柔嫩艾美耳球虫MIF基因克隆及生物信息学分析

【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因CDS区,探究其生物信息学特征,为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定,根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列,利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区,构建pET28a-EtMIF重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析;利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列,全长348 bp,共编码115个氨基酸,相对分子质量为1.203×104。系统进化树结果表明,柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近,相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,共有10个磷酸化位点;含有1个保守结构域,二级结构由无规则卷曲(35.65%)、延伸链(30.43%)、α-螺旋(27.83%)和β-转角(6.09%)组成,三级结构预测结果与二级结构一致。存在3个最佳潜在抗原表位。【结论】本试验成功克隆出柔嫩艾美耳球虫MIF基因,并对其进行了生物信息学分析,为今后MIF基因的功能研究及基因工程疫苗候选分子的筛选提供参考。

人MIF基因-794CATT_(5-8)微卫星多态性与结核病易感性关系的研究

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(Migration inhibitory factor,MIF)-794CATT微卫星多态性与结核病易感性的关系。方法:对151名确诊结核患者及149名健康体检者外周血DNA收集后,通过PCR扩增后对结核病人和正常人MIF基因启动子-794区CATT重复序列进行测序分析。结果:结核病人组MIF基因启动子-794区CATT重复序列拷贝数5/5:12人(7.95%),5/6:21人(13.91%),6/6:38人(25.17%),6/7:53人(35.10%),7/7:15人(9.93%),7/8:12人(7.95%):正常对照组5/5:12人(8.05%),5/6:33人(22.15%),6/6:40人(26.85%),6/7:52人(34.90%),7/7:6人(4.03%),7/8:6人(4.03%)。结核病人组拷贝数7/7和7/8的频率较对照组明显升高。结论:MIF-794CATT重复序列数为7/7和7/8可能与结核易感性相关,并在结核病的发病中起重要作用。

巨噬细胞在MIF基因修饰瘤苗诱导小鼠抗肿瘤免疫中的作用

目的：研究巨噬细胞游走抑制因子（ＭＩＦ）基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应的机理。方法：ＭＩＦ基因修饰的ＦＢＬ３瘤苗小鼠免疫后，观察腹腔巨噬细胞数量和功能的变化。结果：ＭＩＦ基因修饰的瘤苗免疫后，小鼠腹腔巨噬细胞的数量，表面免疫相关分子的表达，以及ＴＮＦ－α和ＮＯ的分泌水平增高，吞噬功能、杀伤活性和抗原提呈功能增强。结论： ＭＩＦ基因修饰的瘤苗体内免疫后，其分泌的ＭＩＦ显著增强了巨噬细胞的功能，被活化的巨噬细胞在瘤苗诱导机体抗肿瘤免疫中起重要的作用。

miR-146a靶向调控MIF基因对胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对胶质瘤细胞增殖的影响。方法回顾性收集2017年6月至2019年7月济南市人民医院收治的经手术病理证实的胶质瘤患者36例,取胶质瘤组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-146和MIF表达水平。体外培养U87胶质瘤细胞系,检测U87中miR-146a水平,并将U87细胞株分为转染miR-146a模拟物组(miR-146a mimic组)和miR-146阴性对照组(NC组)。采用双荧光素酶检测系统和集落形成实验分析miR-146a与MIF 3’UTR基因靶向关系。采用RT-PCR检测U87细胞转染miR-146a mimic和NC后,MIF mRNA和蛋白表达水平。结果脑胶质瘤组织miR-146a水平为0.30±0.13,显著低于癌旁组织(0.63±0.19),MIF水平为0.54±0.08,显著高于癌旁组织(0.41±0.15),差异均有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics+pGL3-MIF 3’UTR-Wt共转染组荧光信号为0.43±0.18,显著低于NC组(1.07±0.26),差异有统计学意义(P <0.05)。NC组集落形成率为(59.43±10.39)%,显著高于miR-146a组[(42.67±8.50)%],差异有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics转染U87细胞后,MIF mRNA和MIF蛋白表达量为0.41±0.15、0.38±0.13,显著低于NC组(1.16±0.24、1.40±0.29),差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 miR-146a与脑胶质瘤关系密切,miR-146a可通过靶向调控MIF基因,影响脑胶质瘤细胞增殖能力。

巨噬细胞移动抑制因子的研究进展

1人类巨噬细胞移动抑制因子介绍 1.1 MIF基因及蛋白结构人类巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）基因小于1kb，包括3个外显子和2个内含子，外显子长度为66、107、172个碱基，内含子为94个和188个碱基。D-多巴色素互变异构酶的基因（DDT）是唯一与MIF具有同源性的基因，与MIF共同定位于22号染色体[1]。提示，MIF与DDT基因可能来源于同一个原始基因，在不断进化中变成具有不同生物功能的2个基因，哺乳动物MIFs与DDT高达90%的同源性。

HMG盒蛋白1抑制巨噬细胞移动抑制因子启动子的转录激活

HMG盒蛋白1(HMG box-containing protein 1,HBP1)是一种转录抑制因子.HBP1表达上调可抑制肿瘤细胞的增殖和转移,并且在肿瘤细胞中HBP1常常发生丢失或转位,这表明HBP1是一种抑癌基因.HBP1所调节的靶基因无疑将为HBP1的肿瘤抑制机制提供新的线索.本研究通过生物信息学分析发现,在促细胞增殖基因-巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)启动子区域-811 bp至-792 bp发现高亲和力的HBP1反应元件.缺失和突变分析表明,HBP1通过该元件抑制MIF启动子活性.此外,免疫共沉淀研究显示,HBP1在细胞内与该元件结合,并且抑制MIF的转录.功能分析进一步证实,在细胞培养液中加入重组MIF可部分消除HBP1对大肠癌细胞LOVO的抑制作用.这些结果提示,MIF是HBP1的一个靶基因.HBP1通过抑制促细胞增殖基因MIF的表达抑制肿瘤细胞生长.

确定一种1型糖尿病的关键基因

1型糖尿病影响着约100万美国人的健康．并且在世界范围内其影响的人数呈不断增长趋势。日前．研究人员检测出了一种可能在1型糖碌病的发展过程中起到关键性作用的基因。这一发现可能促进新药物的研制和针对这种疾病基因治疗的开展。