柯乐猪MMP2基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

【目的】探究基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)及其与繁殖性状的相关性,筛选与柯乐猪繁殖性状相关的遗传标记。【方法】试验选择212头健康的经产柯乐母猪,采用直接测序法筛选柯乐猪MMP2基因SNP位点,利用RNAfold在线软件预测MMP2基因不同单倍型mRNA二级结构,并通过SPSS 22.0软件分析MMP2基因SNP位点与柯乐猪繁殖性状的相关性。【结果】在柯乐猪MMP2基因第2外显子中检测到1个SNP位点(g.30062403 C>T),在第4外显子中检测到2个SNPs位点(g.30065309 C>T和g.30065312 C>T),均存在3种基因型(CC、CT和CT)。遗传特性分析结果显示,g.30062403 C>T位点为低度多态,g.30065309 C>T和g.30065312 C>T位点属于中度多态。卡方适合性检验结果显示,g.30062403 C>T位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05),另2个位点均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。连锁不平衡分析结果显示,g.30065309 C>T和g.30065312 C>T位点之间存在强连锁不平衡。单倍型mRNA二级结构分析显示,单倍型H1的mRNA二级结构与原序列相同,其他3种单倍型均导致mRNA二级结构和最小自由能发生变化。关联分析结果显示,g.30062403 C>T位点TT基因型个体的窝产活仔数显著高于CC基因型,断奶窝重显著高于CT基因型(P<0.05);g.30065309 C>T位点CC基因型个体的断奶仔数显著高于TT基因型(P<0.05);g.30065312 C>T位点TT基因型个体的窝产活仔数、断奶仔数均显著高于CT基因型(P<0.05)。双倍型H2H2为窝产仔数、窝产活仔数、断奶仔数、断奶窝重的优势双倍型,H1H4为初生窝重的优势双倍型。【结论】柯乐猪MMP2基因3个SNPs位点与其窝产仔数、窝产活仔数、初生窝重、断奶仔数及断奶窝重均存在显著关联性,可作为分子育种遗传标记。

MMP-1、7、9基因多态性与青海回、汉族胎膜早破相关性

目的利用PCR及测序方法分析青海地区回、汉族胎膜早破孕妇MMP-1、7、9基因多态性特点及是否具有民族差异性。方法提取胎膜早破孕妇和对照组组织DNA,利用PCR和琼脂糖凝胶电泳、测序法,检测基因多态性并行相关分析。结果 MMP-1 rs1799750 G/G、-/G、-/-基因型频率在汉族对照组和胎膜早破组中分别是44.25%、51.33%、4.42%和34.29%、47.14%、18.57%,两组基因型频率分布具有显著差异性(P=0.006);在回族对照组和胎膜早破组中基因型频率分别是45.98%、50.57%、3.45%和51.72%、34.48%、13.79%,两组基因型频率呈现显著差异性(P=0.005)。MMP-7 rs11568818三种基因型A/A、A/G、G/G在汉族对照组和胎膜早破组中基因型频率分别是60.18%、37.17%、2.65%和84.29%、8.57%、7.14%,两组相比,基因型频率分布具有显著差异性(P=0.000);回族对照组和胎膜早破基因型频率分布分别是9.77%、39.08%、1.15%和86.21%、6.90%、6.90%,两组基因型频率相比具有显著差异性(P=0.000)。MMP-9 rs3918242 SNP三种基因型C/C、C/T、T/T在汉族对照组和胎膜早破组中基因型频率分布分别是72.57%、26.55%、0.88%和70.00%、28.57%、1.43%,其基因型频率在两组中无显著性差异(P=0.895);在回族对照组和胎膜早破组中基因型频率分别是71.26%、8.74%、0.00%和70.69%、27.59%、1.72%,两组相比无显著差异性(P=0.468)。结论 MMP-1 rs1799750和MMP-7 rs11568818基因多态性可能与青海汉、回族胎膜早破相关;而MMP-9 rs3918242基因多态性与胎膜早破无关。同时,MMP-1rs1799750、MMP-7 rs11568818和MMP-9 rs3918242基因频率分布在青海汉、回族对照组和胎膜早破组中无特异性。

MMP3基因启动子rs102715950(5A/6A)单核苷酸多态性与河南人群食管鳞癌易感性的关系

为研究MMP3基因5'端转录调控区rs102715950(5A/6A)单核苷酸多态性与河南人群食管癌易感性的关系,通过蛋白酶K法提取基因组DNA,Nested PCR扩增目的基因片段,用Tth111I进行酶切,PAGE电泳检测酶切结果,对河南散发、正常、高发区3种人群进行了MMP3基因SNP rs102715950(5A/6A)基因分型,用SPSS软件作了Logistic回归统计分析.结果表明:在MMP3基因rs102715950(5A/6A)单核苷酸多态性上,河南食管癌散发人群、河南正常人群、湖北的河南移民人群3类人群相互之间并无显著性差异(p>0.01),说明MMP3基因rs102715950(5A/6A)单核苷酸多态性与河南人群的食管鳞癌易感性无显著相关性.

MMPs基因家族在肺腺癌中的表达及临床意义

目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)基因家族在肺腺癌中的表达及临床意义。方法检索Oncomine,GEPIA及cBioPortal数据库中有关肺腺癌MMPs(MMP-1/9/11/12/14)的数据集,对数据集进行挖掘并结合文献资料进行荟萃分析。结果Oncomine数据库收集9项研究,943例样本;GEPIA数据库收集830例样本。综合分析发现,肺腺癌组织中MMPs的表达显著高于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter生存分析表明,MMPs高表达的肺腺癌患者总体病死率高,预后较差,差异有统计学意义(P<0.05)。cBioPortal数据库显示,MMPs在肺腺癌中的突变发生率达39%,且互为正相关。结论MMPs在肺腺癌组织中呈高表达,并与肺腺癌的预后密切相关,有望成为肺腺癌治疗的重要靶点。

成都汉族群体MMPs和TIMPs基因单核苷酸多态性及单体型分析

目的研究MMPs和TIMPs基因单核苷酸多态性(SNPs)在中国成都汉族人群中的分布特点。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测132名中国成都汉族个体MMPs基因6个SNPs(MMP1-1607 1G/2G、MMP2-1306C/T、MMP2-735C/T、MMP3-1612 5A/6A、MMP9-1562C/T、MMP21 572C/T)和TIMPs基因2个SNPs(TIMP2 303C/T、TIMP3-1296C/T)的多态性,并与中国北方汉族及日本、欧洲群体的MMPs和TIMPs基因SNPs等位基因频率的分布进行比较。结果获得了成都汉族人群的MMPs和TIMPs基因8个SNPs的群体遗传学资料。除MMP21 572C/T位点外,其余MMPs和TIMPs的SNPs基因型及等位基因频率及单体型的频率分布与中国北方汉族人群、日本及欧洲等人群之间的比较具有统计学意义(P<0.05)。结论成都地区汉族人群MMPs和TIMPs基因8个SNPs的等位基因频率同其他地区人群的存在较明显的不同。

猪MMP20基因变异筛选及其与母猪繁殖性状的关联分析

试验鉴定获得了猪MMP20基因第3内含子中的2个突变位点g.14334bpC>G和g.14369bpC>T,采用PCR产物直接测序法在大白猪群体中进行基因分型,并对母猪性状进行关联分析,结果发现这两个突变完全连锁,所组成的单倍型显著影响产仔数、产活仔数、21日龄活仔数、出生窝重和出生个体重性状(P<0.05)。GG/CC基因型个体产仔数最低,其次是GC/CT基因型个体,而CC/TT基因型个体产仔数最高。

蛙虹彩病毒一个晚期基因的鉴定

从沼泽绿牛蛙虹彩病毒(Rana gryliovirus,RGV)基因组中克隆了十四烷基化膜蛋白(myristylated membrane protein,MMP)基因的全部编码区,序列分析表明,RGVmmp基因全长972 bp,编码一个长为323 aa,分子量为35×103的蛋白.氨基酸同源性比对分析,与同为蛙病毒属的其他病毒的相应蛋白同源性都在64%以上.构建重组表达载体,进行了原核表达,获得一条约53×103的融合蛋白,并制备出抗血清.通过RT-PCR和Westernblot分析确定了RGV感染过程中mmp基因的表达时序,检测到感染4 h有转录,感染6 h有表达,且持续到感染48 h.用蛋白合成抑制剂放线菌酮(CHX)和DNA复制抑制剂阿糖胞苷(AraC)分别作为蛋白合成和病毒DNA复制的抑制剂进行药物抑制实验,鉴定出mmp是蛙虹彩病毒RGV的一个晚期基因.

Her-2/neu和MMP2在胰腺癌中的表达及其意义

笔者应用免疫组织化学法检测Her 2 /neu和MMP2基因在 3 4例胰腺癌、5例胰腺囊腺瘤、5例胰腺囊肿和 2例正常胰腺组织中的表达水平。结果示胰腺癌中Her 2 /neu和MMP2表达明显高于胰腺正常组织和良性病变 (P <0 .0 5)。Her 2 /neu的表达在有淋巴结转移的胰腺癌中明显低于无淋巴结转移的胰腺癌 (P <0 .0 5) ;随TNM分期增高 ,其表达阳性率显著降低。MMP2表达在肿瘤直径大于 4.5cm及有淋巴结转移的胰腺癌中均明显高于肿瘤直径小于 4.5cm及无淋巴结转移者 (P <0 .0 5) ;随TNM分期增高 ,其表达阳性率也增高。MMP2在预后不良组中表达水平较生存组高 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5)。提示Her 2 /neu和MMP2过度表达可能与胰腺癌的发生发展有关 ;Her 2 /neu可能在胰腺癌发生转移之前发挥作用 ,而MMP2与胰腺癌的侵袭、转移密切相关。检测二者表达水平对指导临床治疗和评估预后可能有较重要价值。

跨界融合子Fhhh降解PTA废水mnp基因转录研究

报道Fhhh的遗传稳定性 ,及其降解精对苯二甲酸 (PTA)废水过程中基因转录的研究结果 .聚合酶链式反应PCR的测定结果是 ,Fhhh同时含有mnp(来自黄孢原毛平革真菌 )、FL0 1(来自酿酒酵母真菌 )和 16SrDNA(来自土著细菌 )的 3个亲株的基因DNA片断 .表明Fhhh具有分子遗传稳定性 .反转录一扩增 (RT_PCR)的测定表明 ,Fhhh和黄孢原毛平革菌在降解PTA废水过程中 ,在Mn2 +、Cu2 +、Zn2 +、Se4 +4种金属元素优化水平的条件下 ,mnp基因均可转录 .研究结果为高效处理PTA废水 。

宁夏回族与汉族人群基质金属蛋白酶9基因单核苷酸多态性的分布特征

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP 9)基因rs2236416、rs3787268和rs3918254位点在宁夏回、汉族以及不同性别间的分布特征。方法采用Taq Man基因分型技术,分析614例(回族304例,汉族310例)宁夏籍学生MMP9基因3个单核苷酸多态性位点基因型,比较不同民族及性别基因频率的分布差异。结果宁夏回、汉族人群MMP 9 rs2236416、rs3787268、rs3918254 3个SNP位点等位基因频率分别为rs2236416(A:86.2%/87.9%,G:13.8%/12.1%);rs3787268(A:33.5%/38.9%,G:66.5%/61.1%);rs3918254(C:64.6%/68.9%,T:35.4%/31.1%),除了rs2236416位点基因型频率在回、汉族女性之间差异有统计学意义(P<0.05),其余SNP位点基因型频率在回、汉族群体以及不同性别间差异均无统计学意义(P>0.05)。rs3787268位点基因型频率分布与欧洲人群不同(P<0.05);rs3918254位点基因型频率分布与欧洲人群和非洲人群之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP9 rs2236416基因型频率在女性群体中有民族间差异,rs3787268、rs3918254多态性位点等位基因频率在宁夏回、汉族以及不同性别之间均无差异;rs3787268、rs3918254位点的基因型频率分布在种族和地区间存在差异。

Semaphorin 5A基因在胃癌侵袭和转移中的作用

目的探讨Semaphorin 5A基因在胃癌侵袭和转移中的作用机制。方法应用RNA干扰技术,构建Sema-phorin 5A-siRNA、Scrambled-siRNA表达载体,并分别转染胃癌细胞株SGC7901,建立Semaphorin 5A稳定表达抑制的胃癌细胞株SGC7901-Sema5A-si和对照组SGC7901-Scram-si胃癌细胞株;采用Western blotting、ELISA和RT-PCR方法,检测MMP2、MMP9在上述2种胃癌细胞株中的表达;应用MMP2、MMP9抗体处理胃癌细胞株,观察其对胃癌细胞株SGC7901-Sema5A-si和Semaphorin 5A侵袭、转移能力的影响。结果 SGC7901-Sema5A-si中MMP9表达水平明显低于SGC7901-Scram-si中的表达水平(P<0.05),MMP2在2种胃癌细胞株中表达水平无明显差异(P>0.05);MMP9抗体能够阻断Semaphorin 5A基因介导的胃癌侵袭和转移,MMP2抗体对Semaphorin 5A基因介导的胃癌侵袭和转移无影响。结论Semaphorin 5A可能通过MMP9表达促进胃癌发生侵袭和转移。

Gga-miR-29b-3p抑制MDV转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达

目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响。方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对gga-miR-29b-3p潜在的靶基因进行功能分析。以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞侵袭相关基因MMP2和MMP9以及MDV原癌基因Meq的表达情况。结果:Gga-miR-29b-3p在感染MDV白来航鸡的肿瘤化脾脏和肝脏淋巴瘤中均显著低表达。信号通路方面miRNA的预测靶基因分别参与FoxO信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路和细胞凋亡等,这些信号通路可参与肿瘤发生进程。转染miRNA激动剂后,MMP2和MMP9基因的表达量在48 h显著下调(P<0.05);Meq基因在48 h表达显著下调(P<0.05)。结论:Gga-miR-29b-3p抑制细胞侵袭和病毒原癌基因的表达,其潜在靶基因能够介导肿瘤发生,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。

β-榄香烯对肝癌细胞SK-hep-1的迁移和侵袭力的影响

目的:观察β-榄香烯对肝癌SK-hep-1细胞的侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其对MMP2基因的调节。方法:将SK-hep-1细胞分为3组:control组、β-榄香烯(80μg/ml)组、TGF-β1(transforminggrowth factorβ1,TGF-β1)(10μg/ml)组,RT-PCR检测各组细胞的MMP2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)mRNA表达;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对β-榄香烯作用的肝癌细胞迁移和侵袭能力进行分析。结果:β-榄香烯作用肝癌细胞中MMP2mRNA表达低于control组和TGF-β1组(P<0.05)。β-榄香烯组穿膜细胞数(50±10)少于control组(150±16)及TGF-β1组(300±13),(P<0.05)。β-榄香烯组细胞的迁移数(92±8)明显低于control组(180±14)及TGF-β组(300±20),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:β-榄香烯能下调肝癌细胞SK-hep-1的MMP2mRNA表达,降低肝癌细胞的侵袭、迁移能力。

妇科 恶性肿瘤

经腹膜外盆腔淋巴间隙给药对妇科肿瘤患者外周血T细胞亚群及NK细胞的影响；外阴癌转移复发分析；卵巢上皮性癌中Claudin-3和MT1-MMP基因的表达及其意义；罗勒多糖对卵巢癌生物学行为的影响及其机制研究；针灸大鼠血清诱导人卵巢癌细胞株SK-OV3细胞凋亡及相关因子的研究。

Mmp2基因克隆及其对肝癌细胞的作用

克隆人基质金属蛋白酶-2基因(Mmp2)编码区并构建重组真核表达载体pEYFP-Mmp2,研究其在肝癌细胞中的作用。以肝癌细胞Hep G2的总RNA为模板,通过RT-PCR获得cDNA,并通过PCR获得Mmp2基因编码区。经TA克隆和测序鉴定将无任何突变的Mmp2基因编码区插入到真核表达载体pEYFPN1中,构建p EYFP-Mmp2重组真核表达载体并进行酶切鉴定和测序鉴定。pEYFP-Mmp2稳定性转染肝癌细胞,经G418筛选获得Mmp2稳转单克隆细胞株,并用Western blotting分析鉴定。用实时无标记细胞增殖分析技术(RTCA)分析Mmp2基因对肝癌细胞生长增殖的作用,细胞划痕愈合实验分析Mmp2基因对肝癌细胞迁移的作用。结果证明成功构建重组真核表达载体pEYFP-Mmp2,Western Blotting证实稳转株中高表达外源融合蛋白MMP2-YFP。细胞增殖和迁移结果表明,Mmp2基因可以抑制肝癌细胞增殖但能够促进肝癌细胞迁移。以上研究表明,Mmp2基因能够促进肝癌细胞迁移。

gga-miR-140-3p抑制马立克病病毒转化细胞MSB1增殖、迁移和侵袭

以马立克病病毒(MDV)感染SPF白来航鸡,收集脾和肝来源的淋巴瘤,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)进行检测,结果显示gga-miR-140-3p在感染MDV的肿瘤化脾和肝淋巴瘤中低表达。为揭示该miRNA在马立克病(MD)肿瘤转化过程中的作用,以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞增殖和迁移,并检测与细胞侵袭密切相关的基因MMP2和MMP9mRNA表达情况。结果显示,与阴性对照组相比,转染gga-miR-140-3p激动剂后,细胞增殖在24、36和48h后发生显著(P<0.05)抑制,在60和72h后发生极显著(P<0.01)抑制。转染激动剂后,细胞迁移数也显著(P<0.05)减少。转染激动剂后,MMP2在转染后24h转录显著下调(P<0.05),转染后48和72h转录极显著(P<0.01)下调,MMP9基因在转染后48h转录显著(P<0.05)下调。gga-miR-140-3p作为在MDV感染组织中异常表达的miRNA,能够影响MD肿瘤淋巴细胞的特征——增殖、迁移和侵袭,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。

N-乙酰半胱氨酸对努比亚山羊PLCB3和MMP2基因表达的影响

为了探究N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAC)对山羊繁殖性能相关基因PLCB3与MMP2的影响机制,试验以努比亚山羊为研究对象,将其分为饲喂组(0.07%NAC)和空白组,采用实时荧光定量PCR法检测饲喂组和空白组子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个器官中PLCB3和MMP2基因表达量的变化。结果表明:空白组和饲喂组PLCB3和MMP2基因在5个器官中均有表达。组内比较,空白组各器官中PLCB3基因的表达量由高到低的顺序为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢,饲喂组中的顺序为垂体>子宫>下丘脑>卵巢>输卵管;组间比较,空白组垂体中PLCB3基因的表达量显著高于饲喂组(P<0.05);总体来看,空白组各器官中PLCB3基因的表达量高于饲喂组。组内比较,空白组各器官中MMP2基因的表达量由高到低的顺序为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢,饲喂组中的顺序为垂体>子宫>下丘脑>卵巢>输卵管,其中垂体和子宫中的表达量极显著高于输卵管、下丘脑和卵巢(P<0.01);组间比较,饲喂组垂体中MMP2基因的表达量极显著高于空白组(P<0.01),子宫中的表达量显著高于空白组(P<0.05);总体来看,饲喂组各器官中MMP2基因的表达量高于空白组。说明在饲粮中添加0.07%的NAC会使PLCB3基因在性腺器官中的表达量降低,MMP2基因在性腺器官中的表达量升高,推测NAC会通过影响性腺轴中PLCB3和MMP2基因表达量来影响努比亚山羊的繁殖性能。

基质金属蛋白酶2在肾细胞癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)在肾细胞癌(RCC)中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及表达丰度定量法检测肾细胞癌组织和正常对照组中MMP2基因mRNA的表达。结果RCC组MMP2基因mRNA表达水平均明显高于正常对照组(P<0.01)。结论RCC组织中MMP2基因mRNA的表达较正常肾组织高,与肿瘤分期、分级相关,可作为判断肾癌预后的指标。

MMP-2和E-钙粘蛋白在胚胎停育患者绒毛中的表达

目的探讨MMP-2和E-钙粘蛋白与胚胎停育的关系。方法选择胚胎停育妇女为实验组,设置同期正常早孕因个人原因要求人工流产妇女为对照组,留取其绒毛组织标本,采用荧光实时定量PCR法对标本Ecad mRNA和MMP-2 mRNA转录水平进行分析。结果 MMP-2 mRNA在实验组中的表达水平显著高于对照组(P<0.05),E-Cad mRNA的表达水平在实验组中的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论 MMP-2和E-钙粘蛋的差异表达可能参与了胚胎停育的发生发展。

牙本质源基质金属蛋白酶与牙体组织胶原变性关系的研究进展

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）是一组锌依赖性蛋白水解酶，可降解几乎所有的细胞外基质蛋白，参与多种生理过程，如组织的形成改建、血管发生、伤口愈合等，以及动脉粥样硬化、关节炎、癌症、溃疡等多种病理过程。迄今为止发现人体内含有24种MMP基因和26种MMP[1]。人牙本质中含有数种MMP，这些MMP多是在牙齿发育过程中由成牙本质细胞、成纤维细胞分泌产生，在牙本质矿化过程中被矿物质包裹，以未激活的酶原形式存在于矿化成熟的牙本质中[2]。