银杏内酯B通过MMP9/STAT3信号通路对肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肺癌细胞A549恶性生物学行为的影响。方法:将A549细胞随机分为对照组、银杏内酯B低剂量组、银杏内酯B中剂量组和银杏内酯B高剂量组,除对照组外,分别采用25、50、100μmol/L剂量的银杏内酯B处理银杏内酯B低、中、高剂量组的A549细胞。MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞侵袭;划痕法检测细胞迁移;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western Blot法检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、Bcl-2、Caspase-3、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和p-STAT3蛋白表达水平。结果:与对照组相比较,银杏内酯B中、高剂量组细胞活力降低,Ki67、PCNA蛋白水平显著降低,侵袭细胞数降低,划痕愈合率降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase/Caspase-3比值升高,MMP-9蛋白表达水平和p-STAT3/STAT3比值降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:银杏内酯B可通过调控MMP9/STAT3通路抑制肺癌细胞A549恶性生物学行为。

复方苦参注射液对荷DMS153裸鼠移植瘤的抑瘤作用及STAT3、MMP9表达的影响

目的:观察复方苦参注射液(compound Kushen injection,CKI)对荷DMS153小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并初步探讨其作用机制与STAT3、MMP9表达的关系。方法:建立荷DMS153裸鼠移植瘤模型。实验分为对照组、CKI低中高剂量干预组、顺铂干预组,共5组,每组10只裸鼠。CKI低中高干预组每天予以不同剂量CKI干预[1.0、2.0和4.0 ml/(kg·d)],顺铂(DDP)干预组予以顺铂干预(第1、3、5天给药4.8mg/kg),每天观察移植瘤生长情况,并测量肿瘤体积,各实验组裸鼠在第29天处死取材。q PCR和Western blotting法检测肿瘤中STAT3和MMP9的mRNA和蛋白表达水平。结果:相比于对照组,CKI不同剂量干预均能不同程度抑制肿瘤的生长(P<0.05),其中高剂量组抑制作用最为明显;与对照组相比,DDP干预亦能够显著抑制移植瘤生长(P<0.05),与CKI高剂量干预组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,CKI不同剂量干预均能不同程度抑制移植瘤中STAT3和MMP9的mRNA转录和蛋白表达水平(P<0.05),其中高剂量组抑制最为显著;CKI不同剂量干预组STAT3和MMP9的mRNA转录呈显著正相关(Pearson相关系数为0.912>0,P=0.044<0.05);CKI不同剂量干预组STAT3和MMP9的蛋白表达水平均呈显著正相关(Pearson相关系数为0.990>0,P=0.005<0.05);与对照组相比,DDP干预亦能够显著抑制移植瘤组织中STAT3和MMP9的mRNA转录和蛋白表达(P<0.05),与CKI高剂量干预组相比差异亦具有统计学意义(P<0.05)。结论:CKI能够有效抑制荷DMS153小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长,且高剂量组抑瘤作用较优;CKI抗小细胞肺癌的作用机制可能与其调控STAT3和MMP9的基因和蛋白表达有关。

Tim-3/galectin-9调控脂多糖诱导的人淋巴细胞中Th1/Th2细胞平衡

目的探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)/半乳糖凝集素-9(galectin-9)在脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞炎性过程中对辅助性T细胞(Th)Th1/Th2细胞失衡中的作用。方法收集脓毒症患者的外周血。分离外周血单个核细胞(PBMC),RT-qPCR检测Tim-3、galectin-9、T-bet和GATA3的表达;ELISA检测血清sTim-3、galectin-9、IFN-γ和IL-4的水平;分离的外周血单个核细胞体外培养,LPS刺激建立体外炎性模型;ELISA法检测细胞培养上清中Th1和Th2细胞相关细胞因子的水平;Western blot检测JAK2/STAT3相关因子的表达;Pearson相关系数分析Tim-3、galectin-9、IFN-γ和IL-4的相关性。结果脓毒症患者外周血中Tim-3和galectin-9的mRNA表达增多,sTim-3、galectin-9、IL-4和GATA-3升高,IFN-γ和T-bet水平下降,磷酸化JAK2和STAT3升高(P<0.05)。阻断Tim-3表达后,IFN-γ水平升高,而IL-4的水平明显下降,磷酸化JAK2和STAT3下降(P<0.05)。Tim-3、IL-4与galectin-9呈正相关,而Tim-3与IFN-γ呈负相关,IFN-γ与galectin-9呈负相关,Tim-3与IL-4呈正相关。结论在LPS诱导的炎性细胞中,Tim-3/galectin-9可能调控JAK2/STAT3通路,导致Th1/Th2细胞的失衡。

SOX9基因下调JAK2/STAT3信号诱导肺癌细胞凋亡及降低免疫逃逸相关因子表达的研究

目的:探讨SOX9基因对肺癌细胞凋亡、免疫逃逸相关因子HIF-1α和VEGF表达及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:以脂质体Lip-2000为载体,将针对SOX9特异性靶点的siRNA转染肺腺癌A549细胞,Western blot检测SOX9的蛋白表达; CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率; DCFH-DA检测ROS水平; Western blot检测免疫逃逸相关因子HIF-1α、VEGF及JAK2/STAT3信号通路p-JAK2、p-STAT3和下游相关基因survivin的蛋白表达。结果:转染SOX9的siRNA的肺癌细胞SOX9的表达明显降低;与阴性对照组比较,si-SOX9组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS水平显著升高,HIF-1α、VEGF、p-JAK2、p-STAT3和survivin的蛋白表达均显著降低。结论:siRNA抑制SOX9基因可降低肺癌细胞活力,诱导细胞凋亡,降低免疫逃逸相关因子HIF-1α和VEGF表达,机制可能与提高细胞ROS水平和下调JAK2/STAT3信号通路有关。

吉马酮调控JAK2/STAT3信号通路对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭的影响

背景卵巢癌死亡率居于女性生殖系统恶性肿瘤的首位,仍需不断探索新的药物来改善其预后,近年来许多研究报道了吉马酮有抗肿瘤细胞作用。目的探讨吉马酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法培养人卵巢癌SKOV3细胞,分别用0μmol/L、70μmol/L、140μmol/L、210μmol/L、280μmol/L、350μmol/L吉马酮作用于卵巢癌SKOV3细胞24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测吉马酮对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验及Transwell实验观察吉马酮对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的影响;Western blot法检测各组细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白及肿瘤侵袭转移相关蛋白MMP2、MMP9的表达。结果CCK-8实验结果提示吉马酮可以抑制人卵巢SKOV3细胞的增殖,并存在时间及浓度依赖性;细胞划痕实验显示0μmol/L、140μmol/L、280μmol/L吉马酮组划痕愈合率分别为69.00%±6.76%、40.33%±5.21%、13.79%±9.23%(P<0.05);Transwell迁移实验显示0μmol/L、140μmol/L、280μmol/L吉马酮组穿过小室细胞个数分别为466.5±47.7、319.4±41.2、149.7±26.3(P<0.05);Transwell侵袭实验显示0μmol/L、140μmol/L、280μmol/L吉马酮组穿过小室细胞个数分别为278.6±71.8、161.0±35.4、70.1±24.9。与对照组相比,药物组对细胞迁移及侵袭有明显的抑制作用(P<0.05),并具有浓度依赖性;Western blot结果提示吉马酮可浓度依赖性下调p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3,还可浓度依赖性下调MMP2、MMP9蛋白表达(P<0.05)。结论吉马酮可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭能力,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路活性、下调MMP2、MMP9蛋白表达有关。

定心方经PI3K/Akt通路抑制人脐静脉内皮细胞迁移的研究

目的:探讨定心方(DXR)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的分子机制。方法:将HUVEC分为空白组、模型组、DXR低、中、高剂量组和LY294002阻制剂组。除正常对照组外,其他组采用ox-LDL(终浓度为100mg/L)造成HUVEC损伤模型,用不同浓度定心方含药血清(终浓度为0%,5%,10%,20%)和PI3K特异性抑制剂LY294002(浓度为4μmol/L)干预培养24h。采用MTT法检测细胞增殖;细胞划痕实验和迁移实验检测各组细胞迁移情况;Western blotting法检测各组细胞中MMP9、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组可显著促进HUVEC增殖和细胞迁移,上调HUVEC内p-PI3K、p-Akt、MMP9蛋白的表达(P<0.05);与模型组比较,DXR高、中剂量组和LY294002阻制剂组可显著抑制HUVEC增殖,降低细胞迁移数目,抑制HUVEC内p-PI3K、p-Akt、MMP9蛋白的表达(P<0.05)。结论:体外实验表明,DXR可抑制ox-LDL诱导的HUVEC迁移,其机制可能与下调PI3K/Akt通路抑制MMP9表达有关。

研究Cyp2j3基因对H9C2大鼠心肌细胞保护作用以及相关机制

目的探讨Cyp2j3基因通过STAT3信号通路对H9C2心肌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组(对照组,常氧条件下培养)、pc DNA3.1组(转染空载体pcDNA3.1)、单纯缺氧复氧组(I/R+pcDNA3.1组,转染pc DNA3.1后,缺氧10 h后复氧2 h)和单纯缺氧复氧+pc DNA3.1-Cyp2j3组转染Cyp2j3的过表达载体后,缺氧10 h后复氧2 h)。Western bloting检测过表达Cyp2j3的效果;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞的LDH活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Western bloting检测增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路STAT3和磷酸化的STAT3的蛋白表达。结果转染pc DNA3.1-Cyp2j3后的H9C2细胞Cyp2j3的蛋白表达显著升高;I/R+pc DNA3.1组和I/R+pcDNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和pSTAT3的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著高于pcDNA3.1组(P<0.05),而I/R+pc DNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著高于I/R+pc DNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著低于I/R+pcDNA3.1组(P<0.05)。结论过表达Cyp2j3基因可通过激活STAT3信号减弱缺氧复氧引起的H9C2细胞增殖降低、LDH活性和凋亡增加,从而对心肌细胞起保护作用。

银杏叶提取物通过VEGF/PI3K/Akt1信号通路改善大鼠创伤性脑水肿

目的观察银杏叶提取物(EGb761)治疗大鼠急性创伤性脑水肿的效果,探讨其可能机制。方法将64只SD大鼠随机分至假手术组(A组)、创伤性脑损伤(TBI)+等剂量生理盐水组(B组)、TBI+低剂量EGb761(C组)、TBI+高剂量EGb761(D组)各16只。采用Feeney自由落体致伤法建立大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型,其中C组和D组,在创伤1 h后,分别给予EGb761(25、50 mg/kg)处理。采用干湿重法检测脑组织含水量,超氧化物阴离子荧光探针(DHE)染色观察氧自由基表达水平,Western印迹检测血管内皮生长因子受体(VEGFR)2、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)1和基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平。结果与A组相比,B、C、D组均出现脑水肿,氧自由基、VEGFR2、PI3K、Akt1和MMP-9表达水平明显上升(P<0.05);与B组相比,C组和D组在EGb761处理后脑水肿程度明显改善(P<0.05);且D组比C组显著降低(P<0.05)。结论EGb761能有效改善创伤性脑水肿,且有剂量依赖性,其机制可能是通过清除氧自由基,降低VEGFR2、PI3K、Akt1和MMP-9的表达水平。

从MMP9/IL-1β信号通路探讨蒙古族药那如-3对神经病理性疼痛“启动期”神经炎症的干预机制

神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)表型相似而病理过程的序贯性神经炎症机制各异,将神经炎症抑制在“启动期”具有重要意义并成为近年来NP治疗和药物研发的新方向。蒙古族药那如-3(Naru-3)临床治疗三叉神经痛、坐骨神经痛等NP短期即效,但其镇痛的药效学特点及机制尚不明确。该研究建立模拟临床周围神经损伤的脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)模型并采用行为学检测、副作用评估、网络分析及实验验证等方法探讨Naru-3治疗NP的药效机制。药效学结果显示,Naru-3能提高SNL动物“启动期”基础痛敏阈值(机械痛敏、热辐射痛敏),缓解自发痛,而对正常动物基础痛敏阈值、生理及病理状态下动物的运动协调功能无明显影响。靶组织初筛结果表明Naru-3能抑制小鼠福尔马林实验第二时相伤害性反应并降低脊髓炎症因子表达。网络分析发现Naru-3治疗NP具有协同性且与MMP9、IL1B等核心靶标相关。实验进一步以背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)、病变脊髓节段为研究对象,聚焦于诱导小胶质细胞神经炎症的核心靶标,采用免疫印迹、免疫荧光、激动剂、拮抗剂、行为学等技术方法发现Naru-3发挥NP镇痛作用的机制可能与其负向调节MMP9/IL-1β信号通路介导的“启动期”小胶质细胞p38/IL-1β炎症环路相关。相关研究丰富了Naru-3治疗NP的生物学内涵,并为其临床合理用药提供了参考。

丹参酮ⅡA对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护机制

目的观察丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关信号传导通路。方法通过建立H9c2心肌细胞缺血再灌注模型,分别加入不同浓度丹参酮ⅡA,采用CCK-8检测细胞存活率,通过流式细胞术检测细胞凋亡率;另外分为丹参酮ⅡA组、AG490组、丹参酮ⅡA及AG490组,通过Western blot方法检测JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达。结果 CCK-8检测显示模型组细胞存活率为78.90%±5.163%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);丹参酮ⅡA 2.5μM组细胞存活率为85.76%±6.101%,与模型组比较,P>0.05;丹参酮ⅡA 10μM组细胞存活率为90.62%±2.321%,与模型组比较,P<0.05;丹参酮ⅡA 40μM组细胞存活率为86.38%±4.712%,与模型组比,P<0.05;流式细胞术检测显示加入丹参酮ⅡA缺血再灌注导致的心肌细胞凋亡数减少;丹参酮ⅡA组P-JAK2、P-STAT3蛋白表达较缺血再灌注组明显上升,而AG490组的P-JAK2蛋白表达明显下调。结论丹参酮ⅡA可改善缺血再灌注引起的大鼠心肌细胞凋亡,其保护机制可能与JAK2/STAT3信号通路有关。

白细胞介素-9对肝癌细胞的生物学作用及机制

目的研究白细胞介素(IL)-9对肝癌细胞的生物学作用及STAT3信号通路的影响,探讨IL-9影响肝癌细胞增殖的可能机制。方法体外培养Hep G2细胞,使用不同浓度IL-9干预细胞24 h,CCK8法检测肿瘤细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中STAT3和p-STAT3表达水平。IL-9干预前加或不加用STAT3抑制剂AG490处理,再检测细胞增殖率,以及细胞中STAT3和p-STAT3水平。结果随着IL-9浓度升高,Hep G2细胞增殖率增高,迁移和侵袭能力增加(P<0.05),但细胞凋亡率无明显改变(P>0.05)。与未进行干预相比,IL-9干预后Hep G2细胞中的STAT3蛋白水平无明显改变(P>0.05),但p-STAT3表达水平显著增高(P<0.05)。使用AG490预处理后,IL-9对Hep G2细胞的增殖作用被显著抑制(P<0.05),且p-STAT3表达水平显著降低(P<0.05)。结论 IL-9以浓度依赖性促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,但对细胞凋亡无显著影响,这种作用是通过激活STAT3磷酸化实现的。

隐丹参酮抗肺腺癌作用的研究

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人肺腺癌细胞株A549和PC-9诱导凋亡的作用及其可能机制。方法不同浓度的CPT分别作用A549和PC-9细胞24和48h,CCK-8法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达水平。结果 CPT能够抑制A549和PC-9细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性。CPT作用于A549和PC-9细胞24h后,细胞凋亡率随CPT浓度增加呈增长趋势,而线粒体膜电位降低。CPT作用于A549和PC-9细胞后cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达水平增加,p-STAT3蛋白表达水平下降。结论 CPT对人肺腺癌细胞A549和PC-9有显著的增殖抑制作用和诱导凋亡效应,线粒体凋亡途径和STAT3信号通路可能参与了这一过程。

JAK2激酶抑制剂AG490对胃癌细胞侵袭的影响

目的 观察JAK2激酶抑制剂AG4 90对胃癌细胞侵袭以及对基质金属蛋白酶类(MMPs)、组织型基质金属蛋白酶抑制物 (TIMPs)表达的影响 ,探讨STAT3信号转导通路在胃癌侵袭转移调控中的作用。方法 应用JAK2激酶抑制剂AG4 90处理胃癌BGC 82 3细胞 ,Matrigel肿瘤体外侵袭模型检测肿瘤细胞侵袭 ;Westernblot检测STAT3、MMP 2、MMP 9蛋白表达及活性 ;RT PCR检测MMPs、TIMPsmRNA的表达。结果 AG4 90可抑制JAK2 /STAT3信号转导通路活化及胃癌BGC 82 3细胞侵袭 ,在此过程中AG4 90在mRNA和蛋白水平抑制MMP 2和MMP 9表达 ,同时上调TIMP 1、TIMP 2mRNA的表达。结论 STAT3信号转导通路参与胃癌细胞侵袭调控 ,阻断STAT3通路活化可以抑制胃癌细胞侵袭 ,这一作用可能是通过抑制MMP 2和MMP 9表达以及上调TIMP 1和TIMP 2表达实现的。

干扰lncRNA CASC9表达对肝细胞癌细胞干性特征影响机制探讨

目的长链非编码RNA肿瘤易感性候选基因9(long non-coding RNA tumor susceptibility candidate gene 9,lncRNACASC9)有助于肿瘤的发生和发展,但它是否影响着肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞的干性特征罕见报道。本研究旨在探讨LncRNA CASC9对HCC细胞干性特征的影响及作用机制。方法培养人HCC细胞系SNU-475、HepG2、SNU-398、Huh-7和人永生化肝上皮细胞L02,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测各细胞中LncRNA CASC9表达水平。将Huh-7细胞分为空白对照组(Control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)和CASC9 siRNA干扰组(siRNA-CASC9),并将CASC9 siRNA干扰质粒及其阴性对照质粒转染至Huh-7细胞中,采用qRT-PCR检测转染后细胞中lncRNACASC9表达水平及干性相关基因OCT-4、SOX2、Bmi1和Nanog等mRNA水平;克隆形成实验和细胞成球实验检测转染后细胞的干性细胞特征,流式细胞仪检测干细胞(EpCAM^+AFP^+)亚群的比例,蛋白质印迹法检测转染后细胞中OCT-4、SOX2、Bmi1、Nanog、p-STAT3、STAT3、KLF4和c-Myc等蛋白表达水平。结果 L02、SNU-475、HepG2、SNU-398和Huh-7细胞系培养48h后,细胞中lncRNACASC9表达量分别为1.03±0.07、2.06±0.19、1.77±0.20、2.88±0.14和3.63±0.37,差异有统计学意义,F=64.115,P<0.001。其中SNU-475(P<0.001)、HepG2(P=0.002)、SNU-398(P<0.001)和Huh-7(P<0.001)细胞中LncRNACASC9表达量均低于L02细胞。CASC9干扰48h后,siRNA-CASC9组细胞中lncRNA CASC9表达量为0.41±0.05,低于Control组(1.03±0.07)和siRNA-NC组(1.01±0.03),F=144.970,P<0.001;siRNA-CASC9组细胞克隆形成数为(45.00±10.81)个,低于Control组(277.33±7.77)个和siRNA-NC组(264.67±9.71)个,F=565.358,P<0.001;siRNA-CASC9组细胞成球率为(12.74±2.56)%,低于Control组的(25.93±3.89)%和siRNA-NC组的(24.61±4.72)%,F=10.810,P=0.010;siRNA-CASC9组EpCAM^+AFP^+细胞亚群比例为(4.68±0.33)%,低于Control组的(8.64±0.84)%和siRNA-NC组的(7.91±1.08)%,F=20.289,P=0.002;siRNA-CASC9组细胞中OCT-4、Nanog、SOX2和Bmi1等mRNA和蛋白相对表达水平分别低于Control组和siRNA-NC组,差异有统计学意义,P<0.05;siRNA-CASC9组细胞中p-STAT3/STAT3、KLF4和c-Myc等蛋白相对表达水平均低于Control组和siRNA-NC组,F值分别为13.525、25.122和35.038,均P<0.05。结论 LncRNACASC9在HCC细胞系中的表达水平高于正常肝细胞,干扰lncRNACASC9表达能降低HCC细胞的干性特征,其机制可能与STAT 3信号通路的抑制有关。

白介素-9促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长及其机制研究

目的白细胞介素-9(IL-9)是机体重要的免疫因子,参与不同肿瘤的发生发展,而其在胰腺癌的生物学效应尚不清楚,为此探索IL-9对人胰腺癌裸鼠移植瘤的作用及其机制。方法应用人胰腺癌细胞株PANC-1建立裸鼠皮下移植瘤模型。应用随机数字表法将64只裸鼠平均分成4组(16只/组),对照组予瘤内注射生理盐水0.1mL,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别予瘤内注射90(低剂量组)、180(中剂量组)和360ng(高剂量组)IL-9,各组均隔天干预1次,共注射8次。末次用药3d后,各组随机处死8只裸鼠,取各组移植瘤组织并测质量。采用免疫组织化学染色法检测瘤组织中STAT3、p-STAT3、Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达。蛋白质印迹法检测瘤组织中STAT3、p-STAT3。其余小鼠观察生存时间。结果低剂量组、中剂量组和高剂量组移植瘤的平均质量分别为(216.01±37.15)、(261.63±39.85)和(323.12±46.71)mg,明显高于对照组移植瘤的(196.75±25.32)mg,F=17.447,P<0.001;中(t=3.410,P=0.002)、高剂量组(t=6.643,P<0.001)与对照组相比差异有统计学意义。与对照组相比,IL-9干预后裸鼠的生存期缩短(χ~2=18.850,P=0.003),高剂量组的平均生存时间显著降低(χ~2=11.347,P=0.001)。蛋白质印迹法和免疫组化染色法检测结果显示,与对照组相比,IL-9干预后瘤组织内STAT3表达水平未见明显改变,而p-STAT3与表达水平显著升高,差异有统计学意义,均P<0.001。免疫组织化学染色结果还显示,在不同剂量IL-9干预后的瘤组织中,与对照组相比Bcl-2表达无明显变化(χ~2=1.067,P=0.956),Cyclin D1表达升高,组间差异有统计学意义,χ~2=10.416,P=0.018。结论IL-9能明显促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长,同时降低裸鼠的生存时间,该作用可能是通过激活STAT3磷酸化实现的。

17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素对乳腺癌细胞增殖及侵袭作用

目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxy-geldanamycin,17-AAG)通过抑制转录活化蛋白3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)信号通路发挥对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的调控作用。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的17-AAG进行作用,MTT法检测细胞增殖能力;RT-PCR法和Western Blot法检测各组细胞STAT3、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果:0.165～10mg/L的17-AAG作用24 h、48 h后对MCF-7细胞有显著的抑制作用;1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L的17-AAG作用48 h后,各组细胞STAT3、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达均下调,且具有浓度依赖性;Tran-swell小室检测显示17-AAG处理后穿膜细胞数明显减少,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能够抑制STAT3的mRNA和蛋白的表达水平,进而抑制VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平,从而调控乳腺癌细胞的侵袭性。