pLXSN-MICA~＊ 008和pLXSN-MICA~＊ 001在人成纤维细胞表达

目的:建立表达MICA* 008和MICA* 001蛋白的人包皮成纤维(human foreskin fibroblast,HFF)细胞,为研究MICA基因的免疫功能提供生物学材料。方法:组织块法原代培养HFF细胞;用脂质体将质粒pLXSN,pLXSN-MICA* 008和pLXSN-MICA* 001转染PA317包装细胞后收集病毒颗粒,再将病毒颗粒感染HFF细胞,G418筛选14天,扩增耐药细胞,westernblot检测MICA* 008和MICA* 001蛋白表达情况。结果:逆转录病毒载体pLXSN,pLXSN-MICA* 008和pLXSN-MICA* 001经包装细胞PA317包装可产生有感染能力的病毒,该病毒感染HFF细胞后,westernblot检测出外源蛋白MICA* 008和MICA* 001。结论:建立了表达MICA* 008和MICA* 001蛋白的人成纤维细胞。

MICA新等位基因MICA＊008：05的DNA序列鉴定及分析

目的：采用直接测序法及克隆测序法确认新等位基因 MICA＊008：05。方法采用 Sequence Base Typing（SBT）法分型技术对MICA的多态性进行常规基因分型，采用克隆测序法进行确认并与已知的等位基因序列进行比对。结果发现1个样本在外显子3上有1个碱基位置与国际通用MICA数据库不相符。该基因与MICA＊008：01：01相比在外显子3的碱基位置591出现突变（C→T），密码子位置174由TCC→TCT，相应编码氨基酸是同义突变。结论 DNA测序结果表明该基因序列为新的MICA等位基因，已提交GenBank，并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为MICA＊008：05。