主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A-自然杀伤细胞2族成员D通路及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,与其特异性结合,活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,发挥免疫监视作用。本文就近5年来有关MICA-NKG2D通路的表达、调控及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。

组织相容性Ⅰ类相关链A位点基因多态性在预判肾移植物排斥中的意义

目的研究组织相容性Ⅰ类相关链A位点（MICA）基因多态性和抗MICA特异性抗体在肾移植排斥反应发生中的意义。方法采用免疫磁珠液相芯片技术对40例肾移植患者在移植术前和移植术后1个月、3个月、6个月、1年和2年动态检测抗MICA抗体的特异性和阳性分值的变化,同时采用SSOP方法分析16对肾移植供受者的MICA基因分型,并把MICA基因具有相同抗原表位的特征性分为G1组和G2组。结果在40例肾移植中尸体供肾35例,亲缘活体供肾5例。35例肾移植受者均带肾存活良好,其中33例接受动态随访。移植术前预存抗MICA抗体为12例,其中抗MICA抗体10例、抗HLA-Ⅰ类＋MICA抗体2例;4例分为MICA-G1组、6例分为MICA-G2组、2例共为MICA-G1和G2组。16对供受者MICA等位基因频率分布：在MICA-G1组中频率M﹡002最高,M﹡007次之;MICA-G2组中频率M﹡008最高,M﹡009和M﹡019次之。33例移植术后有4例新生抗MICA抗体,3例新生抗HLA抗体,均为抗供者特异性抗体和抗非供者特异性抗体。移植术前预存抗MICA抗体,在移植术后1～2年的动态随访中其特异性均未改变,而抗体的阳性分值呈现高低的变化。12例移植术前预存抗MICA抗体中的3例和抗体阴性1例移植术后发生急性排斥反应,临床表现为发热,尿量减少,肌酐和肾动脉阻力指数升高。33例动态随访资料显示：无论是MICA基因频率分布特点,还是抗MICA特异性抗体类型与排斥反应的关系,M﹡002、M﹡004、M﹡008、M﹡019和M﹡001基因型最常见,但未见MICA﹡012和MICA﹡006基因型。结论移植术前分析供受者的MICA基因多态性,受者的特异性抗体鉴定和特征性分组;移植术后动态监测抗MICA抗体的变化,是肾移植术后预防急性和慢性移植物排斥的重要靶分子。

K562和K562/AO2细胞HLA I类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLAI类分子和MHCI类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAI类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAI类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHCⅠ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化。结果表明:K562和K562/AO2细胞均不表达HLAI类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2明显增高(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比10∶1时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性。结论:MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLAI类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA I类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶1混合培养24h)表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLAI类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:CNE2细胞与NK细胞持续性接触24h,CNE2细胞表面HLAI类分子表达无改变,MI-CA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降.本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.

结肠癌组织中MICA和ADAM10的表达及其相关性

目的研究MHC I类相关分子A(MHC classⅠchain-related A,MICA)及ADAM10在结肠癌中的表达及其与临床病理学参数之间的关系,并探讨两者的相关性,为结肠癌细胞表面MICA蛋白脱落机制的研究提供组织学依据。方法应用免疫组织化学方法,采用SP法检测有完整资料的90例结肠癌组织及30例癌旁组织中MICA和ADAM10的表达差异。结果在癌组织和癌旁组织中,MICA蛋白表达阳性率分别为67.8%和7.1%,ADAM10蛋白表达阳性率分别为82.2%和20%,差异均具有显著性(P<0.01),并且与淋巴结转移有关(P<0.05),MICA与ADAM10表达呈负相关性(r=-0.258,P<0.05)。结论 MICA的表达降低与AD-AM10的表达升高,可能共同参与了肿瘤的免疫逃逸及肿瘤的转移;且ADAM10在膜型MICA的脱落机制中发挥重要作用。

IFN-γ诱导人单核细胞MICs分子表达

目的:研究IFN-γ对MHC-I类链相关分子(MICs)表达的调节作用。方法:采用密度梯离离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),以免疫磁珠法从PBMC中特异性分选单核细胞,以细胞因子IFN-γ、TNF-α或IFN-α刺激PBMC、纯化单核细胞或单核细胞系U937、THP-1后,以流式细胞术检测单核细胞表面MICs分子表达。结果:IFN-γ选择性上调人PBMC中单核细胞表面MICs表达;IFN-γ对人原代单核细胞及单核细胞系U937、THP-1细胞表面MICs分子表达均有诱导或上调作用,细胞因子TNF-α、IFN-α对单核细胞MICs分子表达无影响。IFN-γ诱导或上调表达的MICs分子不能被MICA或MICB特异性单克隆抗体(mAb)所识别,可能是一种新的MIC分子或MIC等位基因。结论:IFN-γ能诱导或上调人单核细胞表面MICs分子表达。

食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A／B表达及其临床意义

目的研究食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A／B（MICA／B）基因蛋白的表达情况，探讨其与食管癌患者临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测40例食管癌和癌旁组织中MICA／B蛋白的表达情况，并分析其与食管癌患者临床病理特征的关系。结果MICA／B蛋白在细胞质和细胞膜中呈阳性表达，MICA／B蛋白在食管癌组织中的阳性表达率为75．0％（30／40），在癌旁组织中呈阴性，二者比较差异有统计学意义（P〈0．001）。MICA／B蛋白表达与食管癌组织学分级有关（P〈0．05），与食管癌患者的年龄、性别、分期、浸润深度和淋巴结转移无关（均P〉0．05）。结论MICA／B蛋白表达可能在食管癌的发生发展中起重要作用，并可作为诊断食管癌的分子标志物。

非小细胞肺癌血清sMICA、microRNA-99a、DJ-1表达及临床意义

目的 分析血清可溶性MHCⅠ类链相关分子A(sMICA)、microRNA-99a、DJ-1蛋白(DJ-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)诊断及预后评估价值。方法 收集2019年6月至2022年6月本院收治的NSCLC患者90例(NSCLC组),另选取本院同期健康体检志愿者90例(对照组)。对患者进行为期6个月随访,随访截止至2023年1月。采用ROC曲线评估sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断价值。采用多元Logistic回归分析影响NSCLC患者预后的关系。结果 NSCLC组sMIC、DJ-1表达水平高于对照组,microRNA-99a表达水平低于对照组(P<0.05);ROC曲线结果显示:sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断AUC值分别为0.742(95%CI:0.642~0.842)、0.759(95%CI:0.660~0.859)、0.789(95%CI:0.698~0.901)。90例患者中预后良好69例,预后不良21例。预后不良者sMIC、DJ-1表达水平高于预后良好组,microRNA-99a表达水平低于预后良好组(P<0.05);预后不良者TNM分期(III-IV期)、低分化占比高于预后良好组(P<0.05);两组在年龄、性别、肿瘤直径、病理类型中比较差异无统计学意义(P>0.05)。经多元Logistic回归分析:临床分期、分化程度、sMICA、microRNA-99a、DJ-1为影响NSCLC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 相对健康人群,NSCLC患者sMICA、DJ-1水平高,microRNA-99a水平低;三指标水平与患者预后密切相关,通过检测血清三者水平可为患者后续诊疗、预后评估提供参考资料。

NK细胞与K562细胞之间相互免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨NK细胞与K562细胞混合培养前、后其杀伤活性的变化及分子机制。方法:流式细胞仪检测NK细胞与K562细胞混合培养前、后细胞表面相应分子的变化,LDH释放法测定效靶比20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:相互编辑前,K562细胞表面MICA/MICB的表达率为(79.90±0.87)%,NK细胞表面NKG2D、KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为(98.27±0.67)%、(45.70±1.22)%和(35.60±1.35)%。相互编辑后,K562细胞表面MICA/MICB和NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(35.56±1.01)和(34.67±3.88)%,均明显低于编辑前(P=0.000);NK细胞表面KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为(47.20±1.08)%和(34.03±1.20)%,与编辑前比较差异均无显著性(P>0.05)。效靶比20∶1时,NK细胞对编辑后的K562细胞的杀伤活性为(24.07±0.58)%,编辑后的NK细胞对K562细胞的杀伤活性为(16.95±2.00)%,均明显低于编辑前NK细胞对K562细胞的杀伤活性[(54.03±3.46)%](P=0.000)。结论:NK细胞与K562细胞持续性接触后,双方发生了相互免疫编辑作用;NK细胞的杀伤活性下降,其分子机制是细胞表面相应的配受体发生了变化。

低表达MICA/MICB导致NK细胞对人鼻咽癌多药耐药细胞(CNE2/DDP)杀伤活性下降

目的探讨HLAⅠ类分子及MHCⅠ类链相关分子(MICA/MICB)在人鼻咽癌细胞株CNE2及多药耐药细胞株CNE2/DDP的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测CNE2和CNE2/DDP细胞表面HLAⅠ类分子和MICA/MICB的表达情况;LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAⅠ类分子单抗(W6/32)和抗MICA/MICB单抗(BAMO-1)分别封闭HLAⅠ类分子和MICA/MICB,观察NK细胞杀伤CNE2、CNE2/DDP细胞活性的变化。结果CNE2/DDP细胞表面HLAⅠ类分子和MICA/MICB的表达均较CNE2细胞明显减少(P<0.01)。NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性在效靶比5∶1时分别是(9.37±2.14)%、(4.37±0·63)%;效靶比10∶1时分别是(27.14±1.82)%、(15.79±2.87)%;效靶比20∶1时分别是(36.40±4.28)%、(26.20±4·18)%;效靶比301时分别是(54.67±2.80)%、(40.29±2.73)%。各效靶比时NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性与HLAⅠ类分子和MICA/MICB相关,NK细胞对CNE2/DDP细胞的杀伤活性明显低于CNE2细胞(P<0.01)。效靶比10∶1时,W6/32明显增强NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性(P<0.01),BAMO-1明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性(P<0.01)。结论HLAⅠ类分子和MICA/MICB在CNE2、CNE2/DDP的表达差异影响着NK细胞的杀伤活性,MICA/MICB在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。

垂体腺瘤组织中NF-κB、MMP-9、MICA的表达变化及意义

目的观察垂体腺瘤组织中NF-κB、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MHC-Ⅰ类链分子相关抗原A(MICA)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法对垂体腺瘤组织和正常脑组织中的NF-κB蛋白、MMP-9蛋白及MICA蛋白进行检测;采用qRT-PCR法对垂体腺瘤组织及正常脑组织中的NF-κB mRNA、MMP-9 mRNA、MICA mRNA进行检测。结果垂体腺瘤与正常脑组织中NF-κB蛋白阳性表达率分别为100%(40/40)、30%(6/20),MMP-9蛋白阳性表达率分别为100%(40/40)、15%(3/20),MICA蛋白阳性表达率分别为100%(40/40)、0;两组比较,P均<0.01。垂体腺瘤与正常脑组织中NF-κB mRNA相对表达量分别为13.045±6.200、2.040±2.067,MMP-9 mRNA相对表达量分别为28.770±7.661、2.369±1.460,MICA mRNA相对表达量分别为231.817±41.046、5.062±3.849;两组比较,P均<0.05。NF-κB蛋白与MICA蛋白、MMP-9蛋白表达均呈正相关(r分别为0.368、0.345,P均<0.05)。结论 NF-κB、MMP-9及MICA在垂体腺瘤组织中高表达,NF-κB可能通过促进MMP-9及MICA表达而促进垂体腺瘤发生、发展。

白藜芦醇抑制结肠癌干细胞增殖并增强MICA/B的表达

目的研究白藜芦醇(Res)对结肠癌干细胞(CCSC)增殖、凋亡和免疫原性的影响。方法采用无血清培养法由HCT116结肠癌细胞诱导培养CCSC,通过检测CCSC标志物CD133、CD44进行鉴定。MTT法检测Res对CCSC增殖的影响;annexinⅤ-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测Res对CCSC凋亡的影响;流式细胞术检测Res对CCSC生长周期及主要组织相容性复合体Ⅰ类分子相关链A/B(MICA/B)表达的影响。结果 HCT116细胞在无血清培养下成球生长。球形细胞中CD133+细胞占91.07%±1.79%,CD44+细胞占90.33%±1.78%。与对照组相比,Res能明显抑制CCSC增殖,并且呈时间、剂量依赖性;Res作用48 h后,CCSC细胞周期G0/G1期比例显著升高,S期下降,呈剂量依赖性;随着药物浓度增加,CCSC的凋亡率增加,MICA/B的表达增强。结论从HCT116结肠癌细胞成功诱导培养出CCSC,Res能剂量依赖性地抑制CCSC的增殖,与阻滞细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡有关;Res能增强CCSC中MICA/B的表达,增强其免疫原性。

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的:分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A and B,MICA/B)的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法:用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶(ataxia telangiectasia mutated and Rad3-related kinase,ATM/ATR),加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pynolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB),观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果:三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到(1.68±0.17)、(2.54±0.25)、(3.42±0.15)倍(P<0.05);MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍(P<0.05)。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高(P<0.05)。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高(P<0.05)。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达(P<0.05),且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、5、10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍(P<0.001),MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍(P<0.05),MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍(P<0.001),表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC(10、50、100μmol/L),MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制(P<0.05),提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论:拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。

结直肠癌患者围手术期NK细胞受体CD69、NKG2D及其配体MICA/B的表达

目的研究结直肠癌(CRC)逃避抗肿瘤免疫监视的机制以及手术对NK细胞免疫功能的影响。方法流式细胞术检测外周血NK细胞受体CD69、NKG2D的阳性细胞百分数,组织MICA/B的阳性细胞百分数。ELISA检测血清sMICA的浓度。结果 CRC患者术前CD69、NKG2D的阳性细胞百分数均低于对照组,sMICA浓度值高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);CRC患者术后CD69的阳性细胞百分数显著高于术前和对照组,术后NKG2D的阳性细胞百分数显著低于对照组,sMICA浓度值显著高于对照,差异均有统计学意义(P<0.01);术后NKG2D的阳性细胞百分数、sMICA浓度值与术前比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。而CRC组MICA/B的阳性细胞百分数明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CRC患者血清高水平的sMICA,抑制了NKG2D-MIC介导的抗肿瘤免疫,导致其NK细胞抗肿瘤免疫低下。手术去瘤可以提高CRC患者NK细胞CD69的表达,但NKG2D低表达、sMICA高浓度的情况术后短期内不能迅速逆转。

丙戊酸钠通过MEK/ERK信号通路上调NKG2D配体表达增强NK细胞对A375人黑素瘤细胞的杀伤

目的探讨丙戊酸钠(VPA)通过丝裂原激活激酶激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)信号通路对自然杀伤细胞2组成员D(NKG2D)配体表达及自然杀伤(NK)细胞杀伤黑素瘤细胞的影响。方法采用1 mmol/L VPA处理对数生长期的A375细胞24 h,Western blot法检测主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子A(MICA)、主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子B(MICB)、磷酸化的MEK(p-MEK)、MEK、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)与ERK1/2的蛋白表达水平;流式细胞术检测MICA与MICB的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK92细胞对A375黑素瘤细胞的杀伤活性;使用MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059联合VPA处理A375细胞,Western blot法检测MICA、MICB蛋白表达,流式细胞术检测MICA与MICB的表达;LDH释放法检测NK92细胞对A375黑素瘤细胞的杀伤活性。非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠成瘤实验检测黑素瘤体积变化,免疫组织化学染色法检测MICA与MICB的表达。结果与对照组相比,VPA组A375细胞MICA与MICB的表达升高,NK92细胞对A375细胞的杀伤率增加,p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2比值升高。与VPA组相比,VPA联合PD98059组A375细胞MICA与MICB的表达降低,NK92细胞对A375细胞的杀伤率降低;与NK92细胞组相比,NK92细胞联合VPA组NOD/SCID小鼠肿瘤体积减少,MICA与MICB表达升高;与NK92细胞联合VPA组相比,NK92细胞联合VPA和PD98059组NOD/SCID小鼠肿瘤体积增加,MICA与MICB表达降低。结论VPA上调黑素瘤细胞MICA与MICB表达,增强NK92细胞对黑素瘤的杀伤活性,可能与MEK/ERK信号通路的激活有关。

放疗对食管癌患者血清可溶性MI CA含量及外周血NK细胞功能的影响

目的探讨经不同剂量高能X线照射后食管癌患者血清可溶性MHC—I类分子链相关基因A（sMI-CA）含量、自然杀伤细胞（NK细胞）表面NK细胞2族成员D（NKG2D）受体的表达及其杀伤毒性的变化。方法采用ELISA法检测中晚期食管癌患者（n=28）和正常对照（n=21）血清sMICA的含量，并动态分析6例食管癌患者经不同剂量高能X线照射后血清sMICA含量的变化。采用流式细胞术检测NK细胞NKG2D受体的表达，胞内染色法分析NK细胞杀伤靶细胞功能的变化。结果与正常对照相比，食管癌患者血清sMICA含量明显升高，但不同放疗剂量对食管癌患者血清sMICA含量无显著影响。食管癌患者外周血阳性表达NKG2D的NK细胞比例与正常对照相比显著降低，同时其细胞毒活性亦明显降低。而且与治疗前相比，40～60Gy的放疗剂量时NKG2D阳性的NK细胞数增加，同时其NK细胞毒活性最强。结论放疗对食管癌患者血清sMICA含量无明显影响，但适量放疗可使NK细胞毒活性增强。

肿瘤对自然杀伤细胞的杀伤敏感性研究

自然杀伤细胞(NK细胞)是机体抗肿瘤的第一道防线,是机体天然免疫的主要承担者,也是获得性细胞免疫的核心调节细胞。NK细胞对肿瘤的杀伤活性与其细胞表面受体和肿瘤细胞表面的配体密切相关,由于肿瘤细胞表面配体表达不同致使对NK细胞杀伤的敏感性有很大差异,临床疗效不一。我们简要介绍了影响肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性的机制,对目前提高肿瘤细胞敏感性的策略和方法进行了总结。

丙戊酸钠对CIK细胞杀伤K562细胞活性的影响

目的观察丙戊酸钠(VPA)对细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞杀伤K562细胞活性的影响。方法通过半定量RT-PCR、流式细胞术等方法检测经VPA诱导的K562细胞MICA的mRNA和蛋白表达情况。MTT法检测CIK细胞对经VPA诱导的K562细胞的杀伤活性。结果经VPA诱导的K562细胞的MICA-mRNA、细胞膜MICA表达增加;CIK细胞对经VPA诱导的K562细胞的杀伤活性增加,杀伤活性与K562细胞膜MICA表达呈正相关。结论VPA可以上调K562细胞MICA的表达,进而增加其被CIK细胞杀伤的敏感性。

丙戊酸钠对肺癌细胞MICA蛋白表达的影响及其信号转导机制

目的研究丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)作为组蛋白去乙酰酶抑制剂对肺癌A549细胞人类MHCⅠ类分子链相关基因A(human MHC classⅠchain-related A,MICA)蛋白表达的影响,并初步探讨其信号转导机制。方法使用不同浓度的VPA刺激处于对数生长期的肺癌A549细胞,培养24h后使用RT-PCR法检测肺癌A549细胞MICA mRNA水平,Western blot法检测MICA蛋白水平,得出最佳VPA刺激浓度。分别以丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的3条主要通路抑制剂即ERK1/2抑制剂(PD98059)、p38蛋白激酶抑制剂(SB203580)、JNK抑制剂(SP600125)预处理A549细胞,再将VPA依照预定最适浓度分别加入培养24h。使用RTPCR法检测A549细胞MICA mRNA水平,Western blot法检测MICA蛋白水平。使用ELISA法检测上述各组A549细胞培养上清液中分泌型MICA(sMICA)蛋白水平。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示加入VPA后A549细胞中MICA mRNA转录水平、MICA蛋白水平均显著升高(均P<0.05);使用p38蛋白激酶抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059预处理,均能显著减弱VPA诱导的A549细胞MICA mRNA及蛋白水平的提高(P<0.05);各组细胞培养上清液中sMICA浓度无差异。结论 VPA能增强肺癌A549细胞MICA蛋白的表达,其机制可能与ERK、p38信号通路有关。

HER2阳性乳腺癌组织中MICA/B的表达及其临床意义

目的:通过检测MHC-Ⅰ类分子链相关蛋白A/B(MHC classⅠchain-related protein A/B,MICA/B)在HER2阳性乳腺癌组织中的表达水平,探讨其与患者临床病理特征的关系。方法:收集2009年1月至2010年6月在南方医科大学附属郑州人民医院乳腺外科手术切除的HER2阳性乳腺癌标本62例及其临床资料,免疫组化法检测乳腺癌组织中MICA/B的表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系。结果:MICA/B表达率为90.32%,高表达为64.52%。MICA/B的表达与患者的临床分期、ER、PR表达有关(均P<0.05),与绝经、淋巴结转移、组织学分级无关(均P>0.05)。结论:MICA/B的表达可能与HER2阳性乳腺癌的发生发展有关,有望成为免疫治疗的新靶点。