敲减长链非编码RNA MIR4697HG抑制骨髓间充质干细胞成脂向分化

目的:初步探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)MIR4697宿主基因(MIR4697 host gene,MIR4697HG)对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)的成脂向分化调控作用。方法:将BMSCs进行成脂诱导,在不同的时间点(0、1、2、3、5、7、10 d)收集RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测成脂分化调控相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhanced binding proteinα,CEBP/α)、脂联素(adiponectin,ADIPQ)编码基因的mRNA以及lncRNA MIR4697HG的表达水平。为了防止脱靶效应,本研究构建了两条不同序列的MIR4697HG shRNA(shMIR4697HG-1,shMIR4697HG-1)并通过慢病毒感染BMSCs,建立MIR4697HG稳定敲减的BMSCs细胞系。采用油红O染色、蛋白质印迹实验和qRT-PCR等方法检测敲减MIR4697HG对BMSCs成脂分化能力的影响。结果:体外诱导BMSCs成脂向分化时,成脂标志基因PPARγ、CEBP/α和ADIPQ表达量均显著升高,在此过程中lncRNA MIR4697HG表达也明显增加(P<0.01)。慢病毒感染BMSCs 72 h后,荧光显微镜下可以观察到90%以上细胞成功表达绿色荧光蛋白,qRT-PCR结果显示MIR4697HG敲减效率高于60%;BMSCs敲减MIR4697HG后,在BMSCs成脂诱导7 d时,成脂基因PPARγ、CEBP/α和ADIPQ的转录物(mRNA)水平显著下降(P<0.01),同时PPARγ和CEBP/α的蛋白质水平也显著降低(P<0.01)。敲减MIR4697HG的BMSCs成脂向分化能力减弱。结论:lncRNA MIR4697HG对BMSCs成脂向分化有调控作用,敲减MIR4697HG可抑制BMSCs的成脂向分化,提示lncRNA MIR4697HG可能成为治疗骨质疏松症等成脂肪异常疾病的潜在靶点。

骨转移肺鳞癌的血浆长链非编码RNA差异表达分析与MIR4697HG预测价值初步验证

目的鉴定并验证血浆MIR4697HG对肺鳞癌(LUSC)患者骨转移以及预后的预测能力。方法回顾性收集LUSC患者58例,其中无骨转移41例(均无其他部位转移),骨转移17例(单处骨转移5例,多处骨转移12例)。最常见转移部位为肋骨(8例,47.1%),合并其他部位转移13例(76.4%)。采集患者的血浆标本,选择3对骨转移与非骨转移血浆进行lncRNA测序,筛选出MIR4697HG,进一步在58例血浆样本中进行骨转移预测效能验证。结果lncRNA测序并分析后筛选出456个差异lncRNA,其中MIR4697HG的P值最低。qPCR验证结果提示,MIR4697HG具有良好的预测价值。泛癌分析发现,MIR4697HG在多种肿瘤中呈低表达,可能行使广泛的抑癌基因角色。进一步分析发现,MIR4697HG的表达随着LUSC分期的升高逐渐下降,MIR4697HG低表达的肺癌患者,无病生存率和总生存率均较低。结论MIR4697HG是一个普遍抑癌分子,血浆MIR4697HG可作为LUSC骨转移的相关无创标记物,低表达与LUSC患者不良肿瘤学预后有关。

LncRNA MIR4697HG通过靶向miR-193a-3p调控HMGA2表达促进胶质瘤的发生发展

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)MIR4697HG是否通过靶向微小RNA-193a-3p(miR-193a-3p)并调控HMGA2表达影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qPCR)和Western印迹检测正常星形胶质细胞HA、胶质瘤细胞U-251MG中LncRNA MIR4697HG、miR-193a-3p、HMGA2 mRNA和HMGA2蛋白表达。生物信息学预测和双荧光素酶活性检测分析MIR4697HG与miR-193a-3p、miR-193a-3p与HMGA2的靶向关系。在U-251MG细胞中转染si-MIR4697HG或miR-193a-3p,观察其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。共转染si-MIR4697HG与anti-miR-193a-3p,或共转染si-MIR4697HG与pcDNA-HMGA2,观察其在U-251MG细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果与HA细胞比较,胶质瘤细胞U-251MG中LncRNA MIR4697HG、HMGA2 mRNA和HMGA2蛋白表达量明显升高(P<0.05),而miR-193a-3p表达量明显降低(P<0.05)。LncRNA MIR4697HG靶向调控miR-193a-3p表达,miR-193a-3p靶向调控HMGA2表达。低表达LncRNA MIR4697HG明显降低U-251MG细胞中HMGA2、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量、细胞存活率、细胞迁移数量、细胞侵袭数量(P<0.05),提高miR-193a-3p表达量(P<0.05)。高表达miR-193a-3p明显减少HMGA2、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量、细胞存活率、细胞迁移数量和细胞侵袭数量(P<0.05)。敲减miR-193a-3p可部分逆转MIR4697HG低表达对U-251MG细胞增殖、迁移、侵袭、HMGA2、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的制作用。高表达HMGA2可部分逆转MIR4697HG低表达对U-251MG细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论LncRNA MIR4697HG通过靶向miR-193a-3p调控HMGA2表达促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。