敲低lncRNA MIR31HG对肝细胞癌细胞黏附、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)MIR31HG对肝细胞癌(HCC)细胞黏附、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法体外传代培养高侵袭性HCC细胞系MHCC97H、低侵袭性HCC细胞系MHCC97L以及人正常肝细胞系LO2,采用RT-qPCR法检测各细胞系lncRNA MIR31HG、miR-361相对表达量,选择lncRNA MIR31HG相对表达量较高的HCC细胞进行后续实验。取HCC细胞,随机分为对照组和敲低组,对照组转染NC siRNA,敲低组转染MIR31HG siRNA,转染6 h更换新鲜培养基,继续培养48 h,采用RT-qPCR法验证转染效率。收集两组转染后细胞,采用细胞-基质黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin等EMT相关蛋白表达。通过LncBase V.2在线软件预测lncRNA MIR31HG与miR-361的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MIR31HG与miR-361的靶向调控关系。结果MHCC97H、MHCC97L细胞lncRNA MIR31HG相对表达量均高于LO2细胞,miR-361相对表达量均低于LO2细胞(P均<0.05);MHCC97H细胞lncRNA MIR31HG相对表达量高于MHCC97L细胞,miR-361相对表达量低于MHCC97L细胞(P均<0.05)。因此,选择MHCC97H细胞进行后续实验。敲低组lncRNA MIR31HG相对表达量低于对照组(P<0.05)。敲低组细胞黏附、侵袭和迁移能力均低于对照组(P均<0.05)。敲低组E-cadherin蛋白表达高于对照组,N-cadherin、Fibronectin蛋白表达均低于对照组(P均<0.05)。经LncBase V.2在线软件预测,lncRNA MIR31HG存在与miR-361的结合位点;双荧光素酶报告基因实验证实,转染MIR31HG WT+miR-361 mimics的HCC细胞荧光素酶活性低于转染MIR31HG WT+NC mimics的HCC细胞(P<0.05),而转染MIR31HG MUT+miR-361mimics与MIR31HG MUT+NC mimics的HCC细胞荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论HCC细胞lncRNA MIR31HG高表达;敲低lncRNA MIR31HG则能抑制HCC细胞的黏附、侵袭和迁移以及EMT,其机制可能与lncRNA MIR31HG能够靶向调控miR-361有关。

miR-214与MIR31HG在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中微小RNA(miR)-214及MIR31HG的表达及其临床意义。方法回顾性分析2016年2月-2017年2月于中国医科大学附属盛京医院胸外科行手术治疗的NSCLC患者104例,应用荧光实时定量PCR检测NSCLC癌组织和癌旁组织中miR-214与MIR31HG的表达,分析组间miR-214与MIR31HG的表达差异及其与临床病理特征之间的关系,采用ROC曲线分析miR-214与MIR31HG对NSCLC的预测价值。结果 NSCLC癌组织与癌旁组织的miR-214相对表达量分别为(0.37±0.08)、(1.15±0.09),MIR31HG的相对表达量分别为(8.15±1.15)、(1.33±0.31)两者具有统计学意义(t/P=64.877/0.000,58.230/0.000)。癌组织中miR-214及MIR31HG表达与肿瘤分期、组织学分级有关(tmiR-214=12.462、13.834,P=0.000、0.000;tMIR31HG=11.573、12.278,P=0.000、0.000),而与患者病理类型、肿瘤直径及是否存在淋巴结转移无关(P>0.05)。癌组织中miR-214与MIR31HG表达呈负相关(r=-0.618,P=0.000)。miR-214预测NSCLC的敏感度为0.823,特异度为0.772;MIR31HG预测NSCLC的敏感度为0.807,特异度为0.854。结论 NSCLC癌组织中miR-214表达降低,MIR31HG表达升高,二者可能与NSCLC的发生发展有关,有希望成为预测NSCLC发生、发展的肿瘤标志物。

LncRNA MIR31HG通过诱导细胞周期阻滞抑制食管鳞癌细胞增殖活性

本研究探讨lnc RNA MIR31HG对食管鳞癌细胞增殖活性的影响.利用定量PCR检测MIR31HG在食管鳞癌标本及其癌旁组织、人食管上皮细胞系Het-1A和食管鳞癌细胞系Eca-109、EC-1、KYSE30中的表达;采用过表达质粒pc DNA3.1-MIR31HG在食管鳞癌细胞系中过表达MIR31HG;MTT法和SRB法检测细胞增殖率;细胞周期分析试剂盒检测细胞周期进程;Caspase3活性检测试剂盒分析Caspase3活性;PCR和Western blot法检测p53、Caspase3及Bcl-2的m RNA和蛋白质表达水平.结果显示,食管癌组织中MIR31HG表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);与Het-1A细胞相比,Eca-109、EC-1、KYSE30细胞中MIR31HG的表达均显著下调(P<0.05),提示MIR31HG可能介导食管癌的发生发展.转染pc DNA3.1-MIR31HG可显著上调食管癌细胞中MIR31HG的m RNA表达(P<0.01),且MIR31HG过表达可显著抑制食管癌细胞增殖活性(P<0.05),减少S期细胞数(P<0.05),增加G1期细胞数(P<0.05),提示MIR31HG可能通过阻碍细胞周期G1期~S期进程抑制食管癌细胞增殖活性.此外,MIR31HG过表达显著增加Caspase3活性,增加Caspase3和p53的m RNA和蛋白质表达水平,同时抑制Bcl-2 m RNA和蛋白质表达水平.这表明,MIR31HG可通过抑制食管癌细胞的增殖活性阻碍食管癌的发生发展,这可能为食管癌的诊断和治疗提供新策略.

甲状腺乳头状癌组织中lncRNA MIR31HG表达变化及意义

目的探究甲状腺乳头状癌(PTC)患者癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)MIR31HG的表达变化及意义。方法选取PTC患者86例,术中采集其PTC组织及癌旁正常组织(距离肿瘤边缘>2 cm),用荧光定量PCR法检测组织中lncRNA MIR31HG表达,并分析其表达变化与患者临床病理特征的关系;对患者进行随访,统计5年存活率;用Kaplan-Meier生存曲线(Log-rank检验)分析lncRNA MIR31HG表达与PTC患者预后的关系;COX回归分析PTC患者不良预后的危险因素。结果PTC组织中lncRNA MIR31HG相对表达量较癌旁正常组织高(t=24.008,P<0.05)。不同性别、年龄患者PTC组织中lncRNA MIR31HG的表达比较差异无统计学意义(P均>0.05)。TNM分期Ⅲ、Ⅳ期,肿瘤直径>2 cm、局部浸润及伴淋巴结转移的患者PTC组织中lncRNA MIR31HG表达高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期,肿瘤直径≤2 cm、无局部浸润及无淋巴结转移的患者(P均<0.05)。以PTC组织中lncRNA MIR31HG表达的平均数1.468为界值,分为高表达组42例,低表达组44例。高表达组5年OS低于低表达组(χ2=4.949,P<0.05)。lncRNA MIR31HG高表达、肿瘤TNM分期高及淋巴结转移是PTC患者预后不良的独立危险因素。结论lncRNA MIR31HG在PTC组织中呈高表达,其可能参与肿瘤的发生发展,并影响患者预后。

长链非编码RNA MIR31HG在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞耐药性的影响

目的分析长链非编码RNA MIR31HG在胰腺癌中的表达情况及其与患者临床特征的关系,探讨其对胰腺癌细胞耐药性的影响。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测MIR31HG的表达情况,分析MIR31HG表达与胰腺癌患者临床特征的关系。将SiMIR31HG转染至AsPC-1、PANC-1、Capan-2胰腺癌细胞中,分别作为SiA组、SiB组、SiC组;将空载体转染至AsPC-1、PANC-1、Capan-2胰腺癌细胞中,分别作为NC1组、NC2组、NC3组。采用CCK-8实验和Transwell小室检测胰腺癌细胞的增殖和迁移能力。分析下调MIR31HG表达对PANC-1、AsPC-1细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)半数抑制浓度(IC50)的影响。检测同一浓度5-FU处理下各组细胞的存活情况。结果胰腺癌组织中MIR31HG的表达水平明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。胰腺癌细胞AsPC-1、PANC-1、Capan-1、Capan-2、SW1990中MIR31HG的表达水平均高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6c-7(P﹤0.05)。肿瘤直径﹥3 cm、有远处转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化、CA19-9水平高的胰腺癌患者胰腺癌组织中MIR31HG的表达水平均高于肿瘤直径≤3 cm、无远处转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化、CA19-9水平低的胰腺癌患者(P﹤0.05)。下调MIR31HG表达后,胰腺癌细胞的迁移和增殖能力均下降(P﹤0.01)。SiA组和SiB组细胞的IC50均低于NC1组和NC2组(P﹤0.05);在同一浓度5-FU处理下,SiA组、SiB组细胞的存活率均低于NC1组和NC2组(P﹤0.05)。结论长链非编码RNA MIR31HG在胰腺癌组织和细胞中的表达水平均较高,且MIR31HG的表达情况可能与胰腺癌患者的肿瘤直径、临床分期、远处转移情况、分化程度、CA19-9水平有关。下调MIR31HG的表达可抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移,并可增强胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,降低其耐药性。

人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响

目的:检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法:通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA(LncRNA)MIR31HG全长序列,分子克隆至 pcDNA3.1 (―)真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系(PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组)和对照细胞系(PC9-pcDNA3.1,空载体组)。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果:琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.05)。CCK-8检测,在培养24、36和48 h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01)。划痕愈合实验,在培养48 h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组(P<0.05)。结论:成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。

lncRNA MIR31HG在甲状腺乳头状癌组织中表达及其临床意义

目的观察甲状腺乳头状癌组织中lncRNA MIR31HG的表达特点,探讨其与甲状腺乳头状癌临床病理特征和预后的关系。方法 102例甲状腺乳头状癌患者,均行手术治疗,取手术切除的癌组织及癌旁组织(距肿瘤组织边缘≥5 cm)标本,采用实时荧光定量PCR法检测2种组织lncRNA MIR31HG相对表达量,分析其与患者临床病理特征的关系。根据lncRNA MIR31HG相对表达量均值(5.53)将患者分为高表达组(lncRNA MIR31HG相对表达量≥5.53)53例和低表达组(lncRNA MIR31HG相对表达量<5.53)49例,术后随访3年,采用Kaplan-Meier法分析不同lncRNA MIR31HG表达患者生存率的差异;采用多因素Cox比例风险回归模型分析甲状腺乳头状癌患者预后不良的影响因素。结果甲状腺乳头状癌组织lncRNA MIR31HG相对表达量(5.53±2.19)高于癌旁组织(1.05±0.27)(P<0.05)。低中分化(7.07±0.53)、T_(3)~T_(4b)期(7.11±0.49)、N_(1a)~N_(1b)(7.33±0.38)患者癌组织lncRNA MIR31HG相对表达量均高于高分化、T_(1)~T_(2)期、N_(0)患者(4.92±1.02、4.63±0.65、5.29±0.51)(P<0.05)。高表达组患者无进展生存率(73.58%)、总生存率(83.02%)均低于低表达组(93.88%、97.96%)(P<0.05)。N_(1a)~N_(1b)(HR=1.829,95%CI:1.712~1.989,P<0.001)、lncRNA MIR31HG相对表达量≥5.53(HR=1.677,95%CI:1.585~1.732,P<0.001)是甲状腺乳头状癌患者预后不良的危险因素。结论低中分化、T_(3)~T_(4b)期、N_(1a)~N_(1b)甲状腺乳头状癌患者癌组织lncRNA MIR31HG表达明显升高,lncRNA MIR31HG高表达者预后差,其有可能成为甲状腺乳头状癌预后预测的标志物。