MK886和celecoxib对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 探讨通过5-脂氧合酶(LOX)抑制剂MK886及环氧合酶(COX)-2抑制剂celecoxib阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖的影响。方法 CCK-8及EdU法分别检测不同浓度的MK886(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)和celecoxib(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)对体外培养的结肠癌细胞HT-29细胞的增殖抑制情况;采用细胞平板集落形成及细胞迁移能力实验检测经过MK886(25.0μmol/L)处理后的细胞克隆形成及迁移能力。结果 CCK-8结果显示,MK886及celecoxib均对HT-29细胞生长的增殖抑制率呈明显剂量和时间依赖性增加(P<0.05);EdU结果显示,MK886和celecoxib均能明显抑制结肠癌HT-29细胞DNA合成,且呈明显剂量依赖性(P<0.05);MK886对HT-29细胞克隆形成及迁移能力均有明显抑制作用(P<0.05)。结论 阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,但具体机制仍需进一步研究。

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞周期的影响

本研究探讨膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对人急性髓系白血病HL-60细胞周期的作用。采用流式细胞仪分析技术、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度MK886(10、25、50μmol/L)对HL-60细胞周期的作用及对细胞周期调控因子周期蛋白D1、mPGES-1、PGE2、Akt、P-Akt、C-MYC蛋白的影响。结果表明:与正常人外周血单个核细胞比较,G0/G1期HL-60细胞比例减少,S期比例增多。MK886作用24 h后,被阻滞于G0/G1期的细胞增多,同时细胞mPGES-1表达下调,合成PGE2减少,P-Akt、C-MYC、周期蛋白D1蛋白表达下降。结论:MK886对白血病HL-60细胞有细胞周期阻滞作用,其机制可能与抑制mPGES-1表达,减少PGE2的合成,抑制Akt磷酸化及C-MYC表达,下调周期蛋白D1表达有关。

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的:观察膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用。方法:不同浓度的MK886作用于HL-60细胞不同时间后,CCK-8测定其对HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot法检测mPGES-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,ELISA法检测PGE2。结果:HL-60细胞株高表达mPGES-1。MK886可时间、剂量依赖性地抑制HL-60细胞mPGES-1表达和PGE2合成,同时细胞增殖受到抑制,凋亡增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。结论:MK886可抑制HL-60细胞增殖,诱导凋亡,其机制与下调mPGES-1表达、抑制PGE2合成和调控Bcl-2/Bax等有关。

MK886对人结肠癌细胞SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响

目的:观察5-脂氧合酶活化蛋白(5-lipoxygenase activating protein,FLAP)抑制剂MK886对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L MK886作用24、48、72 h对S W480和C a c o-2细胞的抑制率;A n n e x i n V-F I T C/P I双染流式细胞术检测12.5、25、50、100μmol/L MK886作用72 h的结肠癌细胞凋亡率;流式细胞仪检测12.5、25、50μmol/L MK886作用72 h的结肠癌细胞周期.结果:50μmol/L到200μmol/L的MK886对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而12.5μmol/L到25μmol/L浓度的MK886处理24 h后,对SW480细胞无明显作用,延长时间至48、72 h后,作用有统计学意义,且同样存在时效和量效依赖性;6.25μmol/L的MK886对SW480细胞无抑制作用.25μmol/L到200μmol/L的MK886对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而6.25μmol/L到12.5μmol/L浓度的MK886对Caco-2细胞无抑制作用.200μmol/L MK886作用24h即可明显抑制SW480、Caco-2两种结肠癌细胞株的增殖,抑制率接近90%.12.5μmol/L到100μmol/L浓度的MK886对两种结肠癌SW480和Caco-2细胞有凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;12.5μmol/L到50μmol/L浓度的MK886可以增加两种结肠癌SW480和Caco-2细胞G0/G1期比例,降低S期比例.结论:MK886具有显著的抑制人结肠癌SW48-0、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能是通过阻滞细胞于G0/G1期,并诱导肿瘤细胞凋亡所致.

MK886对人结肠癌细胞HT-29增殖及Ascl2表达的影响

目的探讨5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)抑制剂MK886对人结肠癌细胞HT-29增殖的影响及其作用机制。方法分别采用12.5、25、50、75、100、200μmol/L的MK886干预体外培养的HT-29细胞,分别于干预24、48 h时采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,结果显示MK886抑制HT-29细胞增殖最佳作用时间为48 h、最佳浓度为48.12μmol/L。选择48.12μmol/L MK886干预HT-29细胞(MK886组),另设对照组(不干预),干预24 h时采用Real-time PCR技术检测Ascl2 mRNA表达,干预24、48、72 h时分别采用Western blotting法检测Ascl2 mRNA和蛋白表达。结果经过48.12μmol/L MK886干预24 h时HT-29细胞中Ascl2 mRNA相对表达量为0.35±0.02,对照组为0.72±0.02,两组比较P<0.01。48.12μmol/L MK886作用24、48、72 h时HT-29细胞中Ascl2蛋白相对表达量分别为1.75±0.13、1.10±0.15、0.71±0.19,均较对照组降低(P均<0.05);且随着MK886作用时间延长,Ascl2蛋白相对表达量逐渐下调(P均<0.05)。结论 FLAP抑制剂MK886能抑制人结肠癌细胞HT-29增殖,其机制可能与下调Ascl2 mRNA和蛋白表达有关。

5-脂氧合酶激活蛋白抑制剂MK886对人食管癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)抑制剂MK886对人食管癌细胞系(KYSE-150和TE-3)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用2.5、5、10、20、40和80μmol/L的MK886干预体外培养的KYSE-150和TE-3细胞;xCELLigence RTCA系统实时测定细胞增殖抑制率,同时确定半数抑制浓度(IC_(50))。流式细胞测量术检测食管癌细胞的细胞周期。Western blot检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果人食管癌细胞系(KYSE-150和TE-3)的增殖抑制率随着MK886浓度增加而增强(P<0.05),KYSE-150组的IC_(50)浓度为29.11μmol/L,TE-3组的IC_(50)浓度为27.47μmol/L。当MK886浓度增加至25μmol/L时,食管癌细胞G0/G1期滞后增加明显(P<0.001),MK886处理浓度增加到50μmol/L时,食管癌细胞G2/M期增加明显(P<0.001和P<0.05)。MK886处理后食管癌细胞系随着浓度增加,cleaved-caspase-3和LC-3A/B-Ⅱ蛋白表达水平增强(P<0.001)。结论MK886能抑制人食管癌细胞系的增殖,引起凋亡,并影响细胞周期变化。

膜结合型前列腺素E2合酶1抑制剂MK886对白血病HL-60／A细胞周期的影响

目的探讨膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGES-1）抑制剂MK886对人类急性髓系白血病耐药细胞HL．60／A细胞周期的作用。方法采用流式细胞术、Western blot、酶联免疫吸附（ELISA）等方法，检测HL-60／A及健康人单个核细胞（MNC）、敏感细胞株HL．60的细胞周期、mPGES-1蛋白、细胞周期素D1（cvctinD1）的差异，检测不同浓度的MK886对HL-60／A细胞周期的作用及对cyclinD1、mPGES-1、PGE2、P-Akt、c—myc蛋白的影响。结果与健康人MNC及敏感细胞株HL-60比较，HL-60／A细胞cyclinD1、mPGES-1表达最高，G0～G1期细胞比例为（30．53±2．15）％，较正常MNC[（62．63±6．58）％]及HL-60细胞[（38．86±2．25）％]减少（均P〈0．05）；S期比例为（57．56±1．54）％，较正常MNC]（12．18±4．43）％]及HL-60细胞[（47．70±1．88）％]明显增多（均P〈0．05）。MK886作用后，被阻滞于Go～G。期的细胞增多，同时mPGES-1表达下调，合成PGE2减少，cyclinD1、P—Akt、c-myc蛋白表达下降。结论MK886对白血病HL-60／A细胞有细胞周期阻滞作用，其机制与抑制mPGES-1表达，减少PGE2的合成，抑制cyclinD1、P—Akt、c—myc表达有关。

MK886和Celecoxib抑制胰腺癌SW1990细胞生长及血管生成的实验研究

目的观察5-脂氧合酶拮抗剂MK886、环氧化酶2拮抗剂Celecoxib干预SW1990细胞后对细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的影响。方法应用不同浓度的MK886、Celecoxib以及两者联合处理SW1990细胞，采用胆囊收缩素（CCK-8）法检测细胞的增殖，RT—PCR法检测细胞白三烯B4受体1（BLT1）mRNA、前列腺素2（PGE2）mRNA、VEGFmRNA的表达。结果10txmol／LMK886或20mmol／LCelecoxib处理24h后，SW1990细胞的增殖受到明显抑制（1．80±0．06比1．65±0．10；2．04±0．03比1．86±0．02，P〈0．05），且随药物浓度的增加，细胞的增殖抑制更明显。两拮抗剂联合干预12h后，SW1990细胞的增殖即受到非常明显的抑制（1．72±0．05比1．52±0．05，P〈0．01）。Celecoxib处理细胞48h后，细胞BLT1、VEGFmRNA表达与对照组比较无明显变化，但PGE2mRNA的表达明显减少（37．50比71．50，P〈0．05）；MK886或MK886＋Celecoxib联合处理细胞后，细胞BLT1、VEGFmRNA表达明显减少（40．30、22．75比126．50，P〈0．05），而PGE2mRNA的表达与对照组比较无明显变化。结论花生四烯酸的两条代谢途径均与胰腺癌的发生及增殖有密切关系，同时抑制两条途径可显著抑制胰腺癌细胞的增殖。

通过阻断花生四烯酸代谢途径抑制胰腺癌细胞增殖

目的:探讨通过阻断花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢途径抑制胰腺癌细胞增殖.方法:将胰腺癌细胞SW1990分为对照组,M K886干预组、塞莱昔布(C e l e c o x i b)干预组,MK886+Celecoxib干预组,用RT-PCR法检测细胞白三烯B4受体1(leukotriene B4receptor 1,BLT1)mRNA,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达量变化,用Western blot检测磷酸化-Erk(phosphorylated-extracellular regulated protein,p-Erk)表达量变化.结果:MK886作用下,BLT1 mRNA、VEGF mRNA等表达量均减少(P<0.01),p-Erk表达量明显减少(P<0.05),Celecoxib作用下,VEGF mRNA表达量明显减少(P<0.01),BLT1 mRNA表达与对照组无明显差异,p-Erk表达量与MK886组比较明显增加(P<0.01),MK886+80?mol/L Celecoxib作用下,BLT1 mRNA、VEGF mRNA表达量明显减少(P<0.01),p-Erk表达量与对照组无明显差异.结论:花生四烯酸的两条代谢途径均与胰腺癌的发生及增殖均有密切关系,而抑制5-脂氧合酶(5-lipoxygenase)途径较环氧化酶2(cyclooxygenase 2)途径相比,抑制肿瘤细胞增殖作用更强.

阻断花生四烯酸的代谢途径对胰腺癌细胞增殖的影响

目的探讨阻断花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢途径抑制胰腺癌细胞增殖的情况。方法将胰腺癌细胞SW1990分为对照组,MK886干预组、Celecoxib干预组,CCK-8法检测胰腺癌细胞增殖情况。结果 MK886、Celecoxib均可抑制胰腺癌细胞的增殖。结论花生四烯酸与胰腺癌发生有密切关系,通过阻断花生四烯酸代谢可达到抑制胰腺癌细胞增殖的目的。

非诺贝特对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的探讨非诺贝特对大鼠全脑缺血/再灌注损伤(I/R)的保护作用及机制。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压方法建立全脑缺血/再灌注大鼠模型。药物非诺贝特(fenofibrate,FF;33、100、300mg.kg-1)在缺血前30min灌胃给药,PPARα受体拮抗剂MK886(6mg.kg-1)在给予非诺贝特300mg.kg-1前腹腔注射。Morris水迷宫测定大鼠空间学习能力变化,病理切片HE染色观察海马神经元形态结构变化,免疫组化染色检测海马组织核转录因子NF-κBp65蛋白的表达,生化酶学方法观察超氧歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α含量变化。结果非诺贝特能明显缩短全脑缺血/再灌注大鼠的寻台潜伏期,减轻全脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤,降低海马神经元NF-κB p65蛋白表达,明显阻遏缺血/再灌注大鼠海马IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量的升高和IL-10含量及SOD活性的降低;预先给予MK886能取消非诺贝特的作用。结论非诺贝特对缺血/再灌注脑损伤有明显保护作用,其机制与激活PPARα,抑制NF-κB活性,抑制CNS炎症反应和氧化应激有关。