七叶皂苷通过抑制TXNIP/MLXIPL信号通路改善脑出血大鼠神经性损伤

目的七叶皂苷具有抗炎、消肿和改善血液循环的作用,但其在脑出血治疗中的作用及其机制尚未阐明。探究七叶皂苷对脑出血大鼠神经性功能的影响及潜在的作用机制。方法选取250~280 g雄性Wistar大鼠,采用胶原酶注射法构建大鼠脑出血(Intracerebral haemorrhage,ICH)模型,将其随机分为假手术组(sham)、ICH组、5或10 mg/kg七叶皂苷治疗组。体外,大鼠小胶质细胞HAPI经血红素(Hemin)处理,分为Control组、Hemin组、5或10μM七叶皂苷处理组。脑组织图评估大鼠脑水肿程度,HE染色观察大鼠脑组织的病理学变化,ELISA测定用来评估大鼠氧化应激水平。RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-128-3p表达量、硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-Interacting Protein,TXNIP)和MLX相互作用蛋白(MLX Interacting Protein-Like,MLXIPL)水平。荧光素报告基因实验验证miR-128-3p和TXNIP的靶定关系。Co-IP验证TXNIP和MLXIPL的相互作用。结果与Sham组大鼠相比,ICH大鼠脑水肿程度增加,HE染色可见神经细胞胞体皱缩且细胞核固缩,血清中炎性因子分泌量和氧化应激产物增加,经七叶皂苷治疗后损伤程度减缓,且10 mg/kg七叶皂苷效果明显优于5 mg/kg七叶皂苷(P<0.05)。TXNIP是miR-128-3p的一个靶基因,且TXNIP可正向调节MLXIPL。ICH大鼠脑组织以及Hemin处理的HAPI细胞中miR-128-3p表达量增加,TXNIP和MLXIPL表达量均降低(P<0.05),且大剂量的七叶皂苷效果优于小剂量七叶皂苷(P<0.05)。结论七叶皂苷通过抑制TXNIP/MLXIPL信号通路,减轻脑水肿,降低氧化应激水平来改善ICH大鼠神经性损伤。

MLXIPL、PMVK、TRIB3基因启动子区甲基化检测方法的建立

目的建立基因MLXIPL、PMVK、TRIB3启动子区DNA甲基化检测的方法。方法用亚硫酸氢钠和对苯二酚处理外周血细胞基因组DNA标本,以修饰后的DNA标本为模板,每个基因分别用内外侧两套不同的引物对启动子区进行巢式扩增。PCR产物进一步克隆、测序。结果测序结果表明,MLXIPL、PMVK、TRIB3启动子区基因中的非甲基化的C碱基转变为T碱基,而CpG岛被甲基化的C碱基则不改变。结论成功地建立了MLXIPL、PMVK、TRIB3基因甲基化检测的方法,为探索基因启动子区甲基化与疾病的关系做出了铺垫。