对K562细胞的杀伤效应;单核细胞的这种效应至少部分依赖于IFN-γ上调的MICs分子,因为用抗MIC抗体封闭或用细胞小室阻断细胞接触,可以明显地抑制NK细胞的活化。结论:IFN-γ上调人单核细胞表面MICs分子介导了NK细胞的活化。

SSCP和HMA方法在马MHC-I类分子基因多态性研究中的应用

文章使用SSCP和HMA两种基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法对马MHC-I类分子基因多态性进行了分析。在应用SSCP法进行分析时,尽管经过实验条件优化,仍未得到对MHC-I基因理想的分离效果,提示该方法对分离多态性较高的基因有一定局限性。在对HMA法用参考标准DNA对影响DNA分子构象的温度和变性剂浓度等实验条件进行优化后,获得了对马MHC-I类分子基因较好的分离效果。6、7、8、9和10号马的样本在相对应泳道上分别出现了6、5、6、5和7个条带。从凝胶中进行DNA条带回收后克隆测序的结果表明,这一方法可以有效地分离高度多态性的MHC-I类分子基因。

SEB诱导的CD4^+ T细胞无能、凋亡及MHC-I类分子表达下调

目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制。方法:采用SEB体外刺激C57BL/6J(B6)小鼠的脾细胞后,以MTT比色法检测脾细胞的增殖,并用PI染色后以流式细胞术(FCM)分析不同时间段处于S期、G0～G1期的细胞及无能T细胞的凋亡,测定T细胞亚群及MHC-I(H一2Kb)表达的变化。用琼脂糖凝胶电泳,观察不同时问段凋亡T细胞的DNA特征。结果:部分去除CD8+T细胞后,SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4+T细胞大量增殖。在SEB刺激后第3天,CD4+T细胞中处于S期的比率最大,此后开始下降;而处于G0～G1期的CD4+T细胞变化则相反。在初次刺激后第3天,增殖的CD4+T细胞出现无能。FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNA ladder证实,在第7天,无能CD4+ T细胞出现凋亡,且凋亡细胞的比率逐渐增多,不因加入抗CD3抗体或ConA而逆转。在SEB刺激后,CD4+ T细胞表面MHC-I类分子(H-2Kb)的表达,随细胞无能的出现而明显下调。结论:SEB诱导的T细胞免疫耐受,可能与CD4+ T细胞的无能、凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下凋有关。

MHC-I类分子在诱导异体肾癌特异性CTL中的作用

目的探讨MHCI类分子匹配的异体人肾癌细胞诱导肾癌细胞特异性CTL的作用。方法用经照射的HLAI类分子匹配的异体人肾癌细胞作为刺激细胞,诱导外周血CTL,并分析其表型及杀伤效应。结果11例肾癌患者外周血淋巴细胞经HLA匹配的肾癌细胞刺激后,诱导的CTL细胞主要以TCRαβ+、CD8+为主,具有明显的杀伤效应。结论用MHCI类分子匹配的异体肾癌细胞可诱导肿瘤特异性、并具有明显杀伤活性的的CTL。

口腔鳞癌患者血清可溶性MHC-I类链相关蛋白A的检测及其临床病理意义

目的：探讨口腔鳞癌患者血清中可溶性MHC-I类链相关蛋白A（soluble major histocompatibility complex classI-related chain A,sMICA）的表达水平及其临床意义。方法：选用口腔鳞癌患者78例作为实验组,19例健康成年人作为正常对照组,应用酶联免疫吸附定量分析法检测实验组和正常对照组血清中sMICA的含量。结果：实验组血清sMICA检出率为98.7%（77/78）,其含量的95%可信区间为74.30~93.95 pg/mL,中位数为82.17 pg/mL;对照组血清sMICA检出率为94.7%（18/19）,其含量的95%可信区间为29.48~50.30 pg/mL,中位数为37.54 pg/mL,实验组血清sMICA含量显著高于对照组（P〈0.01）。实验组血清sMICA含量在不同肿瘤大小、临床分期及颈部淋巴结是否转移与正常对照组比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）;而不同性别、年龄及肿瘤分化程度两组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌患者血清sMICA表达水平增高,且与肿瘤大小、临床分期及颈部淋巴结转移相关,检测血清sMICA的含量有助于判断口腔鳞癌患者的免疫功能状态。

外源性抗原对内皮细胞MHC-I类链相关基因A表达的影响(英文)

背景:研究表明部分肾移植受者在移植前就产生了MHC-I类链相关基因A(MICA)抗体,包括部分自身抗体,其急性排斥反应发生率明显高于抗体阴性者。目的:探讨外源性抗原对内皮细胞MICA表达的影响。方法:分别以5,10和25μg/L3个剂量,将MICA重组蛋白分为M5,M10,M25组,将热休克蛋白分为H5,H10,H25组,对人脐静脉内皮细胞予以诱导培养48h,对照组加入等量的磷酸盐缓冲液。结果与结论:用MICA重组蛋白诱导48h后,各实验组(M5,M10,M25)内皮细胞MICA mRNA和MICA蛋白的表达量与对照组比较均有显著增加(P<0.05)。M5组和M10组MICA mRNA和MICA蛋白均高于M25组(P<0.05)。MICA膜蛋白表达以M10组最高,并与M5组、M25组之间差异有显著性意义(P<0.05)。各实验组(M5,M10,M25)可溶性MICA水平较对照组显著下降(P<0.05)。热休克蛋白组内皮细胞MICA基因的表达和可溶性MICA水平均无明显改变。结果表明外源性MICA抗原能够诱导内皮细胞自身MICA mRNA和蛋白表达上调,尤其是细胞膜蛋白增加明显,但可溶性MICA水平显著下降。

类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.05);感染后8 d的SLA-DR和SLA-DM以及感染后17 d SLA-DM的mRNA的表达有下调趋势(P<0.1);感染后24 d的CD86 mRNA的表达呈上调趋势(P<0.1);感染后40 d的CD74 mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结果揭示,类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能有显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降及紊乱,进而使机体的体液免疫应答功能受到影响。

携带非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高

目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1+NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(no A5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(no A5.1)组,观察各组患者临床疗效。构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体p TE-1A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测p TE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染p TE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染p TE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量。结果:经过3年的随防,A5.1+NK组患者中位总生存期(medium overall survival,m OS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组为22.4个月,no A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.05)。经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P>0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.01)。转染p TE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3)vs(45.3±11.5)pg/ml,P<0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)%vs(42.5±7.1)%,P<0.05]。结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非A5.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关。

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A-自然杀伤细胞2族成员D通路及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,与其特异性结合,活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,发挥免疫监视作用。本文就近5年来有关MICA-NKG2D通路的表达、调控及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。

HLA-Ⅰ类分子与乙型肝炎的相关性研究

人类白细胞抗原（ＨＬＡ）主要由三类抗原组成，ＨＬＡ－Ⅰ类抗原（ＨＬＡ－Ａ、Ｂ、Ｃ）和Ⅱ类抗原（ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＰ、ＤＱ）及Ⅲ类抗原（ＨＬＡ－ｃ２、Ｂｆ、ｃ４Ａ、ｃ４Ｂ）。ＨＬＡ－Ⅰ类分子以膜抗原形式广泛分布于人体有核细胞表面。在内源性抗原提呈及对细胞...

新型示踪MHC-I类分子方法的建立

目的采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-I类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-I类分子的优缺点。方法构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,将病毒分别感染体细胞293FT和树突状细胞系DC2.4细胞后,TCtag采用染料ReAsH和FlAsH染色,Halotag采用染料HaloTagTMR染色,在激光共聚焦显微镜下观察H-2Kb的分布情况。结果通过激光共聚焦显微镜观察发现:TCtag与染料ReAsH和FlAsH只在293FT细胞内是特异性的结合;Halotag与用染料HaloTagTMR在293FT和DC2.4细胞内都是特异性结合的。结论从结合特异性上来看,Halotag标记MHC I类分子要优于TC-tag。

由碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌引起的医院获得性肺炎或呼吸机相关肺炎的治疗:结合分子耐药机制检测与联合用药来提高疗效

近期出版的美国感染病协会指南建议，对于医院获得性肺炎（HAP）或呼吸机相关肺炎（VAP）患者，如感染细菌为碳青霉烯类耐药菌且仅对多黏菌素敏感时，除了接受多黏菌素E吸入治疗外，还应接受多黏菌素B或多黏菌素E的系统治疗。

HLA-I类分子与乙型肝炎的相关性研究

人类白细胞抗原（HLA）主要由三类抗原形成,HLA-I类抗原（HLA-A,B,C）Ⅱ类抗原（HLA-DR,DP,DQ）和Ⅲ类抗原（HLA-C2、Bf、C4A、C4B）.HLA-I类分子以膜抗原形式广泛分布于人体有核细胞表面,在内源性抗原提呈及对细胞毒T淋巴细胞（CTL）识别抗原的限制过程中起重要作用.HLA-I类分子除以膜联形式存在于细胞表面外,目前也从人类血清、淋巴液、尿液、乳汁等体液中检出.有研究表明,这类以可溶型式存在于血清或其他体液中的HLA-I分子与人体正常生理功能和病理变化密切相关,具有重要免疫学功能.已有不少资料表明,HLA-I分子与乙型肝炎病毒感染关系密切,HLA-I分子的表达与乙型肝炎的转归有关,为进一步了解HLA-I分子与乙型肝炎的相关性,本文就有关问题作一综述.

酰胺类农药的分子中各种化学键的个数与其气相色谱相对保留值或相对响应值的相关关系研究

对避蚊胺、敌稗、甲草胺、乙草胺、氮酮、恶霜灵、甲霜灵、异丙甲草胺、腐霉利、苯噻草胺、噻嗪酮、丙草胺、丁草胺、异菌脲、噻螨酮、哒螨灵、脒鲜胺及定虫隆等 18种酰胺类农药的气相色谱相对保留值或相对响应值与其化学结构的关系问题进行研究。采用多元线性拟合法 ,求出了分子中各种化学键的个数、部分分子连接性指数与其气相色谱相对保留值或相对响应值关系的回归方程 。

K562和K562/AO2细胞HLA I类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLAI类分子和MHCI类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAI类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAI类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHCⅠ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化。结果表明:K562和K562/AO2细胞均不表达HLAI类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2明显增高(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比10∶1时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性。结论:MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLAI类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。

类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF2)基因多态性与鸡体脂性状的相关研究

以肉鸡和3个地方品种(北京油鸡,石岐杂,白耳鸡)以及海兰蛋鸡为试验材料,用1对引物对类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF2)基因的外显子2进行SNPs检测,探讨IGF2基因作为影响鸡脂肪性状候选基因的可能性。利用测序和单链构象多态(SSCP)的方法进行SNPs检测和基因型的分析。X2检验表明,139处点突变的基因型在各品种间差异极显著(P<0.01)。3种基因型与肉鸡屠体性状的最小二乘分析结果表明,BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于AB基因型的个体。初步推断IGF2基因可能是影响鸡脂肪性状的主效基因或与主效基因连锁,推测可以利用该位点对鸡的脂肪性状进行标记辅助选择。

H-2~b和H-2~d单体型小鼠MHCI类分子结合的HFRSV蛋白抗原表位的预测

本文通过对Ｈ－２ｂ和Ｈ－２ｄ单体型小鼠主要组织相容性抗原Ｉ类分子结合抗原肽的分析，建立了一个计算机预测模型，并对肾综合征出血热病毒核蛋白（ＮＰ）及囊膜糖蛋白Ｇ１和Ｇ２可与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ）小鼠ＭＨＣＩ类分子相结合的抗原表位进行了分析，预测出可分别与Ｈ－２Ｋｂ，Ｈ－２Ｄｂ，Ｈ－２Ｋｄ，Ｈ－２Ｄｄ和Ｈ－２Ｌｄ结合的核蛋白表位，依此各有７，１４，４，０和８个；囊膜糖蛋白Ｇ１＋Ｇ２的表位，依次有１４，１９，２７，２和４４个。

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA I类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶1混合培养24h)表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLAI类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:CNE2细胞与NK细胞持续性接触24h,CNE2细胞表面HLAI类分子表达无改变,MI-CA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降.本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.

MCI法在酚类结构与杀菌活性间的相关性研究

利用分子连接性指数方法计算部分酚类物质的分子连接性指数,发现它的变化与其分子中局部偶极矩值的变化一致,说明酚类物质的杀菌活性和该分子苯环上的连接有密切的关系。分子连接性指数方法分析结构-性质关系更为方便,为今后研究结构-性质-活性提供理论参考。