MLTC上清对同种肿瘤细胞的杀伤作用

为探讨淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养中淋巴细胞分泌的细胞毒因子，采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入试验，测定淋巴细胞和肿瘤细胞混合培养（ Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ）的上清液对艾氏腹水癌细胞（ Ｅ Ａ Ｃ）的细胞毒作用以及胸腺素对它的影响⒚结果表明：混合培养时间不同的 Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ 上清对不同瘤龄的 Ｅ Ａ Ｃ 均具有明显的杀伤作用（ Ｐ＜ ０．０１）；胸腺素能显著增强 Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ 上清对 Ｅ Ａ Ｃ 的细胞毒效应（ Ｐ＜ ０．０１）⒚说明在 Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ 中，肿瘤细胞能刺激淋巴细胞转化。

氯化汞对小鼠睾丸间质瘤mLTC-1细胞增殖和孕酮合成的影响

目的:探讨氯化汞(HgCl2)对体外培养的小鼠睾丸间质瘤细胞mLTC-1活性及孕酮合成的影响。方法:分别以10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9和10-10mol/LHgCl2对mLTC-1细胞进行染毒,24h后噻唑蓝(MTT)法观察mLTC-1细胞活性;分别以10kU/L人绒毛膜促性腺激素(HCG)混以0、10-8、10-7、10-6和10-5mol/L的HgCl2对mLTC-1细胞刺激2h,放射免疫法测定mLTC-1细胞孕酮的分泌量。结果:HgCl2在10-6～10-10mol/L剂量范围内对mLTC-1细胞活性无影响,10-5mol/LHgCl2刺激细胞增殖,10-4mol/LHgCl2抑制细胞增殖(F=5.268,P<0.001)。随HgCl2剂量由0增至10-6mol/L,mLTC-1细胞孕酮分泌量逐渐下降(F=4.76,P<0.001)。结论:HgCl2可以直接影响mLTC-1细胞活性及其孕酮的分泌。

低氧对原代睾丸间质细胞和细胞系TM3、MLTC-1中核呼吸因子1与睾酮合成的影响

目的:探究低氧条件下,小鼠原代睾丸间质细胞、小鼠睾丸间质细胞系TM3、小鼠睾丸间质瘤细胞系MLTC-1中核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF-1)表达和睾酮合成的变化。方法:低氧处理3种细胞12、24、48 h,采用Western Blot、实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)、细胞免疫荧光检测NRF-1蛋白水平和m RNA水平的变化;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养基中睾酮的含量。结果:(1)Western Blot、real-time PCR、免疫荧光实验证明,与常氧组比较,低氧处理后原代睾丸间质细胞组和MLTC-1细胞组中NRF-1蛋白水平和m RNA水平均显著下降,而TM3细胞中NRF-1 m RNA和蛋白水平显著上升;(2)ELISA实验证明,与常氧组比较,低氧处理后原代睾丸间质细胞组睾酮分泌水平明显下降,而TM3细胞组睾酮分泌水平显著上升。结论:低氧能诱发原代睾丸间质细胞、TM3细胞和MLTC-1细胞中NRF-1和睾酮水平发生明显变化,其中NRF-1变化与睾酮变化呈正相关。

基于互信息解决多标签文本分类中的长尾问题

针对当前解决多标签文本分类中长尾问题的方法多以破坏原本数据分布为代价,在真实数据上的泛化性能下降,无法有效地缓解样本的长尾分布的问题,提出了基于互信息解决长尾问题的多标签文本分类方法(MLTC-LD)。首先,创建关于标签样本的关系矩阵,计算标签样本间的依赖关系;其次,考虑标签样本间关系程度的强弱构造邻居选择器,将拥有强关系的邻居信息作为主要语义特征并作为先验信息;最后,通过图注意力神经网络将先验信息引入分类器,实现了借助分布头部数据丰富类的知识来提高尾部数据贫乏类性能的目标。在三个不同的数据集上将MLTC-LD与八个基线模型进行了广泛的比较分析。实验结果表明,MLTC-LD与最优的HGLRN相比精确度分别提高了3.5%、0.3%、1.5%,证明了该方法的有效性。

L-精氨酸对热处理MLTC-1细胞氧化、凋亡及睾酮合成相关基因表达的影响

试验旨在研究热处理对睾丸间质细胞的影响及L-精氨酸对热处理睾丸间质细胞抗氧化、抗凋亡及睾酮合成相关基因表达的影响。试验选用小鼠睾丸间质瘤细胞系(MLTC-1)细胞,将细胞分为4组,分别为对照组(C)、热处理组(HT)、5μg/mL L-精氨酸+热处理组(5H)和10μg/mL L-精氨酸+热处理组(10H),处理结束后收集培养上清液或细胞备用。结果显示:与C组相比,热处理显著降低MLTC-1细胞GSH-Px活力(P<0.01),当添加10μg/mL L-精氨酸后,GSH-Px活力得到恢复,并显著增加(P<0.01);热处理诱发细胞凋亡,添加L-精氨酸后,细胞凋亡数量明显降低;与HT组相比,添加5μg/mL L-精氨酸显著增加抗凋亡基因PI3K和Bcl-2的基因表达量(P<0.05);与HT组相比,5H组睾酮合成相关基因,StAR和Cyp17a1基因表达量极显著增加(P<0.01),SF-1的基因表达量也显著增加(P<0.05)。以上结果说明:L-精氨酸可缓解热处理诱导的MLTC-1细胞凋亡,增强MLTC-1细胞的抗氧化和抗凋亡能力,并可调控热处理MLTC-1细胞睾酮合成相关基因的表达。

基于层级图标签表示网络的多标签文本分类

多标签文本分类是一项基础而实用的任务,其目的是为文本分配多个可能的标签。近年来,人们提出了许多基于深度学习的标签关联模型,以结合标签的信息来学习文本的语义表示,取得了良好的分类性能。通过改进标签关联的建模和文本语义表示来推进这一研究方向。一方面,构建的层级图标签表示,除了学习每个标签的局部语义外,还进一步研究多个标签共享的全局语义;另一方面,为了捕捉标签和文本内容间的联系并加以利用,使用标签文本注意机制来引导文本特征的学习过程。在三个多标签基准数据集上的实验表明,该模型与其他方法相比具有更好的分类性能。

CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病 (CML)细胞诱导T细胞的TCRVβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况 ,及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞 肿瘤细胞培养 (MLTC)方法 ,利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖 ,用RT PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的 2 4个TCRVβ亚家族基因的互补决定区 (CDR3) ,了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达 8～ 11个TCRVβ亚家族 ,经MLTC后 ,2～ 3个Vβ亚家族呈克隆性增殖 ,CML细胞诱导的自体T细胞的TCRVβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCRVβ优势利用和克隆性增殖 ,诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。

PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导CTL细胞杀伤活性分析

目的了解PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导体外诱导增殖的T细胞的特异性细胞毒作用.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,经丝裂霉素C处理的NB4细胞或PML-RARα多肽(LSSCITQGKAI-ETQSSSSEE)作为刺激原体外诱导脐血单个核细胞增殖.利用LDH方法检测诱导后T细胞的细胞毒性.结果PML-RARα多肽诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:49.65±6.7%(p<0.01)和73.13±8.42%(p<0.01),NB4细胞诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:53.33±8.82%(p<0.01)和74.46±9.57%(p<0.01),而无诱导组的第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:15.93±9.25%和38.19±10.54%,前两组T细胞对NB4细胞的杀伤作用均明显高于对照组.结论PML-RARα多肽和NB4细胞体外可诱导出特异性T细胞,他们对表达PML-RARα的NB4细胞具有选择性杀伤作用.

AML-M2a诱导TCR VβT细胞的克隆性增殖和细胞毒作用

目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况。方 法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细 胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞 的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况。结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人 T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79％和62.14±9.79％,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无 杀伤作用。TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖。结论:AML-M2a细胞可诱导健康人 T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主。

骨肉瘤患者外周血经体外诱导的rIL-2-CL和杀伤细胞的抗瘤活性

目的 研究骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外刺激后经rIL2诱导形成的细胞毒淋巴细胞和杀伤细胞的体外抗瘤活性。 方法 外周血淋巴细胞(PBL)在体外用患者肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞刺激5d再经rIL2诱导12d;单独rIL2激活培养PBL3～5d;分别获取rIL2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞和LAK细胞。 结果 rIL2对两种效应细胞诱导作用基本平行;rIL2CL第12d达到峰值,二周后仍保持相当强度;rIL2CL对人骨肉瘤细胞(OS细胞系)杀伤活性明显强于LAK细胞。 结论 rIL2CL主要是一种特异性较高、杀伤活性强烈CTL细胞群。

氯菊酯经IGF-I信号通路对类固醇激素合成的影响

目的首次探讨氯菊酯影响类固醇激素合成与IGF-I信号通路之间的关系。方法以小鼠睾丸间质瘤细胞株(MLTC-1)为染毒模型,讨论IGF-I信号通路在氯菊酯干扰孕酮合成中的作用。结果随着氯菊酯染毒剂量增加,IGF-ImRNA表达量明显降低;在人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激下,氯菊酯显著抑制孕酮合成,且呈剂量-反应关系;培养液中加入IGF-I下游通路的抑制剂:LY294002(PI3kinase/Akt通路抑制剂),孕酮合成趋势与不加抑制剂一致;U0126(MEK1/2通路抑制剂),可明显抑制孕酮合成的下降趋势。结论氯菊酯干扰类固醇激素的合成可能涉及IGF-I信号通路。

B16与活化B细胞融合瘤细胞主动免疫诱导抗肿瘤作用的初步研究

通过５０％ＰＥＧ诱导细胞融合，ＨＡＴ选择培养得到Ｂ１６黑色素瘤与活化Ｂ淋巴细胞的融合细胞（Ｂ１６．Ｂ）。体外进行混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养，发现Ｂ１６．Ｂ能诱发小鼠脾脏淋巴细胞的增生反应，而Ｂ１６无此作用。体内实验表明：Ｂ１６．Ｂ３次免疫后，能获得对Ｂ１６攻击的抵抗，皮下形成肿瘤时间较Ｂ１６免疫组明显推迟，存活期也延长，但不能获得对无关瘤株的抵抗力。对荷瘤小鼠的治疗实验也显示，Ｂ１６．Ｂ腹腔注射能够明显抑制肿瘤生长，延长动物存活期。

CML相关抗原诱导正常T细胞增殖的TCR Vα基因选用和克隆性研究

目的:了解慢性粒细胞白血病(CML)相关抗原体外诱导T细胞的TCR Vα亚家族限制性表达和克隆性增殖情况。方法:采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用CML细胞、K562细胞和bcr3-abl2多肽体外诱导脐血或正常人的T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点。结果:经CML抗原刺激后增殖的T细胞仅表达部分Vα谱系基因(1-14个亚家族),两例脐血均出现有Vα3亚家族T细胞克隆性增殖趋势;正常人外周血出现寡克隆增殖的Vα5、Vα14亚家族T细胞。结论:CML相关抗原体外诱导脐血和正常人T细胞出现抗原相关的TCR Vα优势利用和克隆性增殖。

骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外相关瘤细胞致敏和rIL-2诱导的杀伤细胞

本实验对骨肉瘤患者外周血淋巴细胞(PBL)采用2种培养方法:(1)PBL在体外用患者肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞(灭活处理)刺激5天再经rIL-2诱导12天;(2)单独rIL-2,激活培养PBL3～5天;分别获取rIL-2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞(rIL-2-CL)和LAK细胞。借助^(51)Cr释放试验对2种效应细胞形成及体外抗瘤能力进行比较性研究。结论:rIL-2-CL主要是一种特异性较高,杀伤活性强烈CTL细胞群,对抗LAK细胞的骨肉瘤细胞具有明显杀伤效应。

应用肺癌细胞系诱生肿瘤特异性T细胞的初步研究

目的探讨通过构建表达人白细胞抗原(HLA)HLA-A2的肺癌细胞系以诱生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法将编码HLA-A2基因的质粒pcDNA3.1D/V5转染人肺腺癌A549细胞,得到能够稳定表达HLA-A2的肺腺癌细胞系。将其用丝裂霉素(MMC)处理后,行混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(mixed lymphocyte tumor cell culture,MLTC)以诱导HLA-A2+的健康人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)产生肿瘤特异性CTL,并通过特异性杀伤实验、单克隆抗体阻断实验、淋巴细胞增殖实验进行检验。结果HLA-A0201基因在A549细胞中的瞬时与稳定表达率分别为0.32、0.91。成功获得稳定表达HLA-A2的A549细胞株。MLTC诱导最终产生4组T淋巴细胞,且符合肿瘤特异性CTL的形态学特征与大量增殖的特点,但CTL杀伤实验和单克隆抗体阻断实验结果示肿瘤细胞未被有效杀伤,可能与肿瘤特异性CTL的数量较少及活性较低有关。结论本研究通过构建表达HLA-A2的肺癌细胞系,对建立肿瘤特异性CTL模型作了初步探讨,为进一步完善肺癌特异性CTL细胞模型并为研究肿瘤免疫逃避、免疫耐受及反杀伤淋巴细胞等生物学行为打下基础。

绞股蓝浸出液的抑瘤作用

定期给荷瘤小鼠注射或灌服一定剂量浓度的绞股蓝浸出液后,小鼠体质增强,胸腺的萎缩速度减慢,每克体重的胸腺和脾脏重均显著高于对照组.胸腺与脾脏每克重细胞数增多.每克体重的瘤重明显降低,瘤细胞数减少,取荷瘤小鼠胸腺淋巴细胞与瘤细胞离体混合培养后,被致敏的淋巴细胞的“粘瘤”和“钻瘤”作用加强,癌细胞发生轻度皱缩,淋巴细胞钻入的癌细胞发生裂解,碎片逐渐增多,而淋巴细胞的形态和数量无变化.实验结果表明:纹股蓝浸出液具有增强荷瘤小鼠免疫力和抑制;肿瘤生长的作用。