MLN4924对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响

目的 观察选择性神经前体细胞发育相关受控表达分子(NEDD8)活化酶(NAE)抑制剂MLN4924对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法 使用不同浓度MLN4924(0.5、1.0、2.0μmol·L^(-1))加入Hela细胞株处理24 h,以不加MLN49240为对照组。免疫印迹法(WB)检测泛素连接酶蛋白(Cullins-1)、S期激酶相关蛋白(Skp2)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(P-IκBα)及p50的表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平。MTT比色法检测经MLN4924处理的Hela细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 MLN4924对宫颈癌Hela细胞增殖有显著的抑制作用,随着剂量的加大抑制作用更明显,且有剂量依赖性;Hela细胞Cullins-1、Skp2及p50表达下调,P-IκBα上调(P<0.05);各处理组IL-6、TNF-α较对照组降低(P<0.05),S期细胞百分率较对照组升高(P<0.05),大量四倍体细胞形成,细胞生长周期受阻;细胞凋亡率也随MLN4924剂量增大而升高。结论 NAE抑制剂MLN4924对人宫颈癌Hela细胞的增殖有明显抑制作用,诱导Hela细胞周期阻滞和凋亡。

MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1的表达

目的:探究MLN4924对肺腺癌A549细胞中程序性死亡-配体1(PD-L1)表达的影响及其可能的内在机制。方法:体外培养A549细胞,按(0、0.25、0.5、0.75、1、5、10μmol/L)MLN4924分组分别处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,作图并计算各组半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测PD-L1的表达,选择最适时间72 h及其IC_(50)用于后续实验。后续实验按(0、0.469μmol/L)MLN4924分组培养72 h,Western blot法检测FBXW2蛋白、肌段同源盒2(MSX2)蛋白、Y-染色体性别决定基因盒2(SOX2)蛋白、PD-L1蛋白表达,qPCR法测定PD-L1 mRNA表达。结果:MLN4924在24、48、72 h的IC_(50)值分别为(1.976、0.647、0.469)μmol/L;与对照组相比,实验组A549细胞PD-L1表达均上调,呈时间-浓度依赖性。与对照组相比,实验组A549细胞FBXW2、SOX2蛋白表达降低,MSX2蛋白、PD-L1 mRNA及蛋白表达均增加。结论:MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1表达。

基于马尔科夫逻辑网络的实体解析改进算法

实体解析(Entity Resolution,ER)是数据挖掘过程中关键而又费时的一个步骤。华盛顿大学的Domingos和Singla提出了基于马尔科夫逻辑网络(Markov Logic Networks,MLNs)的ER算法。基于此算法,在原有的MLNs体系中,引入了一个可变权重的规则,试图解决原有系统无法处理的实体二义性问题。实验证明,新算法能够有效缓解数据记录的二义性问题,并且在一定程度上提高了原始算法的精度。

新型FMB车用醇基燃料配方体系研究

研究了车用醇基燃料的配方,结果表明:由质量分数为0.72的甲醇、0.25的C5+、0.02的C1～C5和0.01的MLN助溶剂组成的车用醇基燃料。在醇烃比A∶O=1∶9～9∶1范围内,均一、稳定、长期贮存不分层。MLN质量分数为0.01,车用醇基燃料中水的质量分数达0.008时,醇烃发生相分离。随着MLN质量分数的增加,达到相分离点的水质量分数增加,抗相分离能力增强。车用醇基燃料具有优良的耐热、耐寒稳定性。醇基燃料与汽油以任意比互溶,长期不分层。因此该车用醇基燃料可以代替汽油,具有广泛的使用价值。

SCF E3泛素化连接酶的研究进展

Skp1-Cullins-F-box蛋白复合物(SCF复合物)E3泛素化连接酶是最大的泛素化连接酶家族成员,该蛋白复合体可以促进多种蛋白通过泛素化降解,对细胞周期、DNA复制等多种生物过程具有重要的调节作用。SCF E3泛素化连接酶在人类肿瘤中的异常激活可以诱导细胞无限制的增殖和基因组的不稳定,因此,E3泛素化连接酶复合物成员可以作为抗肿瘤治疗的靶点。本文主要介绍SCF E3泛素化连接酶作为抗癌药物的靶点和新型肿瘤抑制剂MLN4924的抗肿瘤作用。

新型蛋白酶体抑制剂MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨新型蛋白酶体抑制剂MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法取对数生长期胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901,按照MLN2238终浓度0、25、50、75、100 nmol/L分为5组,处理24、48、72 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测各孔吸光值并计算存活率以评价MLN2238对胃癌细胞的增殖抑制作用;处理48 h后经膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双标或PI标记后,采用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果相同作用时间(24、48或72 h)下,随着MLN2238浓度的增加,MLN2238处理后BGC-823、SGC-7901细胞的存活率降低(P<0.05);相同MLN2238浓度(25、50、75或100 nmol/L)情况下,除100 nmol/L MLN2238作用24 h和48 h的BGC-823细胞存活率间无统计学差异外(P>0.05),随MLN2238作用时间的延长,MLN2238对BGC-823、SGC-7901细胞的增殖抑制作用也基本呈递增趋势(P<0.05);MLN2238处理BGC-823、SGC-7901细胞48 h后,除75、100 nmol/L MLN2238作用BGC-823细胞各周期细胞比例的差异无统计学意义外(P>0.05),随MLN2238浓度的增加,BGC-823、SGC-7901细胞的凋亡率、G0/G1期细胞比例均升高,S、G2/M期细胞比例降低,且MLN2238的促凋亡效应和促细胞周期G0/G1期阻滞作用呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 MLN2238可抑制胃癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,MLN2238的以上作用与作用时间和作用浓度有关。

Aurora A激酶抑制剂MLN8237对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的观察Aurora A激酶抑制剂MLN8237对体外培养的人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法取乳腺癌MCF7细胞分为两组,观察组分别加入0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L MLN8237,对照组不加MLN8237。用MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测磷酸化Aurora A(p-Aurora A)激酶和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及细胞周期相关蛋白Cyclin B1的表达,AnnexinⅤ-FITC与PI双染法检测细胞凋亡率。结果观察组随MLN8237浓度和培养时间增加,细胞增殖抑制率增加,10μmol/L MLN8237作用48 h的细胞增殖抑制率最高,0.01、0.1、1、10μmol/L MLN8237作用24、48 h的细胞增殖抑制率均高于对照组(P均<0.05)。与对照组比较,观察组随MLN8237浓度增加,G0/G1期、S期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高。观察组各浓度与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。与对照组比较,观察组随MLN8237浓度增加,p-Aurora A激酶、Bcl-2表达降低,Bax表达升高。与对照组比较,观察组随MLN8237浓度增加,细胞凋亡率增加,10μmol/L MLN8237作用24 h的细胞凋亡率最高(P均<0.05)。结论 MLN8237能够抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,并诱导细胞凋亡。

川崎病的临床与进展

川崎病(Kawasnki disease)亦称皮肤粘膜淋巴结综合征(mucocutaneous ymph nodesyndrome,(MLNS),是一种婴幼儿期急性热性发疹性临床综合征。其特点是高热、特征性皮肤粘膜病损。

MLN4924对家蚕BmN细胞增殖及基因表达的影响

以神经前体细胞表达发育下调蛋白8修饰抑制剂MLN4924处理家蚕Bm N细胞,通过MTT法、Annexin V-FITC和数字表达谱研究了MLN4924对家蚕Bm N细胞毒性和基因表达的影响.结果表明:浓度为1～10μmol/L时,MLN4924对家蚕Bm N细胞未发现明显的细胞毒性,也未观察到细胞凋亡,BmN细胞对MLN4924具有较高的耐受性;数字表达谱结果发现MLN4924处理BmN细胞会引起家蚕基因表达的变化,一共发现了136个差异基因,其中76个基因表达上调,60个基因表达下调;生物信息学分析发现差异基因参与了脂肪消化和吸收、溶酶体、类固醇代谢等生物过程.

MLN64基因及在乳腺癌发生发展中作用的研究进展

MLN54基因定位于17号染色体的q12-q21区，编码的MLN64蛋白为一含445个氨基酸残基的跨膜蛋白。MLN64蛋白的C端域与StAR蛋白有高度同源性，N端域可使MLN64蛋白定位于次级内体膜上。MLN64蛋白参与胆固醇的转运和类固醇激素的合成。MLN64与C-erbB-2基因相似，在乳腺癌中过表达，可以影响乳腺癌细胞的生物学特点。研究表明MLN64的高表达可能通过增加肿瘤内的类固醇激素合成促进乳腺癌的生长和进展，也被认为是乳腺癌预后的一个预测因子。

膜型狼疮肾炎治疗方法的研究

目的 :探讨膜型狼疮肾炎并肾病综合征 (NephroticSyndromeNS)的最佳治疗方案。 方法 :分析了 2 7例膜型狼疮肾炎并NS患者的治疗效果。 12例患者单独用糖皮质激素治疗 (A组 ) ,而另外 15例患者用环磷酰胺(CTX)冲击及口服强的松和硫唑嘌呤治疗 (B组 )。结果 :在A组 :4例NS完全缓解 ,2例NS部分缓解 ;在平均 (12 1±5 1)月随访期内 ,11例患者发生一次或多次的NS复发。B组 :11例NS完全缓解 ,另外 4例NS部分缓解 ;随后约 (77± 30 )月随访期内 ,仅 1例患者出现NS复发。至随访期终 ,A、B两组患者均存活 ,但A组有 4例患者出现血肌酐增高1倍 ,1例呈持续性NS ,4例完全缓解 ,2例部分缓解。在B组 :1例患者发生毛细血管外增生性肾小球肾炎而在临床起病 15年后最终进入终末期肾衰竭 ,11例患者完全缓解 ,3例患者部分缓解。结论 :对膜型狼疮肾炎合并NS患者 ,用糖皮质激素联合环磷酰胺及硫唑嘌呤治疗 ,比单用糖皮质激素治疗 ,可更稳固地缓解NS ,更好地长期保护肾功能。

MLN4924对紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究MLN4924对紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响,从而为紫杉醇耐药前列腺癌的临床治疗提供新的理论依据。方法:不同浓度的MLN4924作用紫杉醇耐药的前列腺癌细胞PC3-TxR和DU145-TxR 48和72小时后,采用MTS检测细胞活力。Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、CDT1、p27以及EMT标志物水平。结果:MLN4924能够显著抑制PC3-TxR和DU145-TxR细胞的增殖,并且具有时间和浓度的依懒性。Western blot结果显示MLN4924作用后显著增加细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、CDT1和p27的表达。结论:MLN4924能够显著抑制紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可通过上调p27蛋白表达促进紫杉醇耐药的前列腺癌细胞凋亡。

大鼠Gast和Mln mRNA荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立一种逆转录-实时定量PCR(R T-Q PCR)检测大鼠胃组织中胃泌素(Gast)和胃动素(Mln)m R N A表达的方法。方法:提取大鼠胃组织总RNA,逆转录合成c DNA,利用SYBRGreen荧光染料法实时检测Gast和Mlnm RNA的表达水平。通过溶解曲线分析检测特异性,以管家基因β-actin为内参对Gast和Mln进行定量分析。结果:建立的大鼠Gast和Mlnm RNART-QPCR检测方法具有良好的特异性和敏感性。结论:成功建立RT-QPCR检测Gast和Mlnm RNA基因表达的方法。

MiR-34a-5p在MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老中的作用机制

目的研究小分子AURKA抑制剂MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老的作用机制。方法利用细胞转染的方法改变SK-N-SH细胞中miR-34a-5p的表达水平,通过SA-β-gal染色方法及流式细胞术检测细胞衰老及细胞周期情况。运用CCK8检测不同处理下细胞增殖的变化情况。RT-PCR及蛋白质免疫印迹(Western blot)方法用来检测细胞中相关基因及蛋白的表达情况。结果(1)MLN8237在SK-N-SH细胞中可以通过激活P53/P21通路诱导细胞衰老,同时引起miR-34a-5p表达上调(P值均<0.05)。(2)SA-β-gal染色及流式检测细胞周期显示,过表达miR-34a-5p可以引起SK-N-SH细胞衰老,靶向调控衰老相关靶基因SIRT1的表达,并导致P53、P21蛋白及mRNA表达升高(P值均<0.05),激活P53/P21衰老通路。(3)将miR-34a-5p抑制剂与MLN8237联用后,与单用MLN8237相比可以减少衰老细胞,降低P53、P21的表达(P值均<0.05),并抑制P53/P21衰老通路,且CCK8结果提示,两者联用可以显著减弱MLN8237对SK-N-SH细胞的增殖抑制作用(P值均<0.05)。结论在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中MLN8237是通过激活P53/miR-34a-5p/SIRT1反馈环路来诱导细胞衰老的过程。

NEDD8共价修饰抑制因子MLN4924对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖和凋亡的影响

目的:探讨神经前体细胞发育相关受控表达分子8(NEDD8)共价修饰抑制因子MLN4924对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响,并分析其可能机制。方法:使用不同浓度MLN4924(0、0.125、0.25、0.5μmol/L)处理人卵巢癌细胞株SKOV3 4 h,免疫印迹法检测PAR3、HER2、Neddylated-cullins、P-IκBα的表达水平;同时取细胞培养上清用ELISA检测IL-6的分泌。不同浓度MLN4924处理SKOV3细胞72 h,CCK8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果:MLN4924作用4 h时,能够使Neddylated-cullins下降、P-IκBα积聚,IL-6分泌减少,而PAR3、HER2表达水平变化不显著。MLN4924在0.125、0.25和0.5μmol/L的浓度下处理SKOV3细胞72 h时,对细胞增殖有明显的抑制作用,并且随着剂量的加大,抑制效果也显著提高;同时加药组S期细胞百分率相较于对照组明显升高,且形成大量四倍体,使之没有完整的细胞周期;细胞凋亡率也随MLN4924剂量增大而升高。结论:NEDD8修饰特异性抑制剂MLN4924能够明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。上述效应可能与NF-κB通路活性受到抑制和IL-6表达下降有关。

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

目的:观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。方法:不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。结果:MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。结论:MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。

神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的观察神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平。MLN4924 0.5μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76μmol·L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少（P〈0.01）,表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少。MLN4924 0.5,1.0和2.0μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的（61.3±1.3）%分别升高到（64.5±1.5）%（P〈0.05）,（69.5±2.3）%（P〈0.01）和（72.8±1.7）%（P〈0.01）,细胞凋亡率由正常对照组的（1.5±0.3）%分别升高到（2.3±0.5）%,（4.3±0.9）%（P〈0.05）和（7.5±0.8）%（P〈0.01）。结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡。

极光激酶A抑制剂MLN8237对宫颈鳞状细胞癌细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨极光激酶A(Aurora A,Aurora A)抑制剂MLN8237对人宫颈鳞状细胞癌细胞(HCC94)顺铂(cisplatin)化疗敏感性的影响。方法采用不同浓度MLN8237联合顺铂在不同时间作用于HCC94细胞,用四唑盐(MTT)比色法观察药物对细胞生长的抑制,蛋白质印迹法(Western Blotting)分析胞质内P21wap1、P53、P(S315) P53、Aurora A和P(288) Aurora A蛋白的表达;用流式细胞术检测细胞凋亡。结果MLN8237(10~160μmol/L)或顺铂(10~160μmol/L)均明显抑制HCC94细胞的生长(P<0.05),并引起细胞凋亡;小剂量MLN8237(5、10和20μmol/L)和顺铂(2.5、5、10和20μmol/L)联合应用,与单用顺铂比较,可明显增加细胞增殖抑制率和细胞凋亡率(均P<0.05)。与对照组比较,MLN8237处理组P21wap1和P53表达显著增高,P(S315) P53和P(T288) Aurora A表达显著降低,Aurora A表达不改变。与对照组比较,顺铂组P21wap1/Cip1和P53表达轻微增高,P(S315) P53表达轻微降低,Aurora A和P(T288) Aurora A蛋白表达不改变。与各单药组和对照组比较,联合组对以上各种蛋白的影响作用显著加强。结论小剂量MLN8237可增强宫颈鳞状细胞癌细胞HCC94对顺铂的敏感性,增强化疗疗效。

极光激酶抑制剂MLN8237的合成方法改进

以2-氨基-5-氯苯甲酸为起始原料,用改进方法经十步反应合成了极光激酶抑制剂MLN8237,总产率12.3%,其结构经1H NMR和MS确证。

Motilin基因单核苷酸多态性与奶牛真胃变位易感性的关联分析

以北京地区11个牧场的494头中国荷斯坦牛为试验材料,采用病例-对照(case-control)设计,研究了motilin(MLN)基因第一外显子内转录因子结合位点g.90T>C多态性与奶牛真胃变位易感性的关联。结果共检测到TT、TC、CC三种基因型,基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。将该位点3种基因型与真胃变位易感性进行关联分析,结果发现在一胎牛中关联显著(Cochran-Armitage趋势检验P<0.05;卡方检验P=0.09);与基因型TT相比,基因型TC和CC的比值比(OR值)分别为1.52和2.06,即易感性CC>TC>TT,显示C等位基因更易导致真胃变位。这些结果支持了MLN基因与荷斯坦牛真胃变位可能存在密切的关系。对g.90T>C位点T等位基因的选择,将有利于提高群体对真胃变位的遗传抗性。