苯丙素甙对MKN45细胞端粒酶活性的抑制机制

目的:探讨苯丙素甙对肿瘤细胞端粒酶活性的调控作用。 方法:应用端粒酶PCR ELISA法,Sourthern blot杂交及流式细胞技术对苯丙素甙(verbascoside)在体外作用MKN45细胞的端粒酶活性、端粒长度及细胞周期进行检测分析。 结果:苯丙素甙在一定浓度范围内(12.5-27mg·L^(-1))抑制端粒酶活性,但不能直接抑制细胞上清中的端粒酶活性。用端粒酶半抑制浓度剂量作用细胞后,细胞出现端粒长度缩短(约1.1kb)、G1亚二倍体峰(0.25)及G2/M阻滞(0.08)。 结论:苯丙素甙诱导肿瘤细胞分化、凋亡可能是受端粒-端粒酶-细胞周期的依赖性调节,提示端粒酶抑制、端粒缩短及G2/M阻碍滞可作为肿瘤抑制靶向筛选的重要指标。

人端粒酶逆转录酶下调p53促进胃癌细胞抵抗氧化应激下的死亡

目的:利用慢病毒包装技术构建人端粒酶逆转录酶(h TERT)过表达载体lenti-h TERT,在胃癌细胞MKN45细胞中探讨过表达h TERT对氧化应激下细胞死亡的影响及其相关机制。方法:在低表达h TERT的MKN45胃癌细胞中转染lentih TERT和空载体lenti-NC,嘌呤霉素筛选建立稳定的细胞株,采用Western blot进行鉴定;采用叔丁基过氧化氢(TBH)氧化刺激,倒置显微镜下观察记录细胞死亡情况,台盼蓝染色检测细胞死亡比例,2’7’-二乙酰二氯荧光素检测细胞ROS含量;采用western blot和RT-PCR技术检测细胞在氧化应激条件下p53的表达。结果 :h TERT慢病毒过表达载体系统lenti-h TERT成功转染胃癌细胞株MKN45并建立稳定转染细胞株,过表达h TERT的MKN45胃癌细胞在氧化应激下可抑制细胞死亡,降低细胞内ROS水平;降低了p53蛋白表达水平,而不影响p53 m RNA表达水平。结论:胃癌细胞MKN45中h TERT过表达可通过下调p53蛋白水平抵抗氧化应激下的细胞死亡。

TNFα影响LAK细胞、化疗药物抗胃癌作用的实验研究

本文观察了TNFχ对LAK细胞、化疗药物抗胃癌作用的影响,探讨TNFχ联用IL-2/LAK、化疗药物以提高其单独应用的抗胃癌效应。

人端粒酶反义寡核苷酸抑制三种不同分化程度胃癌细胞生长及作用机制研究

目的 研究特定序列人端粒酶反义寡核苷酸(AS -ODN)抑制三种分化程度不同的胃癌细胞(MKN -4 5、SGC -790 1、MKN -2 8)生长的可能性,并阐述其抑制胃癌细胞生长的作用与胃癌细胞分化程度的相关性。方法 在指定的作用时间和浓度等条件下,以AS -ODN作用于不同分化程度的三种胃癌细胞,用改良端粒酶活性定量检测法测定AS -ODN片段作用前后胃癌细胞的端粒酶活性;用锥虫蓝染色法观察细胞活力;用倒置显微镜、电镜、流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡情况。结果 以指定浓度的AS- ODN作用后,MKN- 4 5和SGC -790 1细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长抑制(P <0 .0 5 ) ,但在同样浓度条件下,MKN -2 8胃癌细胞只出现端粒酶活性抑制。错义序列对照组则无明显变化。以10 μmol/L的AS- ODN连续作用三种胃癌细胞96h后,光镜、电镜和TUNEL法检测均发现MKN- 4 5和SGC- 790 1细胞表现出特有的凋亡征象,流式细胞仪检测证实MKN -4 5和SGC- 790 1细胞的平均凋亡率在4 4 .75 %和33.5 6 % ,错义序列对照组则无明显变化(P <0 .0 5 )。结论 AS ODN能有效抑制胃癌细胞生长,其作用机制主要是抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。AS -ODN对中分化胃癌细胞的生长抑制最显著,对低分化胃癌细胞的抑制作用略强于高分化胃癌细胞,?

VIP对裸鼠MKN45移植瘤的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对裸鼠MKN45移植瘤的影响。方法将18只人胃癌MKN45细胞株的移植瘤裸鼠随机均分为三组,分别每天皮下注射VIP 10μg·100μl-1.只-1(VIP组)、VIP受体拮抗剂[D-p-C1-phe6,Leu17]-VIP(V4380)10μg·100μl-1.只-1(拮抗剂组)和PBS100μl/只(对照组)。每周称量裸鼠体重及移植瘤体积,4周后处死裸鼠,称量移植瘤重量及体积。用免疫组化及RT-PCR检测移植瘤组织中胞外信号调节激酶(ERK)蛋白及mRNA表达的变化。结果给药第28天,VIP组裸鼠体重明显轻于拮抗剂组(P<0.05)。给药的第14、21天,VIP组移植瘤体积明显小于其它两组(P<0.01)。VIP组ERK蛋白的表达显著低于拮抗剂组(P<0.05)。结论 VIP可能通过抑制肿瘤细胞ERK/NF-κB通路对人胃癌细胞MKN45裸鼠移植瘤有潜在抑制作用。

核转录因子-κB组成性激活对胃癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨胃癌细胞株是否存在核转录因子(NF)-κB组成性激活及其对胃癌细胞增殖的影响机制。方法 采用蛋白免疫印迹法(Western blot法)检测4株不同分化程度的胃癌细胞株NF-κB蛋白表达,比较4株胃癌细胞株中NF-κB蛋白质表达水平的差异。通过Trans AM^(TM)NFκBp65试剂盒来比较不同胃癌细胞株中p65亚基的蛋白活性差异。选取活性较高细胞株,观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对NF-κB活性的影响;利用噻唑蓝(MTT)法,分别观察24、48、72h,PDTC对细胞增殖的影响。并采用流式细胞分析技术(FCM)检测细胞的凋亡情况。结果 4株胃癌细胞株胞核中均存在NF-κB蛋白的表达,即存在NF-κB的组成性激活,且存在表达差异。活化的p50亚基在AGS细胞株中表达较低,在MKN28、MKN45、SGC-7901细胞株中表达较高;活化的p65亚基在MKN28、MKN45细胞株中表达较低,在AGS、SGC-7901细胞株中表达较高。经PDTC处理的实验组胃癌细胞,NF-κB的活性均被抑制(P<0.01);同时细胞表现为不同程度的增长抑制(P<0.01),FCM结果显示PDTC可诱导细胞的凋亡。结论 胃癌细胞株中存在NF-κB的组成性激活,并在不同的细胞株中存在表达差异。抑制NF-κB的活性可明显抑制胃癌细胞的增殖,其机制与PDTC所诱导的细胞凋亡有关。

不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物表达与腹膜转移潜能相关的体外研究

目的比较不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达及其活性与腹膜转移潜能的关系。方法采用ELISA和Western印迹方法,比较不同胃癌细胞系uPA表达的差异,并测定其活性。在24孔培养板或Boyden小室中与生长良好的间皮细胞共同培养不同时间,在显微镜下直接计数与间皮细胞黏附的胃癌细胞,而用MTT法评估胃癌细胞在间皮细胞间的迁移和侵袭情况。结果4株胃癌细胞(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)的uPA表达以SGC7901最高,uPA活性以MKN45最高,AGS两者皆最低。MKN45的黏附能力明显强于MKN28(P<0.05)、SGC7901(P<0.05)和AGS(P<0.01),但其迁移和侵袭能力与SGC7901和MKN28相比差异无统计学意义;而AGS在3方面均明显弱于其他3株细胞。结论4株胃癌细胞uPA表达量及其活性差异较大,并且与其腹膜转移潜能呈正相关。