Fractalkine基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌细胞中的表达

为克隆小鼠趋化因子Fractalkine(FK)基因, 构建真核表达质粒, 并在小鼠肝癌细胞中表达, 用以进行肿瘤的基因治疗, 用RT PCR法, 从小鼠乳腺癌细胞D2F2扩增FK的cDNA, 插入pCR2. 1 TOPO载体, 测序证实后,将其亚克隆至质粒pIRES中构建FK真核表达载体; 用脂质体将重组质粒转染小鼠肝癌MM45T Li细胞, 经G418筛选获得抗性细胞克隆, 用RT PCR和免疫化学方法鉴定转染细胞中 FK基因的表达. 结果表明: 经限制性内切酶酶切图谱分析和 DNA 序列测定证实目的基因已插入重组质粒, RT PCR 和免疫化学方法证明转基因MM45T .Li细胞克隆中存在小鼠FK基因的表达.

HMME介导的光动力疗法诱导鼠肝癌MM45T—Li细胞凋亡的实验研究

目的探讨光动力疗法对鼠肝癌细胞MM45T—Li凋亡的影响。方法以血卟啉单甲醚（HMME）为光敏剂，630nm激光为激发光源的光动力疗法作用于鼠肝癌MM45T-Li细胞。细胞分别与2．5、5、10、20ug/ml的光敏剂孵育4h后，用不同能量密度的激光照射；MTT法检测HMME的暗毒性以及光动力疗法作用24h后的细胞活性；Hoechst细胞核荧光染色法观察HMME介导的光动力疗法对细胞凋亡的影响。结果在不照光的情况下各组浓度的HMME对细胞活性无明显抑制作用。当HMME浓度为10、20ug／ml时，PDT对细胞活性的抑制率随能量密度的增加而增加。Hoechst染色观察PDT作用12h后部分细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变，5．4J／cm2及7．2J／cm2组的凋亡率高于对照组（P〈0．05）。结论HMME介导的光动力疗法可以有效地诱导鼠肝癌MM45T—Li细胞凋亡。