密点麻蜥调控SLC7A11/GPX4通路诱导胃癌MKN45细胞铁死亡的作用及机制

目的:基于SLC7A11/GPX4信号通路探讨密点麻蜥对人胃癌MKN45细胞发生铁死亡的影响。方法:选择SD大鼠制备含药血清,将MKN45细胞随机分为空白对照组(10%空白血清)、5-FU含药血清(10%)阳性对照组、密点麻蜥含药血清低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度组。CCK-8法检测MKN45细胞的存活率;Transwell法检测MKN45细胞的迁移及侵袭能力;激光共聚焦检测细胞内二价铁离子(Fe^(2+))水平;试剂盒检测细胞内LPO水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;qPCR法检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53 mRNA表达的影响;Western Blotting检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,密点麻蜥含药血清中、高浓度组MKN45细胞存活率、迁移及侵袭能力显著降低,Fe^(2+)、ROS水平显著升高,P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低,高浓度组LPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:密点麻蜥可能通过抑制SLC7A11/GPX4信号通路,同时促进细胞内Fe~(2+)、LPO的积累,从而诱导MKN45细胞发生铁死亡,抑制其增殖、迁移及侵袭。

Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞相关信号传导影响的研究

目的:通过研究Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞增生活性的影响,寻求胃癌治疗中相关信号传导途径的新靶点. 方法:Stat3反义寡核苷酸是一种混合骨架寡核苷酸(MBO), 采用脂质体介导的方式将其转染人胃腺癌细胞株MKN45; 通过MTT法观察转染前后对细胞增生状态的影响;凝胶阻滞电泳(EMSA)和Western blot方法观察转染前后Stat3 DNA的结合活性和磷酸化Stat3蛋白表达的变化. 结果:Stat3反义寡核苷酸对MKN45细胞的增生有明显抑制作用;转染反义寡核苷酸后MKN45细胞中Stat3信号的组成性激活水平和磷酸化Stat3蛋白的表达分别下降了50.65%及78.86%. 结论:Stat3反义寡核苷酸能显著抑制MKN45细胞中Stat3 信号的传导,胃癌细胞株中活化的Stat3信号可作为胃癌治疗新的分子靶点.

热疗和顺铂合用诱导人胃癌细胞株MKN_（28）凋谢的研究

采用体外细胞毒试验（ＭＴＴ法），观察热疗与顺铂合用对人胃癌细胞株ＭＫＮ２８的细胞毒作用。结果显示，单独热疗组在４３℃以上作用明显，较低温度热疗联合顺铂有明显协同作用。超微结构的变化表明，其细胞毒作用与诱导细胞凋谢有关。

厄洛替尼联合放疗对MKN45细胞株的影响

目的:观察厄洛替尼联合放疗对人胃癌MKN45细胞周期和凋亡的影响,了解厄洛替尼对放疗增敏的作用机制.方法:通过MTT法和集落形成实验,检测厄洛替尼和放射线对MKN45细胞的生长抑制作用,计算出半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)和放射生物学参数平均致死剂量(mean lethal dose,D0)、准阈剂量(quasi-threshold,Dq)值,得出放射增敏比;流式细胞仪检测MKN45细胞经厄洛替尼及联合放射线处理后细胞的凋亡率及周期分布情况;Westernblot法检测厄洛替尼及联合放射线对MKN45细胞的Bax与Bcl-2蛋白表达的影响.结果:厄洛替尼及放射线均能抑制MKN45细胞的生长,随用药浓度或剂量的增高,抑制作用增强(P<0.01).厄洛替尼与放射线联合对MKN45细胞的抑制作用大于单药和单纯照射(P<0.01);两者联合使S期细胞比率明显降低,放射敏感的G2/M期和G0/G1期细胞比率明显增加(71.87±0.77vs60.72±0.26,P<0.01),细胞凋亡率增加;厄洛替尼联合放射线作用于细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达则明显增加.结论:厄洛替尼通过增加G2/M和G0/G1期细胞比率,降低Bcl-2、升高Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比率,增加细胞凋亡,以此提高MKN45细胞的放射敏感性.

叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28的抑制作用

目的体外实验初步探讨叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28生长的影响。方法通过集落形成试验观察叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28集落形成的影响;将不同浓度叶下珠醇提物作用于MKN28细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定叶下珠醇提物对MKN28细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测叶下珠醇提物作用48 h后MKN28细胞的凋亡情况。结果在2 mg/mL和1 mg/mL 2个浓度下叶下珠醇提物对MKN28胃癌细胞集落形成具有不同程度的抑制作用,浓度大者,抑制作用更强。MTT法测定细胞增殖抑制率结果表明,叶下珠醇提物对MKN28细胞增殖有抑制作用,其抑制效应具有浓度和时间依赖性。流式细胞检测提示叶下珠醇提物能诱导人胃癌细胞MKN28发生凋亡。结论叶下珠醇提物能抑制人胃癌细胞MKN28增殖,凋亡是其作用机制之一。

苯丙素甙对MKN45细胞端粒酶活性的抑制机制

目的:探讨苯丙素甙对肿瘤细胞端粒酶活性的调控作用。 方法:应用端粒酶PCR ELISA法,Sourthern blot杂交及流式细胞技术对苯丙素甙(verbascoside)在体外作用MKN45细胞的端粒酶活性、端粒长度及细胞周期进行检测分析。 结果:苯丙素甙在一定浓度范围内(12.5-27mg·L^(-1))抑制端粒酶活性,但不能直接抑制细胞上清中的端粒酶活性。用端粒酶半抑制浓度剂量作用细胞后,细胞出现端粒长度缩短(约1.1kb)、G1亚二倍体峰(0.25)及G2/M阻滞(0.08)。 结论:苯丙素甙诱导肿瘤细胞分化、凋亡可能是受端粒-端粒酶-细胞周期的依赖性调节,提示端粒酶抑制、端粒缩短及G2/M阻碍滞可作为肿瘤抑制靶向筛选的重要指标。

胃泌素对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白表达的影响研究

目的探讨胃泌素(Gastin)对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45依药物干预进行分组,共分为三组,浓度10^(-6)mol/L的胃泌素组、胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)联合组、不加药物培养液的对照组,均培养24 h、48 h。培养结束后取其上清液,应用酶标仪检测光密度值,连续3次。采用放射免疫法(RIA)检测OPN的表达,应用MTT法测定人胃癌细胞MKN45增殖情况。结果浓度10^(-6)mol/L的胃泌素对人胃癌细胞MKN45的增殖较对照组及联合组有明显的促进作用,差异有显著性(P<0.05);在胃癌细胞株MKN45培养液中测出OPN,随着培养时间的增加,OPN表达也有所增加,胃泌素组较对照组及联合组比较,可明显增加MKN45中的OPN含量,差异有显著性(P<0.05)。结论胃泌素会促进人胃癌细胞MKN45增殖,并促使OPN的表达,提示胃泌素促人胃癌细胞MKN45作用与OPN表达有一定关系;而其受体拮抗剂丙谷胺则可以对这种促进作用产生明显抑制作用。

青蒿琥酯对人胃腺癌MKN45细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用

目的研究青蒿琥酯(ART)对人胃腺癌MKN45细胞株的体外增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的ART作用于体外培养的人胃腺癌MKN45细胞株,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法检测不同浓度的ART作用于MKN45细胞株时凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶9(caspase-9)和半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)等表达情况。结果 MTT实验显示,ART作用48 h后对MKN45细胞增殖有显著抑制作用,抑制作用随着药物浓度的增加而递增(P<0.05),IC50值为13.41μmol.L-1。13.41μmol.L-1ART对MKN45细胞增殖存活有明显的抑制作用,且对细胞抑制作用与药物作用时间和浓度呈正相关(P<0.05)。随着ART浓度的增加,ART对MKN45细胞凋亡率逐渐升高(P<0.05)。ART使MKN45细胞Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、caspase-9及caspase-3蛋白表达明显增高,并随药物浓度的增加,其对凋亡相关蛋白表达的调控作用也明显增强。结论 ART能体外抑制人胃腺癌MKN45细胞株的生长并诱导细胞发生凋亡。

胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白表达的影响

目的研究胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45根据药物干预分为联合组[胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)]、胃泌素组[胃泌素(10^(-6)mol/L)]、对照组(不加药物培养液),培养24、48 h,获得上清液,采用酶标仪检测光密度值,并测定OPN水平和人胃癌细胞MKN45增殖水平。结果胃泌素组人胃癌细胞MKN45增殖OD值均明显高于联合组、对照组(P<0.05);在胃癌MKN45培养中检测出OPN,随着培养时间的延长,OPN表达增加,胃泌素组OPN水平明显高于联合组、对照组,联合组较对照组明显降低(均P<0.05)。结论胃泌素参与人胃癌细胞MKN45增殖过程,促使OPN表达,丙谷胺对此过程具有抑制作用,为胃癌治疗提供科学依据。

视黄酸及干扰素对胃癌细胞系MKN45中p16,p21,c-myc基因表达的影响

目的探讨全反式视黄酸及干扰素两种因子对胃癌MKN45细胞的影响.方法将视黄酸及干扰素同时加入胃癌细胞系MKN45中进行细胞培养,用MTT法测定细胞的生长状况,并通过Northern blot和免疫组化测定p16,p21及c-myc的表达情况.结果干扰素（IFN）协同全反式视黄酸（ATRA）可有效地抑制MKN45细胞生长,癌细胞经联合用药诱导后p16和p21基因的表达水平提高,c-myc基因表达水平下降.视黄酸受体RARα基因在MKN45细胞中呈低水平表达,经ATRA和IFN诱导后表达水平提高.结论 ATRA联合IFN诱导可调节p16和p21基因的表达水平,抑制胃癌MKN45细胞生长,这可能与细胞中RARα基因高水平表达有一定关系.

生长抑素类似物对胃癌细胞株MKN45生长的调控作用

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞株MKN4 5生长的体外调节作用。方法 MTT法和细胞增殖核抗原 (PCNA)免疫细胞化学染色检测细胞增殖情况 ,RIA法测定表皮生长因子 (EGF)、转化生长因子 -α(TGF -α)的含量。结果 奥曲肽对胃癌细胞生长有抑制作用 ,以 1× 10 -6mol/L浓度最明显 ,并能抑制胃癌细胞合成EGF、TGF -α。结论 奥曲肽对胃癌生长具有负性调控作用 。

胃癌细胞MKN28(p53-/-)对NSAIDs诱导凋亡敏感性的研究

目的 1.明确非甾体消炎药 (NSAIDs)能否诱导p5 3基因突变的胃癌细胞MKN2 8凋亡。 2 .明确NSAIDs对MKN2 8细胞凋亡相关基因bcl 2、bax表达的调控。方法 1.通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响。 2 .应用丫啶橙染色、Annexin V/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡。 3.应用RT PCR(逆转录 聚合酶链反应 )方法检测bcl 2、bax基因水平的改变。结果 1.NSAIDs药物吲哚美辛 (Indo)和阿斯匹林 (Asp)对胃癌细胞株MKN2 8均有生长抑制作用 ,且呈时间 /浓度依赖性增强。 2 .在Indo 80 0 μmol/L、Asp8mmol/L作用 4 8～ 96h后 ,MKN2 8细胞凋亡数量稍有增多 ,但不具有统计学意义。 3.随着药物作用时间的延长 ,MKN2 8细胞的bcl 2基因mRNA表达逐渐减弱 ,bax基因表达逐渐增强。结论 1.NSAIDs可抑制MKN2 8胃癌细胞株增殖。 2 .NSAIDs不能诱导p5 3基因突变的MKN2 8胃癌细胞株发生显著的凋亡 ,提示p5 3基因突变可能阻断了NSAIDs诱导的细胞凋亡。 3.NSAIDs可使MKN2 8细胞凋亡相关基因bcl

硫酸右旋糖苷降低人胃癌MKN1细胞的黏附及整合素β_1的表达

目的 :探讨硫酸右旋糖苷 (DS)对人胃癌MKN1细胞株的黏附抑制的机制。方法 :用荧光免疫细胞染色法和共聚焦显微镜观察固定细胞和活细胞在培养盘上的附着过程及形态变化。用Westernblotting法对整合素β 1 蛋白的表达进行分析。结果 :MKN1细胞通过变形 ,形成伪足黏附到培养盘 ,并与其他细胞接触形成单细胞层。免疫染色可见整合素 β 1在细胞膜上有强表达 ,并且形成整合素集落。DS抑制了MKN1细胞的黏附 ,培养48h后仍有部分细胞处于游离状态。DS抑制整合素 β1 的表达并减少已经形成的整合素集落区域。使用DS后 ,黏附细胞整合素β1 蛋白的表达分别减少到非治疗细胞的64 % (130ku)和57 % (110ku) ,游离细胞整合素β 1蛋白的表达分别减少到非治疗细胞的51 % (130ku)和15 % (110ku)。MKN1细胞同时还表现出维持圆形形状的倾向。结论 :DS阻止人胃癌细胞株MKN1的黏附过程与抑制整合素 β1 的表达有关。

脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45抗增殖作用的实验研究

目的:观察脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的抑制增殖的作用。方法:体外培养人胃癌细胞MKN45,观察不同浓度、不同时间的脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的影响,采用MTT法检测脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的抑制作用,并观察细胞形态学改变。结果:共培养24 h后,脑瘤克浓度在0.97 g/kg以上,20%的含药血清对胃癌细胞MKN45有明显的抑制增值的作用。共培养48 h后,脑瘤克浓度在0.97 g/kg以上,10%和20%的含药血清对MKN45的增值有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论:脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45具有抗增殖作用,且随药物浓度的增加和共培养时间的延长,抑制作用增强。

西咪替丁对人胃癌细胞MKN45的生长抑制和促凋亡的研究

目的 探讨西咪替丁对胃癌细胞MKN45生长的抑制和凋亡作用。方法 采用MTT比色法测定不同浓度西咪替丁作用下胃癌细胞MKN45培养液的OD值 ,并用流式细胞仪测定西咪替丁对MKN45的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 西咪替丁作用 72小时 ,抑制胃癌细胞MKN45的生长并呈剂量依赖趋势。胃癌细胞MKN45细胞周期发生改变 ,G1期百分比减少 ,S期百分比增加 ,并出现明显的细胞凋亡峰。结论 西咪替丁可能通过诱导胃癌细胞MKN45凋亡从而抑制其细胞增殖。

EGCG对阿霉素诱导的胃癌细胞MKN28衰老的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对阿霉素诱导的胃癌细胞MKN28衰老的影响.方法:Western blot检测EGCG对EZH2蛋白表达的影响;阿霉素诱导经EGCG处理的MKN28细胞衰老,衰老相关--半乳糖苷酶(senescence associated--galactosidase,SA--gal)染色检测各组细胞衰老情况,激光共聚焦显微镜检测各组细胞核中衰老相关异染色质灶(senescence-associated heterochromatic foci,SAHF)的形成;噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术检测EGCG对MKN28细胞生长和周期的影响,并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化.结果:EGCG可明显抑制EZH2蛋白表达,经EGCG处理的MKN28细胞在阿霉素诱导下SA--gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于阿霉素组和EGCG组,分别为72.16%±4.03%、34.42%±7.06%、15.40%±1.70%和86.44%±4.33%、47.73%±3.03%、80.28%±1.24%;与空白对照组相比,经不同浓度EGCG处理的MKN28细胞其周期G0/G1比例以及生长抑制率会随浓度的增高而增大(P<0.05),在阿霉素的诱导下此趋势更为明显.结论:EGCG可通过抑制EZH2表达来促进阿霉素对MKN28细胞的衰老诱导作用.

奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的 探讨奥曲肽 (Octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用。方法 采用MTT比色分析法分别测定OCT对生长于无血清培养基及含 1 0 %胎牛血清 (FBS)培养基中MKN45细胞的调控作用。结果 OCT 1 0 -2 、1 0 -3 、1 0 -4 g L对培养于无血清培养基中的MKN45的生长均有抑制作用 ,以 1 0 -3 g L浓度的抑制作用最显著 ,为 1 0 .4% ;而OCT 1 0 -2 、1 0 -3 、1 0 -4 、1 0 -5、1 0 -6g L对生长于含 1 0 %FBS培养基中的MKN45均未显示出抑制作用。结论 OCT可抑制无血清培养基中的MKN45的生长。胎牛血清中可能含有可快速降解OCT的肽酶 ,使得OCT未显示出对生长于含 1 0 %FBS培养基中的MKN45的抑制作用。

VEGF基因沉默脂肪间充质干细胞对人MKN45胃癌细胞生长的影响

目的研究脂肪间充质干细胞(ADSCs)血管内皮生长因子(VEGF)基因沉默后对人MKN45胃癌细胞系体内生长的影响。方法采用siRNA技术沉默脂肪间充质干细胞(ADSCs)内VEGF基因。体外成功构建针对VEGF的siRNA表达载体和1个阴性对照,分为VEGF siRNA组、阴性对照组、空白对照组。Lipofectamine2000介导转染ADSCs,RT-PCR检测显示与阴性对照组、空白对照组相比,VEGF siRNA组ADSCs中VEGF表达显著降低,将上述3组处理后的ADSCs与MKN45胃癌细胞混合后接种裸鼠皮下,观察胃癌生长情况;通过CD34免疫组织化学法染色检测胃癌组织血管生成情况。结果阴性对照组和空白对照组的ADSCs在裸鼠体内可显著促进MKN45胃癌细胞的生长(P<0. 05),VEGF siRNA组ADSCs在裸鼠体内对MKN45胃癌细胞的生长无促进作用(P>0. 05);胃癌组织平均血管密度(MVD)结果为,阴性对照组和空白对照组分别为(10. 9±0. 64)个/视野及(10. 7±0. 50)个/视野,VEGF siRNA组为(5. 3±0. 36)个/视野,单纯MKN45组为(5. 1±0. 52)个/视野。VEGF siRNA组明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0. 05),与单纯MKN45组无明显差异(P>0. 05)。结论 ADSCs内VEGF基因沉默后VEGF明显降低,与MKN45胃癌细胞混合后接种对胃癌组织血管形成和胃癌生长无影响。

K-ras诱导Fascinl高表达对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响

目的:探讨K-ras诱导Fascinl高表达对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响。方法:将K-ras质粒(突变型)和阴性对照质粒转染人胃癌细胞系MKN45细胞,运用Western blotting、RT-PCR方法检测Fascinl的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:与对照组比较,实验组MKN45细胞在490nm处的A值转染后48、72h时有明显差异(P<0.05),即实验组细胞生长明显增加。用Western blotting及RT-PCR检测蛋白及mRNA表达,结果显示,与转染前比较,K-ras突变质粒转染MKN45后Fascinl的表达增加,差异有显著性(P<0.05)。结论:K-ras突变诱导Fascinl高表达促进了胃癌细胞的增殖能力。

幽门螺杆菌黏附MKN45细胞模型的建立与应用

目的建立幽门螺杆菌(Hpylori,Hp)体外黏附MKN45细胞模型,为抗黏附药物的筛选和评价奠定基础。方法采用FITC荧光素标记Hp,以FITC-Hp菌液荧光密度为指标,分别评价FITC用量、FITC标记时间等关键因素,优化FITC标记Hp最佳条件;同时用细胞爬片-革兰染色法确定Hp黏附细胞的最佳时间。结果终浓度为5mg·mL-1的FITC和Hp菌液(浓度为1×106cuf.ml-1)共同孵育1h,为FITC标记Hp的最适条件;Hp黏附MKN45细胞的最佳孵育时间为1h。通过该模型测定芦荟粗多糖抗黏附活性,显示芦荟粗多糖有效抑制Hp黏附MKN45细胞的浓度分别为1g.L-1(P<0.05)以及2g.L-1(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论FITC荧光标记检测Hp黏附MKN45细胞模型建立并可用于检测化合物抗Hp黏附活性研究。