mkk4基因启动子区多态性对结肠癌易感性的影响

目的通过检测结肠癌患者mkk4启动子区单核苷酸多态性位点及其与蛋白表达的关系,探讨mkk4基因多态性与结肠癌易感性的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术(PCR-rflp)分别检测120例结肠癌患者与120例健康对照组的mkk4基因这两处位点多态性,并用免疫组化的方法观察结肠癌组织的mkk4表达量。结果发现在rs3826392(T/G)位点结肠癌组携带G变异基因型(T/G+G/G)频率显著低于健康对照组(P=0.043,OR=0.576,95%CI=0.337～0.985);肿瘤组织中mkk4蛋白表达在G变异基因型中明显增高(P<0.001);rs3809728(A/T)则无统计学意义。结论 mkk4基因rs3826392(T/G)位点G变异与mkk4的表达增加和结肠癌的发病风险降低相关,是结肠癌发病的一个保护因素。而rs3809728(A/T)多态性则与散发性结直肠癌无明显相关。

中国明对虾MKK4基因克隆及其在氨氮胁迫下的表达分析

为初步研究中国明对虾MKK4的生物学功能,采用RACE技术克隆获得中国明对虾MKK4基因全长c DNA序列,并对该序列进行分析。结果显示,中国明对虾MKK4基因全长为2 064 bp,开放阅读框长1 221 bp,5'非编码区长214 bp,3'非翻译区长629 bp。将该基因命名为Fc MKK4。推测该基因编码406个氨基酸,预测分子量为45.94 ku,理论等电点为8.50。同源性和系统进化分析发现Fc MKK4与肩突硬蜱和印度跳蚁的同源性分别为80%和78%,与其他节肢动物MKK4聚为一支。荧光定量RT-PCR结果表明,Fc MKK4基因在肌肉中的相对表达量最高,其次为肝胰腺。氨氮胁迫后该基因在中国明对虾肌肉、肝胰腺、血细胞、鳃、心脏、肠和胃中的表达量均显著增加,并有不同的时空表达谱式,表明Fc MKK4可能参与中国明对虾非生物胁迫的应答反应。

斑节对虾MKK4基因的表达分析

从斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组织cDNA文库中筛选并获得了斑节对虾MKK4基因的cDNA片段,然后采用荧光定量的方法研究了MKK4基因在雌雄个体不同组织、卵巢不同发育阶段及未成熟和成熟精巢的差异表达情况。结果表明,MKK4的mRNA在各组织中都有表达,其中在未成熟精巢中表达量最高,其次分别为雌、雄个体的肠。在精巢不同发育阶段,其在未成熟精巢的表达量极显著高于成熟精巢。对卵巢不同发育期的研究表明,从Ⅱ期开始,随着卵巢的发育,MKK4mRNA的表达量逐渐增加,到第Ⅵ期时表达量达到最高。而在Ⅰ期的表达量虽高于Ⅱ期和Ⅲ期、低于Ⅳ期,但其与其他3期均无显著差异。

MKK4基因的抑癌及致癌作用

丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)基因为新近发现的肿瘤转移抑制基因。其编码蛋白可激活c-Jun氨基端激酶和p38这两条丝裂原活化蛋白激酶通路,将细胞外刺激信号转导至细胞核内,引起细胞的增殖、分化、转化及凋亡。MKK4基因具有抑癌作用,随着MKK4基因启动子区Rs3826392(T/G)位点G变异个数增加,结肠癌、肺癌及鼻咽癌的患病率会随之降低。与之相反,MKK4基因同时具有致癌作用,其表达上调可能与胰腺癌、前列腺癌的发生及浸润转移有关。

MKK4基因在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶激酶4(mitogen-activated protein kinase kinase 4,MKK4)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测42例喉鳞癌、20例喉乳头状瘤及20例声带息肉组织中MKK4 mRNA和蛋白的表达,分析其与喉鳞癌临床病理参数之间的关系。结果:MKK4 mRNA和蛋白表达的阳性率在喉鳞癌、喉乳头状瘤及声带息肉组织中逐渐降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。MKK4 mRNA和蛋白的表达随喉鳞癌的浸润深度增加而上升(P<0.05),在有淋巴结转移组中的表达高于无淋巴结转移组(P<0.05),在临床Ⅲ～Ⅳ期患者中的表达高于临床Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05)。MKK4的表达与患者的年龄、性别、肿瘤发生部位及组织学分级无相关性(P>0.05)。结论:MKK4 mRNA和蛋白在喉鳞癌组织中的表达上调可能与喉鳞癌的发生及浸润转移有关,MKK4可能成为一个潜在的判断喉鳞癌发生与转移的观测指标。

MKK4基因启动子区-1304T/G多态性与散发性鼻咽癌易感性的关系

目的：探讨丝裂原活化蛋白激酶的激酶MKK4基因启动子区-1304T/G多态性与散发性鼻咽癌遗传易感性的关系。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测30例健康人和90例鼻咽癌患者的MKK4基因-1304T/G位点单核苷酸多态性。结果：鼻咽癌患者TG＋GG基因型的频率明显高于对照人群（82.2%vs 66.7%,χ~2=10.076,P〈0.05）,与-1304TT基因型相比,-1304TG杂合子患鼻咽癌的风险降低了0.56倍（95%CI=0.164-1.178,P〈0.01）,-1304GG型降低了0.58倍（95%CI=0.126-1.381,P〈0.01）,变异基因型TG＋GG患鼻咽癌的风险降低了0.72倍（95%CI=0.105-0.753,P〈0.01）。结论：MKK4基因-1304T/G基因多态性与鼻咽癌发病风险有关,-1304G变异能降低鼻咽癌患病风险,是散发性鼻咽癌的独立保护因素。

MKK4基因-1304T>G单核苷酸多态性与结直肠癌的关联研究

目的评价MKK4基因-1304T>G(rs3826392)单核苷酸多态性与结直肠癌发病风险的相关性。方法收集结直肠癌患者218例(试验组)和健康人群206例(对照组)的资料。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RLFP)检测患者-1304T>G位点的等位基因及基因型。结果与T等位基因相比,携带G等位基因的患者结直肠癌发病率显著降低(P<0.05);与TT基因型相比,携带TG、GG、TG+GG基因型的患者结直肠癌发病率更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MKK4基因-1304T>G单核苷酸多态性与结直肠癌的发病风险存在相关性。

MKK4在肿瘤发生发展中的作用

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,在调控细胞凋亡、生长以及一些重要基因的表达中发挥重要作用[1]。现已经确认在哺乳动物中存在4条不同的MAPK通路：

siRNA介导的MKK4表达抑制研究

采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#64447、siRNA ID#64539和siRNA ID#186583)人工合成的MKK4基因特异的小分子干扰RNA(siRNA)分别导入小鼠成肌细胞C2C12中。实时荧光定量PCR结果表明,转染了siRNA ID#64447的细胞,其MKK4 mRNA的表达水平下调得最多,约为85%。试验获得了能够高效下调MKK4基因表达的siRNA。

增生性瘢痕内应激活化蛋白激酶及其上游信号分子基因表达的变化

目的 探讨增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤中应激活化蛋白激酶 (SAPK)及其上游信号分子MAPKs(MKK4和 MKK7)基因表达的变化。 方法 提取 8例增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤组织的总 RNA后 ,分离纯化 m RNA,用 RT- PCR方法检测 SAPK,MKK4和 MKK7基因在不同组织中的表达变化规律。 结果 增生性瘢痕中 ,MKK7和 SAPK基因表达较弱 ,自身对照皮肤组织中 ,这两种基因 PCR结果的灰度比分别为增生性瘢痕的 1.5倍和 2 .6倍 ,基因表达量明显升高 (P<0 .0 1) ,而 MKK4在这两种不同类型组织中的表达量无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 结论 增生性瘢痕中 MKK7和 SAPK基因表达降低引起细胞凋亡减少 ,可能是瘢痕内成纤维细胞大量增殖 ,增生性瘢痕形成的机制之一。

油菜BnMKK4全长基因的克隆及表达分析

从‘陇油6号’油菜中克隆得到了一个新的BnMKK4基因的cDNA,全长1317bp,其中包括993bp的开放阅读框,159bp的5'非翻译区(5'UTR),165bp的3'非翻译区(3'UTR)。与拟南芥AtMKK4有很高的同源性,因此命名为BnMKK4(GenBank登录号为JF268686)。该基因编码330个氨基酸的蛋白质,分子量36.5kDa,等电点为9.01。实时荧光定量PCR结果显示该基因表达受低温胁迫和盐胁迫的诱导,表明该基因在油菜适应低温胁迫和盐胁迫的过程中发挥作用。

MKK4腺病毒载体的构建及其对胰腺癌细胞增生和浸润能力的影响

目的 观察MKK4对胰腺癌细胞增生和浸润能力的影响.方法 采用Western blot检测常见胰腺癌细胞株中MKK4的表达;构建MKK4的腺病毒载体,感染不表达MKK4的胰腺癌细胞株,采用胸腺嘧啶标记法观察外源性MKK4表达对细胞增生能力的影响,采用体外细胞浸润实验观察外源性MKK4表达对细胞浸润能力的影响.结果 在胰腺癌细胞株AsPC1、BxPC3、Hs766T、MiapaCa2、Pancl中,MKK4在AsPC1和BxPC3细胞中表达缺失.成功构建MKK4的腺病毒载体.以腺病毒LacZ感染作对照,通过胸腺嘧啶标记法观察到AsPC1、BxPC3细胞感染MKK4腺病毒后,细胞增生能力增加53%、61%（P＜0.05）;通过体外细胞浸润实验观察到细胞浸润能力增强（8.2±2.7）倍、（15.7±1.6）倍（P＜0.01）.结论 MKK4在胰腺癌细胞中表达可增加其增生和浸润能力,具有潜在癌基因作用.

MKK4与肿瘤关系的研究进展

目的:探讨MKK4基因与肿瘤关系的研究进展。方法:以MKK4和肿瘤为关键词,检索1989-2008年PubMed全文数据库和维普资讯-中国科技期刊数据库。纳入标准:1)MKK4基因结构及生物学特性的研究;2)MKK4与肿瘤发生发展关系的研究。粗选有76篇关于MKK4结构特点及其与肿瘤关系研究文章,根据纳入标准,精选45篇文献,最后纳入分析27篇文献。结果:MKK4是MAPK信号转导通路的组成部分,能磷酸化并激活JNK通路和p38通路,将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,引起细胞的增殖、分化、转化及凋亡等生物学反应。MKK4在肿瘤的形成发展过程中具有重要作用,有研究证实MKK4为肿瘤转移抑制基因或抑癌基因,对肿瘤有抑制作用。然而,也有研究证实MKK4为癌基因,有致肿瘤作用。结论:到目前为止,MKK4与肿瘤关系还存在许多争议,需要我们进一步对其进行认识。