MIDI Sherlock微生物自动鉴定系统鉴定方法的建立——以贻贝中分离的蜡样芽胞杆菌为例

研究了用MIDI Sherlock微生物自动鉴定系统对贻贝中分离的蜡样芽孢杆菌自动鉴定方法的建立,通过培养基和取菌量的不同展开分析,并用生理生化鉴定和PCR鉴定来验证其准确性.结果表明：MIDI鉴定系统对于用TSBA培养基培养的蜡样芽孢杆菌鉴定的准确率比用营养琼脂培养基培养的要高,而且取菌量为100~120mg组鉴定时的准确率要高于其他取菌量的组,说明培养基和取菌量的不同都会对该系统的鉴定结果产生影响.最后确定蜡样芽孢杆菌鉴定方法为：TSBA培养待检微生物,获菌量控制在100~120 mg之间,生理生化鉴定和PCR鉴定验证了该方法的准确性.

MIDI自动鉴定系统在贻贝菌相分析中的应用

以7—10月的新鲜紫贻贝为试验材料优化培养基,从中分离纯化出各种细菌,并采用MIDI微生物自动鉴定系统结合PCR的方法分析贻贝整体及各部位的优势菌相。试验结果表明,选用加5%贻贝汁和2.5%营养琼脂作为培养基较好;新鲜贻贝的优势菌主要由弧菌、芽孢杆菌和腐败希瓦氏菌组成,而弧菌和腐败希瓦氏菌集中在表面,芽孢杆菌在肠腺占82%;对分离的蜡样芽孢杆菌菌株进行16SrDNA序列分析,发现其与GeneBank中的4,5,6,7株蜡样芽孢杆菌的16SrDNA序列相似性均达到99%,因此,应用MIDI微生物自动鉴定系统鉴定贻贝中优势细菌是可行的。

浓香型大曲中多株芽孢杆菌的分离及鉴定

采用传统微生物分离方法从浓香型白酒大曲中筛选出8株优势芽孢杆菌,通过形态特征观察并结合细菌脂肪酸鉴定技术(MIDI鉴定系统)对其进行鉴定。结果表明,从大曲中分离筛选得到8株芽孢杆菌分属于5个种,分别为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。

糟鱼中乳酸菌的分离鉴定及鳓鱼发酵条件优化

研究了一种微生物接种发酵技术与传统糟鱼制备工艺相结合的新方法,以期实现传统糟制水产品的工业化、标准化改造。利用MRS选择性培养基从传统糟鱼产品中分离得到优势微生物,采用基础微生物学结合MIDI微生物自动鉴定系统进行鉴定。采用传统糟制工艺和微生物接种制备发酵鳓鱼,测定不同条件下蛋白质含量、总酸、挥发性盐基氮(TVBN)、氨基态氮、pH等指标的变化。通过单因素试验确定糟/鱼比、发酵温度和接菌量3个影响因素的水平,利用响应面法得到最佳工艺。结果表明:传统糟鱼中分离出的菌株鉴定为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum);发酵温度对发酵鱼的影响表现为,温度过高时鱼肉还未形成糟鱼风味已快速软化、腐败,过低不利于微生物繁殖而使发酵不成熟。酒糟量影响糟鱼口感,接菌量对发酵时间影响显著;响应面法优化鳓鱼的最佳工艺为:糟/鱼比2.5%、发酵温度20℃、接菌量2.28%。验证试验表明:此工艺可使熟化时间从传统糟制的30d以上缩短至12d;和纯乳酸菌接种发酵相比,虽发酵时间稍长,但产品更具传统糟鱼的独特风味。

长白山湿地细菌群落结构分析及优势菌株鉴定

对长白山北坡和西坡不同湿地的土壤细菌的群落结构及优势菌株进行了总体研究.采用PCR-DGGE分子生物学技术,对湿地土壤样品中总DNA的16SrDNA的V3区进行PCR扩增,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)对扩增产物进行分离.回收了26个清晰的条带,对其中19个特征性条带进行了测序,除了条带12、13、16为可培养的微生物外,其他16个条带都是不可培养微生物.通过传统培养法,利用MIDI微生物鉴定系统,对8种可培养的最优势菌株进行了分析,各菌种分别为Bacillus sp.,Bacillus licheniformis,Virgibacillus pantothenticus,Bacillus cereus,Micrococcus luteus,Paenibacillus alginolyticus,优势菌株间的相似性水平较低.

无菌药品生产环境微生物的鉴定和种群分析

目的:对无菌药品洁净区生产环境发现的微生物进行菌种鉴定和种群分析,初步建立环境微生物数据库,为微生物的溯源调查和污染控制提供科学依据,确保药品的安全。方法:对冻干粉针剂生产车间B级洁净区动态监测发现的148株菌株进行分离纯化,通过菌体收获、皂化、甲基化、萃取、碱洗涤提取脂肪酸,采用MIDI Sherlock全自动微生物鉴定系统进行鉴定和种群分析。结果:148株分离菌株分属于15个属31个种,出现频次较高的属依次为葡萄球菌属、微球菌属和节杆菌属,三个属的菌种出现的频次占全部分离菌株的77.7%。在所有分离菌株中,出现频次较高的菌株依次为藤黄微球菌、科氏葡萄球菌、人葡萄球菌、克氏葡萄球菌和变金黄节杆菌,这5种细菌出现的频次占全部分离菌株的69.0%。结论:在洁净区环境监测中,发现较高频次的是以人源性葡萄球菌属、微球菌属等为主的菌株,因此,规范进入洁净区的人员行为规范和采用科学合理的清洁消毒程序,将有助于减少由人员导致的微生物污染。