MICA外显子5多态性与成人迟发自身免疫型糖尿病的相关性研究

目的:探讨MICA外显子5多态性与深圳成人迟发自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults,LADA)的关系。方法:对21例LADA、28例2型糖尿病(T2DM)患者和31例正常人(NC)采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术和PAGE银染技术,对三组研究对象比较MICA外显子5多态性差异。结果:LADA患者A5.1等位基因频率显著高于正常对照组(35.7%vs.17.7%,=2.89,P<0.05);2型糖尿病MICA等位基因频率与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MICA5.1等位基因与深圳市LADA易感性相关。

用芯片电泳快速检测人p53基因外显子8上的突变点

目的 :建立简单快速的分析方法检测基因突变。方法 :利用修饰引物进行特异性单碱基延伸 ,采用Cy5荧光染色标记的ddNTP ,并通过芯片电泳来检测。结果 :实测了合成人p5 3基因外显子 8上突变点的 3种可能形态 (野生型 ,突变型和杂合型 ) ,并测定了一系列不同比例突变率的混合样本 ,最低至 5 %突变率。所有样本分别于芯片电泳中在 10 0s之内被检测出来。结论 :该方法操作简单易行 ,可用于快速检测已知的基因突变。

宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性及其与肉质性状的关联

【目的】揭示宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性及其与肉质性状的关联。【方法】采用PCR产物直接测序法检测了120头宣和猪PRKAG3基因外显子5区域的SNP位点,借助最小二乘模型分析了各位点不同基因型及合并基因型对6个肉质性状的影响。【结果】宣和猪PRKAG3基因外显子5区域检出3个SNP位点,包括2个同义突变位点(T579C、T580C)和1个错义突变位点(G595A),分别以TT、TT、GA基因型和T、T、G等位基因的频率最高,且都处于Hardy-Weinberg平衡状态。T579C、T580C位点的TT和TC基因型可显著提高大理石纹(P<0.05)和降低失水率(P<0.01),分别呈显著的加性效应及加性—显性效应(P<0.05或P<0.01);G595A位点的AA基因型失水率最低(P<0.05)、熟肉率最高(P<0.05),呈显著的加性效应(P<0.05);3个位点的合并基因型TTTTGG、TCTCGG和TTTTAA分别具有最高的大理石纹、pH1和最低的失水率(P<0.05或P<0.01),CCCCGG基因型的大理石纹和pH1最低、失水率最高(P<0.05或P<0.01)。【结论】研究结果进一步确认宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性与肌肉大理石纹、pH值和失水率显著关联,T579C、T580C位点的CC基因型和G595A位点的GG基因型具有协同降低猪肉品质的效应。

食管癌p53基因第5外显子突变影响因素的病例对照研究

目的:探讨p53基因第5外显子基因突变的影响因素方法:应用DNA序列分析技术和病例对照研究方法,分析西安和林州食管癌p53基因第5外显子的突变情况及其影响因素结果:西安和林州p53基因第5外显子突变率分别为14.3%(6/42)和18.6%(8/43),两地突变率比较差异无显著性.西安不经常食用新鲜蔬菜者突变率(37.5%)显著高于经常食用新鲜蔬菜者(8.8%,P<0.05),P=6.20(0.97-39.7).林州食用酸菜者突变率(38.5%)显著高于不食用酸菜者(17.1%,P<0.05),P=5.63(1.10-28.84).其余因素与p53基因第5外显子突变未见显著性差异.结论:在西安经常食用新鲜蔬菜可减少p53基因第5外显子突变发生,在林州经常食用酸菜可增加p53基因第5外显子突变的机率.

胃癌中抑癌基因FHIT外显子5纯合性的缺失与突变

目的 探讨候选的抑癌基因FHIT外显子 5在胃癌中纯合性缺失与突变的情况。方法 用PCR方法研究外显子 5的纯合性缺失 ,用PCR SSCP研究外显子 5的点突变。结果 在 32例原发性胃癌中外显子 5的纯合性缺失率为9 38% (3/ 32 ) ,没发现外显子 5存在点突变。结论 FHIT外显子

贵州本地山羊STAT5A基因第10外显子SNP研究

利用黔北麻羊、贵州黑山羊和贵州白山羊构建DNA池,设计1对引物扩增其STAT5A基因第10外显子及部分内含子序列。PCR产物纯化后进行双向测序。DNAStar和BLAST分析确定多态性位点。利用生物信息学软件分析SNPs位点对STAT5A基因RNA二级结构、STAT5A蛋白二级及三级结构的影响。结果表明:在扩增的STAT5A基因中筛选到3个SNPs:C-32A、G+71A和G+158A,其中G+71A为错义突变,导致编码的丙氨酸(Ala)变为苏氨酸(Thr);C-32A和G+158A均在内含子区,不参与氨基酸编码。SNPs位点对STAT5A基因RNA二级结构和STAT5A蛋白结构均有一定影响。

喉鳞癌中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及突变研究

目的探讨喉鳞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因第5,8外显子纯合性缺失及突变的情况。方法分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测41例LSCC中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及点突变。结果LSCC中,第5外显子纯合性缺失率为26.8%(11/41),且与患者TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);第8外显子纯合性缺失率为29.3%(12/41),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05);FHIT基因第5,8外显子的纯合性缺失有明显的相关性(P<0.01);所有标本没有检测到第5,8外显子的点突变。结论LSCC中,FHIT基因第5,8外显子为其基因缺失的重要靶区,两者的纯合性缺失可作为检测LSCC生物学行为的重要标志。LSCC中,点突变可能不是FHIT基因失活的主要机制。

人类pax-5基因外显子1B的5′侧翼区碱基序列分析(英文)

pax 5基因是B细胞生成和B细胞发育中的重要转录因子。为了更好的理解 pax 5基因表达的调节机制 ,对 pax 5基因外显子 1B的 5′侧翼区进行了分离克隆及序列测定。整段碱基序列 (6 6 71bp)分析表明 ,无TATAbox共同序列存在 ,近侧启动子包括 3CATboxs,1SP1和 1Ebox ,上游进一步推测的调节位点显示 6LMO2 COM ,5NFAT ,2LPOLYA B ,3GATA1,2AP4 ,10MZF1,1ETS1 B ,1GATA3,1NKX2 5 ,2RORA1,1LYF1,2Ikaros2 ,2TCF11,1GATA C和 1FREAC7,并确定在序列上。因此 ,pax 5基因外显子 1B的 5′侧翼区与 pax 5表达的调节有关 。

乳腺癌nm23 基因第5外显子检测及其临床意义

用 Ｐ Ｃ Ｒ— Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ方法对 ４４ 例乳腺癌患者进行 ｎｍ ２３ 基因第 ５ 外显子检测，１１ 例发生突变（２５％ ）。将１１ 例突变患者分为两组，一组（６ 例）加大放疗、化疗剂量，另一组（５ 例）常规治疗。随访２ 年，前组６ 例中仅１ 例复发，后组５ 例中３ 例复发，二者有显著差异。提示检测ｎｍ ２３ 基因第５ 外显子对乳腺癌的治疗和预后判断具有重要意义。

MICA外显子5多态性与成人迟发自身免疫型糖尿病的相关性研究

目的:探讨分析MICA外显子5多态性与成人迟发自身免疫型糖尿病(LADA)的相关性情况。方法:选取2010年5月-2013年8月收治的LADA患者33例(LADA组),另选取同期收治的2型糖尿病患者35例(T2DM组)及正常体检者40例(NC组),对比观察三组患者MICA外显子5多态性的差异。结果:LADA组患者MICA第5外显子中A5.1等位基因的频率相比NC组明显增高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。而其他等位基因型分布与NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05);T2DM组患者MICA第5外显子等位基因多态性分布与NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:LADA患者的MICA基因外显子5多态性与正常人有异,其中等位基因A5.1与LADA发病存在较密切相关性,是LADA的重要危险因素,也可视为LADA的一种遗传性指标。

13个鸡品种NLRC5基因外显子8多态性分析

本研究采用PCR-SSCP方法对13个鸡品种的NLRC5基因外显子8的多态性进行了SNP检测,共检测到2个等位基因,2种基因型,其中北京油鸡、固始鸡、皖南三黄鸡、大骨鸡群体中检测到AA和AB两种基因型,其余群体中只检测出AA基因型。序列分析结果显示,在NLRC5基因外显子8的43bp处存在G/A突变,将该突变翻译为氨基酸仍然为缬氨酸,因此该突变是一个同义突变;

ASPM基因纯合变异致原发性小头畸形5型一例及遗传学分析

常染色体隐性遗传小头畸形(autosomal recessive primary microcephaly,MCPH)又称原发性小头畸形或真性小头畸形,是以脑容量减少为特征的神经发育障碍疾病,具有遗传异质性,主要临床特征是出生时枕额周长低于年龄和性别匹配平均数的2个标准差(s)或更多,6个月后低于3个s,并且伴随一定程度非进行性智力退化^([1])。全世界MCPH的发病率在1/250 000~1/30 000^([2])。

全外显子家系测序在WDR35基因复合杂合变异导致SRPS-5胎儿产前诊断中的价值

目的探讨全外显子家系测序(Trio-WES)在诊断WDR35基因复合杂合变异导致短肋-多指综合征5型(SRPS-5)中的应用价值。方法收集1例引产儿产前诊断的临床资料,采用Trio-WES对引产儿皮肤组织及其父母外周血进行基因测序,采用SIFT、PolyPhen-2及Mutation Taster软件对筛选出的可疑变异进行生物危害性分析,并建立模型预测变异可能导致的蛋白结构变化。结果引产儿母亲孕22^(+3)周时的超声检查结果提示胎儿四肢长骨发育水平明显滞后,伴双侧肱骨、股骨弯曲,胸围小且胸腔狭窄,肋骨短且双肺受压变小。基因测序提示胎儿WDR35基因存在复合杂合变异,分别为父亲携带的c.799G>A/p.Val267Met杂合变异与母亲携带的chr2:20151176-20151245杂合缺失变异。检索Pubmed和HGMD数据库均未发现该变异相关报道,属WDR35基因的新变异,其中变异位点c.799G>A/p.Val267Met在多物种间高度保守,蛋白结构预测提示可能改变局部空间稳定性。结论WDR35基因缺陷可能是患儿长骨明显短且弯曲,短肋伴肺发育不良等症状的致病因素。Trio-WES可精确诊断胎儿期SRPS-5。

人类MICA基因多态与氯氮平致白细胞减少症的关联分析

目的探讨M ICA基因第5外显子微卫星多态性与氯氮平诱发的白细胞减少症的关联性。方法应用聚合酶链反应和片段长度多态性分析,对93例健康对照者和72例氯氮平(或氯丙嗪)诱发白细胞减少者作M ICA基因第5外显子的多态性研究。结果(1)发现M ICA第5外显子的5种等位基因,并确定了在病例组和健康对照组中的分布频率。(2)表明M ICA第5外显子的A5和A5.1等位基因与精神药物诱发白细胞减少症有关联。(3)M ICA基因的等位基因和基因型分布在氯氮平诱发白细胞减少者与健康对照者之间无差异,但是在氯氮平诱发白细胞减少者与服非氯氮平者之间有显著差异。(4)氯氮平诱发白细胞减少与M ICA第5外显子的A5(OR=0.36,P<0.05,95%C I=0.86-0.15)和A5.1(OR=6.47,P<0.05,95%C I=31.50-1.33)相关联。结论M ICA基因的等位基因A5.1可能是氯氮平诱发白细胞减少症的风险因子,但是对于氯氮平不是专一的。

马鹿生长激素基因的克隆与5′侧翼序列分析

根据报道的哺乳动物GH基因序列设计引物 ,首次利用PCR方法扩增和克隆了马鹿GH基因 ,该基因大小约为 1.8kb .对该基因上游 34 0bp核苷酸测序及分析表明 ,测序区域包括 5′侧翼序列 ,第一外显子和部分第一内含子 .第一外显子所编码的所有氨基酸与猪的相比完全相同 .初步认为GH基因在马鹿基因组中为单基因 .

胃癌组织中p53基因突变及蛋白表达的研究

目的探讨胃癌组织中p53基因第5～8外显子突变率及p53蛋白的表达。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和银染技术,对30例胃癌石蜡包埋组织中p53基因第5～8外显子突变率进行检测;同时应用免疫组织化学Envision二步法检测胃癌组织中p53的表达水平。结果30例胃癌石蜡标本中有11例发生p53基因的突变,突变率为36.67%。病理组织学观察胃癌中乳头状腺癌/管状腺癌(分化较好)16例,低分化腺癌/印戒细胞癌(分化较差)14例。p53蛋白随胃癌的分化程度降低而增加,阳性表达率递增(P<0.05)。结论胃癌组织中p53基因突变及p53蛋白高表达在胃癌的发生中有重要的作用及意义。从石蜡包埋组织中提取DNA进行分子生物学检测适用于肿瘤研究。

大豆11S球蛋白Gy5(A_3B_4)的基因克隆和序列分析

大豆11Ｓ球蛋白(Ｇｌｙｃｉｎｉｎ)是大豆种子的主要贮藏蛋白,分子量为360ｋＤ,由6对相同的蛋白亚基(每对亚基的分子量约60ｋＤ)构成。每对亚基又是由一个酸性Ａ肽(35～45ｋＤ)和一个碱性Ｂ肽(22ｋＤ)通过二硫键连接而成。Ａ肽和Ｂ肽源自同一个基因,即首先由一个大的ｍＲ?..

外显子测序技术在一个尿道下裂家系基因分析及产前诊断中的应用

目的采用外显子测序(exon sequencing,ES)联合Sanger测序技术检测1个尿道下裂家系的致病基因,并对这一致病基因进行产前诊断。方法采集先证者及其父母的外周血,并提取DNA。对先证者的DNA进行性腺疾病相关基因的外显子测序找到致病基因,并针对该致病基因对先证者父母的DNA进行Sanger验证,明确是遗传自亲代。对先证者母亲再次妊娠的羊水标本提取DNA,采用Sanger测序对该致病基因行产前诊断。结果先证者SRD5A2(NM_000348):c.607G>A,P.(Gly203Ser)杂合突变及c.680G>A,P.(Arg227Gln)杂合突变组成的复合杂合突变。而其表型正常的母亲为SRD5A2(NM_000348):c.607G>A,P.(Gly203Ser)杂合突变;其表型正常的父亲为SRD5A2(NM_000348):c.680G>A,P.(Arg227Gln)杂合突变。先证者母亲再次妊娠产前诊断结果为SRD5A2(NM_000348):c.680G>A,P.(Arg227Gln)杂合突变。结论 ES联合Sanger测序可用于检测尿道下裂家系的致病基因及进行产前诊断。且此方法快速、准确、经济。

3例SUN5基因变异导致无头精子症的遗传学分析和助孕治疗结局

畸形精子症是男性不育的常见原因之一[1],其中无头精子症(acephalic spermatozoa syndrome,ASS)是一种严重导致男性不育的罕见畸形精子症,其特征是精液中含有无头精子尾部和一些松散的精子头部,主要表现为头颈部连接处异常[2-3],精子在电子显微镜下通常显示精子头部和尾部之间缺少植入窝和基板[4]。ASS有2种亚型:一种类型表现为没有细胞核的小“针头样”精子,另一种类型是头颈部错误连接的精子[3,5]。

先天性糖基化障碍Ⅰq型患儿基因检测结果分析和文献回顾

目的对1例先天性糖基化障碍(CDG)-Ⅰq型患儿的临床特征和遗传学特点进行分析,并进行文献回顾。方法收集1例CDG-Ⅰq型患儿临床资料,对患儿及其父母进行全外显子组家系测序(Trio-WES)。对筛选出的变异位点进行生物信息学分析,并采用Sanger测序进行验证。检索同类病例报道文献,总结CDG-Ⅰq型患儿临床和遗传学特征。结果患儿主要表现为发育迟缓伴特殊面容,头颅磁共振成像提示脑外间隙增宽。Trio-WES检测结果提示患儿SRD5A3基因存在复合杂合变异[NM_024592.5:c.411G>A(p.Trp137Ter)和c.208_c.209insA(p.Asp70Glufs*150)],该变异dbSNP数据库、千人基因组数据库和ExAC数据库均未收录,ClinVar和HGMD数据库也未见该变异位点相关报道。共检索到国内外报道的34例CDG-Ⅰq型患儿的详细临床信息,主要临床特征为发育迟缓、眼部疾病、皮肤病和其他表型,SRD5A3基因变异类型主要为无义变异和移码变异。结论报道的CDG-Ⅰq型患儿为SRD5A3基因新发变异所致,丰富了SRD5A3基因变异谱。Trio-WES有助于CDG-Ⅰq型的精准诊断。