应用siRNA敲低MMP-9基因表达后对人U251胶质瘤细胞增殖和侵袭的作用

目的研究siRNA靶向抑制MMP-9基因对U251细胞的增殖和侵袭的抑制作用。方法采用oligofectamine转染试剂将siRNA导入到胶质瘤细胞U251,分别采用半定量PCR及Western blotting从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用细胞生长曲线、MTT和流式细胞法检测siRNA对细胞增殖的影响,应用2D、3D生长实验(Two,three-dimensional growth experiment)和Transwell实验检测转染MMP-9 siRNA后对细胞侵袭的影响。结果半定量PCR以及Western blotting显示MMP-9基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到抑制;细胞生长曲线、MTT检测及流式细胞仪检测结果显示MMP-9基因表达被抑制后,U251细胞增殖率明显受到抑制,2D、3D生长实验和Transwell侵袭实验证实转染后U251细胞体外侵袭能力明显降低(P<0·01)。结论应用siRNA敲低胶质瘤细胞MMP9基因表达后,胶质瘤细胞的侵袭和增殖能力明显下降。

宁夏回族MMP-9基因多态性-1562C/T和腰椎间盘突出症的关系研究

目的探讨宁夏回族MMP-9基因多态性-1562C/T和腰椎间盘突出症的相关性。方法采用病例-对照研究的方法,对来自宁夏回族的128例LDH患者和132例匹配的正常对照采集血样,用PCR-RFLP方法对MMP-9基因多态性-1562C/T多态性进行了检测。结果携带CT/TT基因型的个体患LDH的风险是携带CC基因型的个体1.61倍(95%C I:0.89-2.89),但其差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-9基因多态性-1562C/T可能与宁夏回族人群的LDH不相关。

MMP-2和MMP-9基因在牦牛肌肉组织的表达分析

采用RT-PCR和DNA重组技术克隆牦牛基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9基因CDS区,检测0.5岁、1.5岁和2.5岁牦牛臀大肌和心脏组织中表达水平,作生物信息学分析。结果表明,①牦牛MMP-2和MMP-9基因CDS区长度分别为1983 bp和2137 bp,二者编码的蛋白质均为酸性亲水蛋白,无跨膜结构、含有多个磷酸化位点和糖基化位点;MMP-2与MMP-9主要分布区域不同;MMP-2为非典型分泌蛋白;MMP-2和MMP-9蛋白二级结构均以无规则卷曲为主;②牦牛MMP-2和MMP-9蛋白中甘氨酸、天冬氨酸和亮氨酸含量较高,此为牦牛肉质鲜美原因之一;③牦牛MMP-2和MMP-9基因序列与其他物种比对后,发现牦牛与黄牛亲缘关系最近,显示这两个基因可用于动物系统进化研究;④牦牛MMP-2和MMP-9基因在牦牛臀大肌和心脏组织中表达水平与年龄增长呈正相关。臀大肌组织免疫组化结果显示,MMP-2和MMP-9蛋白表达趋势与基因表达趋势相似,表明明胶类酶MMPs可能是肉质随年龄增大而改变的原因之一。

子宫颈癌细胞中HOXA10、NF-κB对MMP-9基因的调控作用

基质金属蛋白酶（MMP）9是一种锌依赖性蛋白水解酶，其降解细胞外基质、破坏基底膜的功能是肿瘤侵袭、转移及血管形成的基本条件。有研究显示，MMP-9在多种肿瘤组织中呈过度表达且与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关[1]。也有研究报道，MMP-9可通过诱导肿瘤细胞上皮间质转化，使细胞获得迁移或侵袭力增强的功能性改变[2]。因而作为肿瘤侵袭和转移的关键因子，MMP-9也就成为肿瘤领域研究的热点，虽然已有部分研究证实了MMP-9与一些细胞因子之间的关系，但以MMP-9为中心的整个调控网络至今尚未明确。研究显示，同源框基因（HOX）A10与核因子κB （NF-κB）是两种与肿瘤发生、发展密切相关的转录因子，影响或参与肿瘤的侵袭与转移[3]，但HOXA10、NF-κB对MMP-9基因是否具有调控作用，尚无详细论述。本研究选择子宫颈癌HeLa细胞，对这一调控作用进行研究。

山羊MMP-9基因cDNA的克隆及生物信息学分析

为了克隆山羊基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因的cDNA片段,分析其基因序列,试验于无菌条件下采集泌乳期奶山羊乳腺组织并提取总RNA。根据已知其他物种的MMP-9基因保守性区域设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增MMP-9基因的CDS区,测序后对核苷酸和推导的氨基酸序列进行分析,并对8个物种进行聚类分析。结果表明:得到长度为2 245 bp的MMP-9基因cD-NA片段(GenBank登录号为JQ670877),其中包含2 130 bp的CDS全长;核酸序列分析结果显示,该基因编码709个氨基酸,与人、小鼠和牛的核苷酸序列进行比对,相似性分别为84%、80%、96%,氨基酸相似性分别为79%、73%、94%。

MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3.1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamH和Hind)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致。结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。

基质金属蛋白酶-9在原发性肝癌中的表达及意义

目的探讨原发性肝癌中MMP-9达,探讨其与原发性肝癌侵袭转移的关系。方法采用免疫组化方法,对30例原发性肝癌手术切除肿瘤组织、癌旁组织标本的MMP-9进行检测,并结合随访资料进行分析。结果肝癌组织和癌旁1cm、5cm组织中分别有73%、46.7%、36.7%MMP-9表达阳性,癌组织MMP-9表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),癌旁1cm与癌旁5cm组织组织比较,MMP-9表达水平无显著性差异。结论MMP-9基因的过度表达与肝癌侵袭转移密切相关,可作为判断其复发及预后的指标之一。

MMP-9和eNOS基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性

妊娠期高血压疾病(HDCP)是妊娠期特有的严重危害母儿安危的疾病,其病因和发病机制尚不完全清楚,主要有以下几种学说:免疫学说、遗传学说、神经内分泌学说、血管内皮损伤学说、钙平衡失调学说、凝血与纤溶平衡失调学说等[1]。而各种学说之间并不是相互孤立的.

缺血性中风病患者体质、证候与MMP-9,IL-6,MTHFR基因多态性的相关性研究

通过研究缺血性中风病患者证候、体质与MMP-9,IL-6,MTHFR基因多态性之间相互关系,对缺血性中风病患者从体质、证候与MMP-9,IL-6,MTHFR基因多态性关系进行分析。采集缺血性中风病患者的相关资料,建立数据库,进行统计分析。结果纳入的61例缺血性中风病患者中风痰瘀阻证患者出现频率最高,共30例;痰湿质是缺血性中风病患者易发体质,共20例;体质与证候对应关系分析显示:气虚体质患者发病后倾向表现为气虚血瘀证;痰湿体质和平和体质患者发病后倾向表现为风痰瘀阻证;证候与MMP-9,IL-6关系:风痰瘀阻证、气虚血瘀证患者MMP-9,IL-6分布经Z检验有显著统计学差异(P<0.05),气虚血瘀证患者MMP-9水平明显高于风痰瘀阻证患者;风痰瘀阻证患者IL-6水平明显高于气虚血瘀证患者;证候、体质与MTHFR基因多态性关系:61个样本中,共检测到杂合突变34例;纯和突变15例;无突变12例,该基因位点突变率是未突变患者的4.08倍;痰湿质患者发病后其MTHFR C677T基因型倾向于表现为CT基因型;风痰瘀阻证患者发病后易表现为TT基因型;阴虚动风证患者发病后易发生杂和突变,表现为CT基因型。从缺血性中风病患者证候与体质关系分析显示,痰湿质、平和质患者发病后易表现为风痰瘀阻证;气虚质患者发病后易表现为气虚血瘀证。提示发病前如对于偏颇体质进行调理,或许对预防缺血性中风病有一定效果;从缺血性中风病患者证候与MMP-9,IL-6关系分析显示,风痰瘀阻证与IL-6水平具有相关性,气虚血瘀证与MMP-9水平具有相关性。从缺血性中风病患者证候与MTHFR基因多态性关系分析显示,TT基因型患者发病后易表现为风痰瘀阻证,CT基因型患者发病后易表现为阴虚动风证;从缺血性中风病患者体质与MTHFR基因多态性关系分析显示,CT基因型患者易表现为痰湿质。为更深入地认识缺血性中风病病机提供依据,为临床治疗与预防提供干预策略。

基质金属蛋白酶-9及血小板膜糖蛋白Ⅵ基因多态性与急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的探讨金属蛋白酶(MMP-9)血浆水平、基因多态性与血小板膜糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)基因多态性在急性冠状动脉综合征(ACS)发病中的作用及其相关性。方法对179例经冠状动脉造影及临床表现证实为ACS的患者与164例经冠状动脉造影证实无冠状动脉病变的对照者进行研究,采用ELISA法测定血浆MMP-9水平;Clauss法测定纤维蛋白原(Fib)水平;采用多聚酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性(PCR-RFLP)分析MMP-9基因中C-1562T、G5564A和GPⅥT13254C、FibBβ链-148C/T基因多态性。结果ACS组血浆MMP-9和Fib水平明显高于对照组,P<0·001;急性心肌梗死组的血浆Fib水平高于不稳定性心绞痛组,P<0·05。ACS组与对照组比较,MMP-9/C-1562T、MMP-9/G5564A和GPⅥT13254C、FibBβ链-148C/T基因型与等位基因频率分布差异无统计学意义。当FibBβ链出现T等位基因时,血浆Fib水平明显升高,P<0·05。显示MMP-9及Fib与ACS发病呈明显正相关(r=0·289,P<0·01)。结论MMP-9及Fib是ACS发病的独立危险因素,FibBβ链T等位基因与血浆Fib水平升高有关,MMP-9C-1562T、G5564A和GPⅥT13254C、FibBβ链-148C/T等位基因频率分布在ACS组对照组之间差异无统计学意义。

苯那普利防治肾小球硬化的实验研究

用 5 /6肾切除法造模大鼠肾小球硬化并给予苯那普利治疗 2 0周 ,观察苯那普利对大鼠残肾组织Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶 9(MMP 9) /组织金属蛋白酶抑制物 1(TIMP 1)基因表达的影响 ,旨在揭示其减轻肾小球硬化的机制。结果苯那普利能显著减轻大鼠肾组织的病理改变程度 ,并且显著减少残肾组织中Ⅳ型胶原、MMP 9的沉积以及下调Ⅳ型胶原、MMP 9/TIMP 1的基因表达。苯那普利可能通过调节MMP 9/TIMP 1的基因表达 ,减轻肾小球重塑过程中细胞外基质的异常代谢和聚积 。

胸水细胞FAK和MMP-9表达在良恶性胸腔积液鉴别中的意义

目的：探讨胸水细胞黏着斑激酶（focaladhesionkinaseFAK）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）检测对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：用荧光实时定量RT—PCR和免疫组化方法检测39例恶性、31例良性胸水细胞FAK和MMP-9基因mRNA和蛋白表达，并与胸水细胞学诊断结果进行比较。结果：恶性胸水组FAK和MMP-9mRNA表达水平较良性胸水组和对照明显增加，较良性胸水组分别增加71．9％（P〈0．01）和67．8％（P〈0．01）。免疫组化检测结果显示39例恶性胸水组中FAK基因表达阳性30例（76．9％），MMP-9基因表达阳性33例（84．6％），而31良性胸水组FAK基因表达阳性8例（25．8％），MMP-9基因表达阳性5例（16．1％）（P〈0．01）。结论：胸水细胞MMP-9和FAK基因检测可作为细胞学检查的辅助手段，提高恶性胸腔积液的诊断率。

基质金属蛋白酶-9与肝细胞肝癌侵袭转移的关系

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。近年来的研究表明，基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在肿瘤的发生、侵袭和转移过程中发挥着重要的作用，目前的研究发现，MMP-9的1562位存在着C到T的突变，而且这种突变可能影响到MMP-9基因的表达水平。因此，本实验通过检测MMP-9基因的多态性，初步探讨其与HCC生物学行为的关系。