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淡色库蚊抗药性相关基因——NYD-MLC2基因的克隆与分析 被引量:5
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作者 钱瑾 孙静 +4 位作者 孙立新 孙艳 胡小邦 马磊 朱昌亮 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期473-476,共4页
目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(ra... 目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增NYD-MLC2基因3′、5′端,经对位拼接获得全长序列,并进行生物信息学分析;荧光定量PCR验证此基因在抗性和敏感品系的表达差异。结果:获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列,开放阅读框为630bp(GenBank/NCBIDQ140391),编码210个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-MLC2与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)一个未知功能的蛋白同源性最高,为91%;实时荧光定量PCR结果显示,NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因cDNA全长序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗药性相关,值得进一步研究。 展开更多
关键词 淡色库蚊 抗药性 NYD-mlc2基因 RACE 定量PCR
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MLC2-糜酶融合基因在培养乳鼠心肌细胞中的表达 被引量:1
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作者 何泉 陈兰英 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期100-106,共7页
采用不同程度删除启动子序列的糜酶结构基因和肌球蛋白轻链-2基因(MLC2)启动子相拼接,构建了系列融合基因表达克隆。接改进的磷酸钙介导细胞转染法转染分离培养的Wistar乳鼠心肌细胞,提取细胞总RNA。经Dot-blot杂交和光密度扫描分... 采用不同程度删除启动子序列的糜酶结构基因和肌球蛋白轻链-2基因(MLC2)启动子相拼接,构建了系列融合基因表达克隆。接改进的磷酸钙介导细胞转染法转染分离培养的Wistar乳鼠心肌细胞,提取细胞总RNA。经Dot-blot杂交和光密度扫描分析显示,融合基因中的MLC2启动子能有效地调控糜酶基因在心肌细胞中转录表达,糜酶结构基因ATG前含有6bP糜酶自身启动子序列的融合基因M88克隆表达水平最高,随着ATG前糜酶启动子序列的增加,融合基因在心肌细胞中的表达水平逐渐降低。 展开更多
关键词 糜酶 mlc2启动子 心肌细胞 基因重组 基因表达
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急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤、MLCK/p-MLC信号通路活性变化及其与抗菌肽的关系
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作者 马凤雨 曾家月 +1 位作者 文琳 陈霞 《山东医药》 CAS 2023年第2期28-32,共5页
目的观察急性胰腺炎(AP)大鼠肠黏膜屏障损伤情况和MLCK/p-MLC2信号通路活性变化,探讨MLCK/p-MLC2信号通路激活与抗菌肽的关系。方法将24只SD大鼠分为对照组6只和AP组18只,采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液进行AP造模,对照组仅翻动胰... 目的观察急性胰腺炎(AP)大鼠肠黏膜屏障损伤情况和MLCK/p-MLC2信号通路活性变化,探讨MLCK/p-MLC2信号通路激活与抗菌肽的关系。方法将24只SD大鼠分为对照组6只和AP组18只,采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液进行AP造模,对照组仅翻动胰腺后复位。AP组于造模后6、12、24 h各取6只大鼠进行解剖和取材,对照组于造模后6 h取材。采用ELISA法检测血清淀粉酶、脂肪酶水平,HE染色法观察回肠组织病理改变,RT-qPCR法检测回肠组织潘氏细胞分泌的抗菌肽REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA表达水平,Western blotting法检测回肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1及MLCK/p-MLC2信号通路相关蛋白MLCK、p-MLC2蛋白表达水平。结果AP组造模后6、12、24 h血清淀粉酶、脂肪酶水平均高于对照组,其中12 h和24 h血清淀粉酶、脂肪酶水平高于6 h,且24 h高于12 h(P均<0.05)。对照组回肠黏膜完整,绒毛结构规整正常;AP组回肠黏膜出现不同程度的断裂缺失、间质水肿、炎性细胞浸润。AP组造模后6、12、24 h回肠组织病理学评分均高于对照组,且24 h高于6 h和12 h,12 h高于6 h(P均<0.05)。AP组造模后6、12、24 h回肠组织REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA及ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平均低于对照组,且24 h低于6 h和12 h,12 h低于6 h(P均<0.05),造模后6、12、24 h回肠组织MLCK、p-MLC2蛋白表达水平均高于对照组,且12、24 h高于6 h,24 h高于12 h(P均<0.05)。AP组回肠组织MLCK蛋白表达水平与REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA水平呈负相关(r分别为-0.96、-0.95、-0.93,P均<0.05),p-MLC2蛋白表达水平与REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA水平亦呈负相关(r分别为-0.96、-0.94、-0.96,P均<0.05)。结论AP大鼠存在肠黏膜屏障损伤,MLCK/p-MLC2信号通路激活参与了AP肠黏膜屏障损伤的过程,该作用可能与潘氏细胞分泌抗菌肽减少相关。 展开更多
关键词 MLCK/p-mlc2信号通路 抗菌肽 紧密连接蛋白 肠黏膜屏障损伤 急性胰腺炎
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Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ刺激的大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及机制研究 被引量:4
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作者 李莉 郭晶 +4 位作者 袁天翊 陈柏年 方莲花 宫丽丽 杜冠华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1355-1359,共5页
目的探讨Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激的大鼠离体胸主动脉环的舒张作用与机制。方法制备SD大鼠胸主动脉环,测定离体血管张力,观察DL0805对AngⅡ收缩血管作用及量效曲线的影响;Western blot检测大鼠离体... 目的探讨Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激的大鼠离体胸主动脉环的舒张作用与机制。方法制备SD大鼠胸主动脉环,测定离体血管张力,观察DL0805对AngⅡ收缩血管作用及量效曲线的影响;Western blot检测大鼠离体胸主动脉环肌球蛋白轻链(myosin light chain 2,MLC2)蛋白磷酸化水平。结果DL0805对AngⅡ(100 nmol·L-1)收缩的血管环具有浓度依赖性的舒张作用,其舒张血管作用部分依赖于内皮。25、50μmol·L-1的DL0805使AngⅡ量效曲线呈非平行右移,最大反应压低,pD'2为4.65±0.04。DL0805(25、50μmol·L-1)抑制AngⅡ(100 nmol·L-1)引起的MLC2磷酸化水平增加。结论 DL0805呈浓度依赖性地舒张AngⅡ收缩的大鼠离体胸主动脉环,其机制可能与拮抗血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R),抑制AngⅡ引起的MLC2磷酸化水平增加有关。 展开更多
关键词 DL0805 RHO激酶 血管紧张素Ⅱ 大鼠胸主动脉环 mlc2 血管紧张素Ⅱ1型受体
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人肌球蛋白调节性轻链的原核表达及纯化 被引量:1
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作者 陈洋 何泽 +4 位作者 张永臣 万青 赵虎子 赵蕾 沈传陆 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2013年第4期408-412,共5页
目的:构建pGEX-MLC2重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化谷胱甘肽硫转移酶(GST)-MLC2融合蛋白,以用于MLC2抗体的制备。方法:从人乳腺癌MCF-7细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得人MLC2cDNA全长开放读码框架(open reading frame,ORF),并将其重... 目的:构建pGEX-MLC2重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化谷胱甘肽硫转移酶(GST)-MLC2融合蛋白,以用于MLC2抗体的制备。方法:从人乳腺癌MCF-7细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得人MLC2cDNA全长开放读码框架(open reading frame,ORF),并将其重组于原核蛋白表达质粒pGEX-6P-1中,经限制性内切酶和DNA测序鉴定,将该重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-MIC2融合蛋白后,进行Western blotting分析,鉴定GST-MLC2蛋白;通过GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE电泳鉴定该融合蛋白的纯度。结果:人乳腺癌MCF-7细胞MLC2的RT-PCR产物为535 bp,符合预期;重组质粒pGEX-MLC2经BamHI和EcoRI双酶切出现特征性的525 bp片段;DNA测序证实MLC2全长ORF序列正确无误。IPTG诱导表达的GST-MLC2融合蛋白分子质量约为46.6 kDa,纯化后其蛋白纯度约95%,经Western blotting分析表明诱导表达的蛋白是GST-MLC2融合蛋白。结论:人MLC2蛋白原核表达质粒的构建、GST-MLC2融合蛋白的表达和纯化,为MLC2抗体的制备及MLC2功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 mlc2 原核表达 GST融合蛋白 蛋白纯化
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Catharmus tinctorius volatile oil promote the migration of mesenchymal stem cells via ROCK2/Myosin light chain signaling 被引量:1
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作者 LIU Ya-Mei LI Wang-Yang +11 位作者 XU Liang-Liang YU Li-Juan LUO Yi-Wen LI Xi-Can ZHANG Xun-Chao XIONG Yun-Pu CHEN Hong-Tai ZHU Jun-Lang CHEN Chen XIE Yu-Lu CHEN Dong-Feng WANG Bin 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2019年第7期506-516,共11页
MSC transplantation has been explored as a new clinical approach to stem cell-based therapies for bone diseases in regenerative medicine due to their osteogenic capability. However, only a small population of implante... MSC transplantation has been explored as a new clinical approach to stem cell-based therapies for bone diseases in regenerative medicine due to their osteogenic capability. However, only a small population of implanted MSC could successfully reach the injured areas. Therefore, enhancing MSC migration could be a beneficial strategy to improve the therapeutic potential of cell transplantation. Catharmus tinctorius volatile oil(CTVO) was found to facilitate MSC migration. Further exploration of the underlying molecular mechanism participating in the pro-migratory ability may provide a novel strategy to improve MSC transplantation efficacy. This study indicated that CTVO promotes MSC migration through enhancing ROCK2 mRNA and protein expressions. MSC migration induced by CTVO was blunted by ROCK2 inhibitor, which also decreased myosin light chain(MLC) phosphorylation.Meanwhile, the si RNA for ROCK2 inhibited the effect of CTVO on MSC migration ability and attenuated MLC phosphorylation,suggesting that CTVO may promote BMSC migration via the ROCK2/MLC signaling. Taken together, this study indicates that C.tinctorius volatile oil could enhance MSC migration via ROCK2/MLC signaling in vitro. C. tinctorius volatile oil-targeted therapy could be a beneficial strategy to improve the therapeutic potential of cell transplantation for bone diseases in regenerative medicine. 展开更多
关键词 Catharmus tinctorius VOLATILE oil MSC MIGRATION ROCK2/MLC SIGNALING
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