缺氧对人肝癌细胞MHCC-97L迁移的影响

目的:研究缺氧对人肝癌细胞MHCC-97L迁移的影响,并初步揭示其分子机制。方法:建立划痕实验检测缺氧条件下人肝癌细胞MHCC-97L迁移能力变化的可靠模型,研究Wnt5a对MHCC-97L细胞迁移的调控。结果:缺氧使MHCC-97L细胞缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt5a mRNA表达上调,并可促进MHCC-97L细胞迁移能力显著增强,干扰HIF-1α表达的MHCC-97L细胞在缺氧条件下Wnt5a mRNA表达显著降低,干扰Wnt5a表达的MHCC-97L细胞在缺氧环境中的迁移能力则明显降低。结论:在缺氧条件下MHCC-97L细胞迁移能力可发生明显改变,HIF-1α和Wnt5a调控其迁移过程。这些结果为深入阐明肝癌细胞转移和侵袭分子调控机制提供了新的实验线索。

GPC3对肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响

目的通过构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究GPC3对人肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响。方法用基因重组及限制性内切酶技术构建并鉴定表达载体pEGFP-c3-GPC3,通过脂质体介导转染人肝癌细胞株MHCC-97L,流式细胞术和G418筛选建立稳定细胞株;采用荧光定量PCR、Western blotting分别检测MHCC-97L中GPC3 mRNA和蛋白的表达情况,并在荧光显微镜下观察细胞荧光;MTT法检测GPC3对肝癌细胞MHCC97-L体外增殖能力的影响。结果经酶切及测序鉴定,确认成功构建真核表达载体pEGFP-c3-GPC3,荧光显微镜下观察到绿色荧光表达;从mRNA和蛋白水平证实,GPC3基因在转染后的MHCC-97L中成功表达;MTT生长曲线证实MHCC97-L/GPC3较其他两株细胞增殖显著加强(P<0.001)。结论成功构建pEGFR-c3-GPC3真核表达载体;筛选出稳定表达GPC3基因的MHCC97-L/GPC3细胞株;GPC3基因表达升高可促进肝癌细胞株MHCC97-L的增殖。

lncRNA SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌细胞侵袭及迁移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞侵袭及迁移中的作用。方法:收集2017年1月至2018年6月西安交通大学第一附属医院手术切除的20例HCC患者的癌与癌旁组织标本,以及人HCC细胞系HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh7和永生化人肝细胞LO2。利用生物信息学方法分析缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)与SNHG5的结合位点,将pCMV-HIF-1α、shRNA-SNHG5(sh-SNHG5)质粒转染进HCC细胞,用qPCR法检测HCC组织和缺氧条件下HCC细胞中SNHG5的表达水平,用Western botting检测HCC细胞中HIF-1α蛋白的表达水平,用Transwell小室法检测沉默SNHG5后常氧和缺氧条件下对HCC细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:分别与癌旁组织和LO2细胞比较,HCC组织和各细胞系中SNHG5表达水平显著上调(均P<0.01)。缺氧可上调HCC细胞中SNHG5的表达水平,其机制可能与缺氧活化HIF-1α与SNHG5启动子结合从而促进其转录有关;缺氧能够增强HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力(均P<0.01),沉默SNHG5表达能够显著抑制缺氧条件下HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力(均P<0.01)。结论:SNHG5在HCC组织及细胞系中高表达,并在缺氧诱导的HCC细胞侵袭及迁移中发挥重要作用。

槐耳颗粒逆转肝癌侧群细胞耐阿霉素的实验研究

目的观察槐耳颗粒对肝癌侧群(side population,SP)细胞阿霉素耐药性的影响。方法采用流式细胞术分离肝癌细胞株MHCC-97L的SP细胞和非SP细胞,分选后的细胞分别经阿霉素(500 ng·mL-1)处理。采用不同质量浓度非细胞毒性剂量(0、2、4、8 mg·mL-1)的槐耳来进行分组实验。MTT法测定细胞增殖活性,并计算细胞抑制率,Western blotting检测耐药转运蛋白P-gp、ABCG2表达水平。结果SP细胞集落形成能力明显强于非SP细胞,形成集落数分别为5.3±1.9、2.2±1.5(P<0.01);槐耳能抑制SP细胞增殖,在质量浓度为10和12 mg·mL-1时更为明显(P<0.05),且在质量浓度为4和8 mg·mL-1时即可增强阿霉素对SP的增殖抑制作用(P<0.05);槐耳能减少耐药转运蛋白P-gp(P<0.05)和ABCG2(P<0.01)的表达。结论槐耳能减少并逆转肝癌SP细胞对阿霉素的耐药性。