肌抑素对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响

本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系:单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调(P<0.01);细胞外基质中纤连蛋白(FN)和层连接蛋白(LN)含量均极显著增加(P<0.01)。复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光。实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞(P<0.01);Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞。本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致。

正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控作用

目的观察人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对其下游基因MMP-2、MMP-7和MMP-9的影响。方法采用GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,提取胞核蛋白β-catenin,采用Western blotting检测胞核蛋白β-catenin的表达变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达变化。结果 Western blotting结果显示,GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于人滑膜细胞后,β-catenin在胞核蛋白中的表达水平明显升高,并随着GSK-3β选择性抑制剂作用时间的延长,β-catenin的表达逐渐增强,呈时间依赖性,而在其干预的第48小时,胞核蛋白β-catenin的表达变化最明显,是正常组滑膜细胞的5.8696倍,具有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示,与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达分别是正常滑膜细胞的4.6188、3.2443和2.9979倍,具有统计学意义(P<0.05)。结论①SB-216763成功激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;②MMP-2、7、9在人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后其表达显著升高,证明激活Wnt/β-catenin信号通路对MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达有一定的调控作用。③Wnt/β-catenin信号通路在骨性关节炎患者中是激活的,而其对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控可能是导致关节软骨降解,促进骨关节炎形成的作用机制之一。该实验结果有助于从单一通路阐释Wnt/β-catenin信号通路对膝骨关节炎的作用机制。

胆道闭锁幼鼠肝脏组织中LOXL-2与MMP-7、MMP-9、TGF-β1的关系研究

目的研究探索LOXL-2在胆道闭锁(BA)病理发展中的作用,探讨LOXL-2与MMP-7、MMP-9、TGF-β1的关系。方法BALB/c新生幼鼠60只,随机分为对照组(n=30)和模型组(n=30),模型组腹腔注射恒河猴轮状病毒(RRV)建立幼鼠BA模型。分别于造模后7 d、15 d、28 d处死各组小鼠,以qPCR荧光定量检测肝脏组织中LOXL-2、MMP-7、MMP-9及TGF-β1的mRNA水平,ELISA检测LOXL-2、MMP-7、MMP-9及TGF-β1肝脏组织中蛋白表达水平。结果造模后15 d、28 d,模型组肝脏LOXL-2 mRNA、LOXL-2表达均高于对照组(P<0.05);模型组肝脏MMP-7 mRNA、MMP-7表达均高于对照组,到28 d时达到最高,差异均有统计学意义(P<0.05)。造模后15 d,模型组肝脏MMP-9 mRNA、TGF-β1 mRNA、MMP-9、TGF-β1表达高于对照组(P<0.05);造模后28 d,模型组肝脏MMP-9 mRNA、MMP-9表达与对照组无统计学差异(P>0.05),而TGF-β1 mRNA、TGF-β1表达持续升高且差异均有统计学意义(P<0.05)。LOXL-2的表达与TGF-β1、MMP-7的表达呈正相关(r=0.707,P<0.001;r=0.556,P=0.001),与MMP-9的表达无相关性(r=-0.022,P=0.907)。结论LOXL-2参与了胆道闭锁肝纤维化的病理过程,可能与TGF-β1、MMP-7协同促使肝纤维化。

SAHA对裸鼠人乳腺癌细胞MCF-7移植瘤的影响

目的:研究辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)是否可以调节RECK蛋白使MMP-2、MMP-9在动物体内表达发生改变,从而达到抑制乳腺癌细胞生长、增殖和转移,改善预后的作用,提供乳腺癌临床治疗新思路。方法:乳腺癌细胞MCF-7培养后,被移植到裸鼠皮下,制成动物模型。将裸鼠成瘤模型分为对照组(生理盐水0.4 mL/kg)和实验组(SAHA 0.42 mg/kg),成瘤模型建立后,ELISA方法检测裸鼠体内IL-6的含量。断颈法处死裸鼠,取肿瘤组织称重并计算脏器指数。取肿瘤组织做HE病理性染色。IHC、WB检测MMP-2、MMP-9、RECK在肿瘤组织中的表达。结果:与对照组相比,实验组IL-6含量、肿瘤重量及脏器指数降低(P<0.01)。肿瘤组织HE染色显示,实验组以中重度坏死为主,对照组中以轻中度坏死为主。IHC检测显示,与对照组相比,实验组RECK阳性表达较高,MMP-2、MMP-9阳性表达较低(P<0.05)。WB检测显示,与对照组相比,实验组RECK表达较高,MMP-2、MMP-9表达较低(P<0.01)。结论:SAHA可在动物体内通过提高RECK蛋白的表达来降低MMP-2、MMP-9的表达,从而抑制了人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭和转移。

基质金属蛋白酶-2、-7、-9在人脑星形细胞瘤中的表达及临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)在人脑星形细胞瘤侵袭、转移中的作用。方法 用免疫组织化学方法(S-P法)检测了45例人脑星形细胞瘤组织中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达情况。结果 Ⅲ、Ⅳ级中MMP-2、MMP-9蛋白表达要明显高于Ⅰ、Ⅱ级,而MMP-7在部分Ⅳ级星形细胞瘤中过度表达,而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中无表达。结论MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白的表达与星形细胞瘤的恶性程度有关,其高表达可能与星形细胞瘤的侵袭、转移等恶性生物学行为有关,并有可能成为星形细胞瘤恶性程度、侵袭能力的判断指标。

基质金属蛋白酶在人脑星形细胞瘤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinase,MMP)在人脑星形细胞瘤侵袭、转移中的作用。方法 用免疫组织化学方法 (S -P法 )检测 4 5例人脑星形细胞瘤组织中MMP - 2、MMP - 7、MMP - 9的表达情况。结果Ⅲ、Ⅳ级中MMP - 2、MMP - 9蛋白表达明显高于Ⅰ、Ⅱ级 ;而MMP - 7在部分Ⅳ级星形细胞瘤中过度表达 ,而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中无表达。结论 MMP - 2、MMP - 7、MMP - 9蛋白的表达与星形细胞瘤的恶性程度有关 ,其高表达可能与星形细胞瘤的侵袭、转移等恶性生物学行为有关 ,并有可能成为星形细胞瘤恶性程度。