miR-2467、miR-96-5p在妊娠期糖尿病中的临床意义

目的:探讨微小核糖核酸-2467(miR-2467)、miR-96-5p在妊娠期糖尿病(GDM)中的临床意义。方法:纳入108例GDM住院患者作为GDM组,另选取同期产检的糖耐量正常孕妇82例为对照组。比较2组血清miR-2467、miR-96-5p相对表达量以及空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2hFBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析miR-2467、miR-96-5p与上述血糖指标的相关性。采用Logistic多元回归模型分析GDM发生的危险因素,绘制受试者工作特征曲线,分析miR-2467、miR-96-5p评估GDM的曲线下面积(AUC)。结果:GDM组血清miR-2467表达、FBG、2hPG、HbA1c水平及HOMA-IR高于对照组,miR-96-5p表达低于对照组(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示血清miR-2467表达与FBG、2hPG、HbA1c、HOMA-IR呈正相关,血清miR-96-5p表达与上述4项指标呈负相关(P均<0.05)。Logistic多元回归分析示孕早期BMI增长≥1.73kg/m^(2)、孕中期BMI增长≥4.88kg/m^(2)、糖尿病家族史、miR-2467≥3.44是GDM发生的危险因素,miR-96-5p≥1.95是GDM发生的保护因素(P<0.05)。血清miR-2467联合miR-96-5p评估GDM的AUC为0.865,敏感度、特异度分别为91.50%、81.50%。结论:miR-2467、miR-96-5p与GDM患者血糖指标及HOMA-IR存在相关性,对评估GDM具有一定意义。

乳腺癌患者血清HOTAIR、miR-331-3p水平预测术后复发的风险模型构建与验证

目的探讨乳腺癌患者血清HOX转录反义RNA(HOTAIR)、miR-331-3p水平与术后复发的关系,并构建风险模型。方法选取2019年6月至2021年6月我院乳腺癌手术患者108例为研究组,另选取同期健康体检者45例为对照组。比较两组血清HOTAIR、miR-331-3p水平,统计乳腺癌患者术后2年复发情况,采用Cox回归分析乳腺癌患者术后复发影响因素,建立列线图预测模型并验证。结果研究组血清HOTAIR、miR-331-3p水平高于对照组(P<0.05);Cox回归模型分析结果显示,临床分期Ⅲ期、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性、血清HOTAIR与miR-331-3p高表达均为乳腺癌患者术后复发独立危险因素,雌激素受体(ER)表达阳性、孕激素受体(PR)表达阳性、术后化疗、术后内分泌治疗是保护因素(P<0.05);列线图模型预测的准确性和有效性较好。结论临床分期Ⅲ期、HER2阳性、血清HOTAIR与miR-331-3p高表达均为乳腺癌患者术后复发独立危险因素,ER阳性、PR阳性、术后化疗、术后内分泌治疗是保护因素,且据此建立的列线图模型具有较高的预测价值。

基于映射理论的教师教学能力培养MIR-DC模型应用效果的实证研究

"MIR-DC"模型是以职前教师教学能力培养为目标,通过微格和信息化交互网平台,实现师生校内外互动,从而诊断、矫正和提升学生教学行为的模型。文章依据映射理论,通过实证研究,对"MIR-DC"培训效果进行科学的评估和论证。结果发现,"MIR-DC"系统对学生教学能力的提升起到显著影响,这一影响表现在两个方面:一是"MIR-DC"系统对教学能力培养可以独立施加影响;二是"MIR-DC"系统对学生主观意识(自我效能感和培训兴趣)具有映射作用,这一映射作用能够提升学生教学能力培训效果。

抑郁模型大鼠脑脊液miR-16与中缝核miR-16、5-羟色胺转运体表达的关联性研究

目的研究抑郁模型大鼠脑脊液miR-16是否能反映中缝核miR-16水平的变化,并与中缝核5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)的表达相关。方法将20只SD大鼠随机分为抑郁模型组和对照组,每组各10只。抑郁模型组大鼠接受21 d不可预知温和应激的刺激,对照组大鼠正常饲养。收集大鼠脑脊液测定miR-16,分离中缝核测定miR-16和SERT蛋白。比较模型组与对照组脑脊液miR-16、中缝核miR-16、SERT表达差异并分析三者的关联性。结果模型组大鼠脑脊液miR-16水平(0.19±0.10)和中缝核miR-16水平(0.65±0.22)均低于相应的对照组(0.35±0.12、0.84±0.18)(P<0.01),中缝核SERT水平(0.99±0.29)高于对照组(0.59±0.18)(P=0.002)。脑脊液miR-16与中缝核miR-16呈显著正相关关系(r=0.95,P=0.000),而且脑脊液miR-16与中缝核miR-16一样,与中缝核SERT呈显著负相关(r=-0.91,P=0.000)。结论抑郁模型大鼠脑脊液miR-16水平能反映中缝核miR-16水平,并与中缝核SERT表达相关,可能可作为抑郁症的生物标记物。

结直肠癌中miR-21表达与临床病理因素及预后的关系

目的探讨结直肠癌组织中miR-21表达与临床病理因素及预后的关系。方法取59例结直肠癌组织标本及癌旁正常黏膜组织标本,采用茎环逆转录实时荧光定量PCR方法检测结直肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miR-21的相对表达量,并分析癌组织中miR-21表达与临床病理因素的关系。用Kaplan-meier法计算生存率,采用log-rank检验、Cox比例风险回归模型分析结直肠癌预后影响因素。结果结直肠癌组织中miR-21的相对表达量明显高于其癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。结直肠癌组织miR-21表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期有关(均P<0.05);与性别、远处转移、分化程度、浸润深度和肿瘤位置无关(均P>0.05)。远处转移、分化程度、miR-21表达水平是影响患者预后的独立危险因素(均P<0.05),其RR值及95%CI分别为5.053(1.395~5.787)、3.998(1.395~18.305)、3.837(1.266~11.631)。结论 miR-21与结直肠癌患者预后和疾病进展密切相关。

miR-31促进脊髓损伤后Nestin和NSE表达

目的对脊髓损伤的miR-31转基因小鼠继发性损伤的恢复状况进行了解,进一步了解和探究miR-31在脊髓损伤修复中起到的促进作用。方法使用Impactor M-Ⅲ脊髓撞击器分别对FVB小鼠和miR-31转基因小鼠进行击打,成功建立小鼠脊髓损伤模型。术后于3d、7d、14d、21d进行BBB评分、H E染色、免疫荧光检测和荧光定量PCR检测。结果两组小鼠在制作脊髓损伤模型后,HE染色结果恢复趋势虽大体相同,但BBB评分显示在7d、14d,miR-31转基因小鼠的脊髓损伤恢复状况优于FVB小鼠。免疫荧光和PCR检测显示:Nestin在14d、21d两个时间点上miR-31转基因小鼠高于FVB小鼠;miR-31转基因小鼠NSE的表达量高于FVB小鼠。结论 miR-31在脊髓损伤后可能发挥着促进神经干细胞再生,改善脊髓损伤模型脊髓内微环境,促进脊髓损伤的恢复的作用。

抑郁模型大鼠不同部位miR-16表达及其与5-羟色胺转运体的关联性研究

目的研究miR-16在慢性不可预知温和应激抑郁症模型大鼠神经系统不同部位的表达及其与5-羟色胺(5-HT)转运体的关联性。方法对照组和慢性不可预知温和应激抑郁模型组大鼠各10只,模型组大鼠接受21天的不可预知温和应激刺激,对照组大鼠正常饲养。两组大鼠麻醉后收集脑脊液,测定miR-16。然后断头处死,分离前额叶皮质、中缝核、海马,测定miR-16和5-HT转运体蛋白。结果模型组大鼠脑脊液和中缝核的miR-16相对表达量低于对照组,中缝核miR-16与5-HT胺转运体呈负相关;而前额叶皮质和海马中的miR-16、5-HT转运体分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论中缝核miR-16可能通过调节5-HT转运体的表达,参与抑郁症的病理过程,脑脊液miR-16亦可能与抑郁症相关。

miR-185-5p影响小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移的研究

目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 通过前期研究获得乳腺癌中表达显著下调的miR-185-5p, NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列;EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡能力的影响;利用C57BL/6小鼠建立皮下肿瘤模型和肺转移模型,观察过表达miR-185-5p对体内肿瘤增殖能力以及肺部转移情况的变化。结果 EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术结果分别显示,敲低miR-185-5p使PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著增强,抑制细胞凋亡;而过表达miR-185-5p抑制PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡;C57BL/6小鼠体内成瘤实验显示,过表达miR-185-5p减缓C57BL/6小鼠体内肿瘤生长速度;肺转移实验显示,过表达miR-185-5p抑制C57BL/6小鼠肺转移能力。结论 miR-185-5p作为抑癌基因抑制小鼠乳腺癌PY8119细胞体内外增殖、侵袭迁移的能力。

miR-145-5p靶向FGF5对缺血/再灌注损伤诱导的神经细胞凋亡和氧化应激的调控作用

目的研究miR-145-5p对体外缺血/再灌注(I/R)损伤神经细胞模型的调控作用,并探讨其机制。方法运用氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)建立脑缺血/再灌注损伤细胞模型。采用荧光素酶报告实验验证miR-145-5p与FGF5的靶向关系;RT-PCR、流式细胞术、Western blot等方法检测miR-145-5p对神经细胞HT22的凋亡和氧化应激损伤的影响。结果结果表明,与未进行OGD/R处理组(Normoxia组)相比,OGD/R处理6 h、12 h、24 h组凋亡率和氧化应激损伤明显增加。在OGD/R环境下,miR-145-5p inhibitor转染减轻HT22细胞凋亡和氧化应激损伤。然而,转染FGF5 siRNA逆转了这一效应。在OGD/R模拟的脑I/R损伤过程中,miR-145-5p通过靶向FGF5促进神经细胞凋亡和损伤。结论研究结果为缺血性脑卒中的治疗提供了一种新的治疗靶点。

miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究

目的探究微小RNA-198(miR-198)过表达对视网膜母细胞瘤(RB)Y79细胞系生长、侵袭及裸鼠异体移植瘤的影响。方法培养RB Y79细胞系,随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组和过表达组,采用Lipofectamine2000分别转染miR-NC、miR-198模拟物至阴性对照组和过表达组Y79细胞。qRT-PCR检测转染后Y79细胞中miR-198的相对表达水平;利用干细胞成球试验和Transwell小室试验分别检测各组Y79细胞的增殖及侵袭能力;Western blot检测各组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平。将培养好的miR-NC和miR-198 mimic细胞分别进行裸鼠皮下注射,60只裸鼠分为阴性对照组和过表达组,各组每5 d随机处死3只裸鼠,检测RB质量及体积,qRT-PCR检测瘤体中miR-198的mRNA相对表达水平;免疫组化法检测Ki67、SOX2、VEGF阳性表达率。结果与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中miR-198的相对表达水平较高(P<0.05),并且干细胞成球直径、数量、细胞侵袭率均较低(P<0.05);Western blot结果显示,与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平均较低(P<0.05)。过表达组裸鼠的瘤体质量及体积均小于阴性对照组(P<0.05),并且过表达组裸鼠瘤体组织中miR-198的mRNA相对表达水平高于阴性对照组(P<0.05),过表达组Ki67、SOX2、VEGF的阳性表达率低于阴性对照组(P<0.05)。结论miR-198可能在RB中作为抑癌基因发挥作用,过表达miR-198可明显抑制RB的增殖及侵袭能力,并抑制裸鼠瘤体生成。

miR-1202通过调控小鼠脑内的mGluR_4的表达在重度抑郁症中的作用

目的:探讨miR-1202在重度抑郁症中的作用及机制。方法:使用过表达miR-1202的腺相关病毒和慢性不可预见性应激模型的小鼠,通过旷场实验和强迫游泳实验等行为学实验来评估miR-1202的作用;通过Western-Blot实验来验证miR-1202的分子机制。结果:在抑郁症模型小鼠海马区域中过表达miR-1202发现抑郁症症状有所缓解,WB检测实验验证miR-1202的靶基因为mGluR4。结论:在小鼠海马区域中的miR-1202通过mGluR4参与了重度抑郁症,这为未来治疗抑郁症提供了一个新的靶点。

miR-34a改变自噬通路AMPK/mTOR的活性在心肌细胞肥大中的作用

目的研究mi R-34a与自噬通路磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶点(m TOR)在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的原代大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法体外培养原代大鼠心肌细胞,分成3组:阴性对照慢病毒(NC)组、AngⅡ刺激+阴性对照慢病毒(AngⅡ+NC)组、AngⅡ刺激+mi R-34a过表达慢病毒(AngⅡ+mi R-34a)组。激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化;利用荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测mi R-34a、心房钠尿肽(ANP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达;利用蛋白印迹(Western blot)测定AMPK/m TOR信号通路的活性变化。结果与NC组比较,AngⅡ+NC组心肌细胞表面积明显增大(P<0.05);与AngⅡ+NC组比较,AngⅡ+mi R-34a组心肌细胞表面积减少(P<0.05)。与NC组比较,AngⅡ+NC组的mi R-34a表达下调,ANP和β-MHC表达上调(均P<0.05);而与AngⅡ+NC组比较,AngⅡ+mi R-34a组的mi R-34a表达上调,ANP和β-MHC表达下调(均P<0.05)。与NC组比较,AngⅡ+NC组p-AMPK/AMPK增加,p-m TOR/m TOR减少(均P<0.05);与AngⅡ+NC组比较,AngⅡ+mi R-34a组p-AMPK/AMPK减少,p-m TOR/m TOR增加(均P<0.05)。结论 mi R-34a能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用部分是通过改变AMPK/m TOR的活性来实现的。

miR-125a增强多西他赛对乳腺癌生长的抑制作用

背景与目的:研究表明miR-125a通过下调Her-2或者Her-3的表达抑制乳腺癌细胞生长,可能是指导乳腺癌治疗的靶点。本研究旨在观察miR-125a是否具有增强多西他赛对乳腺癌细胞株和裸鼠荷瘤模型的生长抑制作用。方法:转染miR-125a联合不同浓度多西他赛处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株和MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型,观察细胞株和裸鼠接种肿瘤的生长情况。结果:miR-125a与多西他赛可协同抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株、MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型肿瘤的增殖,单纯转染miR-125a也可抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株的增殖。结论:miR-125a与多西他赛有协同抗乳腺癌作用,可成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点。

miR-140靶向调控SOX2在结肠癌中的作用机制研究

目的分析miR-140在结肠癌中的作用机制。方法qRT-PCR检测miR-140在结肠癌细胞和组织中的表达;CCK8法、细胞划痕实验检测miR-140对结肠癌HT29细胞增殖和迁移的影响。TargetScan筛选miR-140的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验进行验证;采用qRT-PCR和Western blot检测miR-140对SOX2表达的影响;检测SOX2在结肠癌细胞和组织中的表达;裸鼠皮下成瘤实验研究miR-140和SOX2对肿瘤生长的影响。结果miR-140在结肠癌组织和细胞中表达降低(P<0.01)。过表达miR-140能明显抑制结肠癌细胞HT29的增殖和迁移。SOX2是miR-140靶基因,并在结肠癌组织和细胞株表达升高(P<0.01);体内实验发现miR-140过表达能抑制SOX2的表达,以及细胞增殖及肿瘤生长(P<0.05)。结论miR-140通过靶向调控SOX2,从而抑制结肠癌细胞的增殖和迁移及裸鼠移植瘤的生长,在结肠癌中起抑癌作用。

miR-191在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨宫颈癌组织中miR-191的表达及其对患者预后的影响。方法:选取2012年12月至2014年12月在新乡市中心医院行手术治疗的107例宫颈癌患者的组织标本和46例行子宫肌瘤手术切除患者的正常宫颈组织标本(对照组),用qPCR术检测癌组织中miR-191表达水平。术后第1天开始随访,随访截止日期2019年12月31日,所有患者均随访满5年,以死亡作为终点事件,记录患者生存期和5年生存率,采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分别进行生存预后影响因素分析。结果:miR-191在宫颈癌组织中的表达水平显著高于对照组(P<0.01);是否高危HPV感染、不同病理分级、FIGO分期和是否发生淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-191表达水平差异比较有统计学意义(均P<0.01)。miR-191低表达组患者的5年生存率显著高于高表达组(81.48%vs 33.75%,χ^2=16.905,P<0.01);病理分级、FIGO分期、淋巴结转移和miR-191表达是影响宫颈癌患者预后的风险因素(HR=0.486、3.065、2.339和2.755,均P<0.05)。结论:miR-191在宫颈癌组织中高表达,且随着疾病的恶性进展而表达水平升高,有望成为宫颈癌早期诊断和预后评估的潜在生物标志物。

miR-155干预烧伤急性肺损伤模型大鼠:核转录因子κB通路的变化

背景:目前有研究关注核转录因子κB通路在烧伤大鼠急性肺损伤病理过程中的作用及机制,如miR-155靶向抑制KB激酶,进而减弱核转录因子κB活性,在烧伤大鼠急性肺损伤发挥作用,然而仍存在病理机制有待研究和确认。目的:观察miR-155通过核转录因子κB通路对烧伤大鼠急性肺损伤的影响。方法:采用温水水浴模拟烫伤法建立烧伤急性肺损伤大鼠模型,将烧伤大鼠随机分为烧伤急性肺损伤组、miR-155增强试剂组和miR-155抑制试剂组,液体复苏后,miR-155增强试剂组、miR-155抑制试剂组大鼠分别尾静脉注入5μL的miR-155-mimics和miR-155-inhibitions。酶联免疫吸附剂测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的变化情况;苏木精-伊红染色法观察3组肺组织形态变化;Western blot法检测核转录因子κB及环氧化酶2蛋白表达;免疫组织化学染色检测肺组织核转录因子κB蛋白表达。结果与结论:①苏木精-伊红染色结果表明,miR-155抑制试剂组、烧伤急性肺损伤组及miR-155增强试剂组肺组织损伤程度,逐渐加重(P<0.05);②酶联免疫吸附实验结果表明,与烧伤急性肺损伤组相比,miR-155增强试剂组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达增加(P<0.05),而miR-155抑制试剂组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达降低(P<0.05);③Western结果表明,与烧伤急性肺损伤组相比,miR-155增强试剂组核转录因子κB、环氧化酶2蛋白表达增加(P<0.05),而miR-155抑制试剂组核转录因子κB、环氧化酶2蛋白表达降低(P<0.05);④免疫组织化学染色结果显示,miR-155抑制试剂组核转录因子κB蛋白表达增强,呈深棕色,中性粒细胞、单核巨噬细胞、肺泡上皮细胞的胞质及胞核内核转录因子κB表达最明显;⑤上述数据证实,肺组织细胞中核转录因子κB活性降低,可以通过下调miR-155来实现,从而降低肺损伤组织间的炎症反应。实验于2018年6月经内江市第一人民医院动物伦理委员会批准(批准号:1801270)。

miR-145在糖尿病性勃起功能障碍大鼠发病机制中的作用

目的探讨miR-145基因在糖尿病性勃起功能障碍(ED)大鼠发病过程中的作用。方法建立糖尿病性ED大鼠动物模型,取阴茎海绵体组织,提取总RNA,qRT-PCR法检验miR-145在糖尿病性ED大鼠、糖尿病性勃起功能正常大鼠及正常大鼠阴茎海绵体组织中表达差异。结果 miR-145在糖尿病性ED大鼠阴茎海绵体组织中的表达量下降。结论糖尿病可导致大鼠阴茎ED,miR-145基因表达下调可能与ED发生有关。

颞叶癫痫大鼠癫痫持续状态后海马组织中let-7e和miR-23的表达变化

目的观察颞叶癫痫大鼠海马组织中let-7e和miR-23在癫痫持续状态（SE）后不同时间点的表达变化。方法 160只大鼠,随机分为生理盐水对照组10只、癫痫模型组150只,癫痫模型组制备氯化锂-匹罗卡品诱导的颞叶癫痫大鼠模型,并将SE后不同时间点（0 h、1 h、6 h、12 h、1天、2天、7天、10天、30天、50天）分为10个组,每组15只。采用荧光实时定量PCR检测各组大鼠海马组织let-7e和miR-23。结果癫痫模型组SE后0 h、1 h、6 h、12 h、1天、2天、7天、10天、30天、50天let-7e相对表达量分别为0.61、0.84、0.85、1.40、10.74、0.71、0.65、1.52、1.69、0.13,miR-23相对表达量分别为0.27、0.31、0.41、0.39、4.49、0.21、0.18、0.12、0.83、2.40,与生理盐水对照组比较,P均〈0.05。结论颞叶癫痫大鼠SE后海马组织中let-7e和miR-23均先出现表达水平上调,24 h达到峰值后表达水平下调,let-7e在10～30天表达水平再次升高,miR-23在30～50天表达水平再次升高。

miR-195表达载体构建及其对肝癌细胞株HepG2植瘤抑制效果的影响

目的研究miR-195对人肝癌细胞株HepG2肿瘤形成的影响。方法应用分子克隆技术构建miR-195表达载体;用脂质体转染以及克隆筛选技术,建立miR-195高表达HepG2细胞株,并通过测序及序列比对等进行鉴定;建立荷瘤小鼠模型,检测不同细胞系的肿瘤生长能力。结果通过测序及序列比对,证明miR-195表达载体构建成功;荧光显微镜观察结果显示,miR-195高表达HepG2细胞株成功构建,实时定量PCR鉴定结果表明,构建的miR-195高表达HepG2细胞株miR-195表达量为对照培养HepG2细胞株的2 000倍(P<0.01);植瘤实验证明,miR-195高表达可以抑制肿瘤的形成过程。结论作为抑癌的miRNA,miR-195有望成为肝癌基因治疗的效应分子。

miR-99a对帕金森模型细胞活力及ROS水平的影响

目的:分析miR-99a对帕金森病细胞模型作用。方法:采用Western blotting以及Real-time PCR方法,对miR-99a以及其靶基因FZD5表达水平进行研究。采用CCK-8方法,检测细胞存活力。结果:过表达miR-99a,可将MPP+抑制PC12细胞存活作用明显缓解,该作用是通过调控miR-99a/FZD5轴完成的。结论:miR-99a在帕金森病细胞模型中,可对MPP+导致的PC12细胞存活抑制作用明显缓解,是通过靶向及下调FZD5实现的。