S100A_4在肺癌中的表达及其与MMP9/TIMP1表达失衡的关系

目的:研究S100A4在人肺癌中的表达及其临床生物学意义,探讨其在肺癌的侵袭和转移中的作用及其与MMP9/TIMP1表达失衡的关系。方法:采用S-P免疫组化法检测50例肺癌及6例正常肺组织中S100A4、MMP9及TIMP1的表达水平。结果:S100A4、MMP9和TIMP1在肺癌中表达显著高于正常肺组织;非小细胞肺癌中表达明显高于小细胞肺癌(P<0.05);腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05)。S100A4和MMP9表达与非小细胞肺癌临床病理特征关系密切,在有淋巴结转移组与无转移组中两者均有显著性差异(P<0.05)。在肺癌不同临床TNM分期中,S100A4和MMP9阳性表达随临床分期的升高而明显增加,各期间均有显著性差异(P<0.05)。MMP9表达与非小细胞肺癌分化程度密切相关,随分化程度的降低,MMP9阳性率升高(P<0.05);S100A4阳性率随分化程度的降低也有升高趋势,但没显著性差异。S100A4表达与肿瘤大小有密切的正相关关系,随肿瘤体积的增大,S100A4的阳性率升高(P<0.05)。S100A4与MMP9呈正相关(P<0.05);MMP9与TIMP1呈正相关关系(P<0.05)。结论:S100A4和MMP9与肺癌的侵袭和转移有密切的关系,可以作为评估肺癌病人预后的重要指标。TIMP1不是简单对MMP9的局部升高起反应。S100A4参与调节MMP9的表达,则可能为肺癌的治疗开辟一条新的途径。

通肺络补宗气方对肺纤维化大鼠肺功能、MMP9/TIMP1平衡及FN、Col Ⅳ表达的影响

目的:观察通肺络补宗气方对肺纤维化大鼠肺功能、基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)平衡及纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响。方法:健康雄性SD大鼠96只,按随机数字表法分为空白组、模型组、中药初、中、后期干预组和西药初、中、后期干预组,中药各组给予通肺络补宗气方灌胃,西药各组给予N-乙酰半胱氨酸灌胃,均连续给药90 d。实验第19周检测各组大鼠肺功能相关指标变化以及肺组织中FN、ColⅣ、MMP9和TIMP1蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型大鼠肺功能FVC、Cdyn明显降低,肺组织中FN、ColⅣ、MMP9和TIMP1表达水平明显升高;与模型组比较,中药初、中期干预组大鼠肺功能Cdyn明显升高(P<0.05),中西药各干预组大鼠FN、ColⅣ和TIMP1表达水平明显降低,中药初期干预组大鼠MMP9表达水平明显降低。结论:通肺络补宗气方可调节MMP9/TIMP1失衡,减少FN、ColⅣ的过度沉积,进而改善大鼠肺功能,抑制大鼠肺纤维化的发生发展。

缺氧对细胞滋养细胞MMP9/TIMP1基因表达及细胞侵袭力的影响

目的探讨缺氧对细胞滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制物1(TIMP1)mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭能力的影响。方法将永生化的早孕细胞滋养细胞进行化学缺氧(150μmol/L CoCl2),用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot等方法检测正常和缺氧细胞滋养细胞系MMP9/TIMP1基因的表达,应用Transwell侵袭模型检测缺氧对细胞滋养细胞侵袭能力的影响。结果缺氧组的细胞滋养细胞MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),MMP9/TIMP1比值升高,且呈时间依赖性。缺氧组细胞滋养细胞的侵袭力较对照组增强(P<0.05)。结论在生理性缺氧条件下,早孕细胞滋养细胞的侵袭力是增加的,并与MMP9/TIMP1比值的升高有关;同时TIMP1除了调节MMP9外,还可能促进细胞滋养细胞的增殖与分化。

中药熏蒸治疗炎症坏死期糖尿病足溃疡的疗效及对创面渗出液中TGF-β_(1)、IL-1β、MMP-9、TIMP-1水平的影响

目的探讨自拟中药复方熏蒸治疗炎症坏死期糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)的临床疗效以及其对患者创面渗出液中转化生长因子(TGF)-β_(1)、白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)水平的影响。方法选取2018年3月—2019年12月该院收治的96例炎症坏死期DFU患者,采取简单随机数字表法将其随机分成观察组48例与对照组48例。其中对照组采取西医常规治疗,观察组在此基础上联合笔者自拟中药复方(由大黄、土茯苓、毛冬青、金银花、黄芪、败酱草、连翘、苦参等十六味中药组成)熏蒸治疗。连续治疗14 d后评估两组疗效及安全性。观察两组治疗前及治疗7、14 d后创面面积、创面中医证候积分及创面渗出液中TGF-β_(1)、IL-1β、MMP-9和TIMP-1水平的变化情况,并进行统计分析。结果观察组疾病总有效率和创面中医证候总有效率分别为91.7%(44/48)、85.4%(41/48),均较对照组[75.0%(36/48)、66.7%(32/48)]显著提高(P<0.05)。随治疗时间的延长,两组创面面积均逐渐缩小(P<0.05),创面中医证候积分均逐渐降低(P<0.05);但与同期对照组相比,观察组治疗7、14 d后创面面积均显著更小(P<0.05),创面中医证候积分则均显著更低(P<0.05)。随治疗时间的延长,两组创面渗出液中TGF-β_(1)、TIMP-1浓度均逐渐升高(P<0.05),IL-1β、MMP-9含量则均逐渐降低(P<0.05);且观察组治疗7、14 d后创面渗出液中TGF-β_(1)、TIMP-1水平均显著高于对照组同期(P<0.05),IL-1β、MMP-9水平则均较对照组同期显著更低(P<0.05)。两组不良反应均较少且轻微。结论自拟中药复方熏蒸治疗炎症坏死期DFU的整体疗效确切,能明显减轻患者创面局部症状,加快创面愈合速度,其作用机制可能是通过进一步上调创面渗出液中TGF-β_(1)、TIMP-1表达水平及下调IL-1β、MMP-9表达水平实现的。

3D打印技术用于经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术应用效果及对血清MMP-9和IGF-1水平的影响

目的:探究3D打印技术在经鼻蝶窦入路垂体腺瘤(PA)切除术的应用效果及对血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月秦皇岛市第一医院收治的84例PA患者,按照随机数表法将其分为观察组和对照组,每组42例。对照组行经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术,观察组行经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术联合应用3D打印技术,比较两组肿瘤切除效果、围术期指标、视力改善情况、MMP-9和IGF-1水平,以及鼻腔功能的鼻气道阻力(NAR)、T&T嗅觉测试评分及并发症。结果:观察组肿瘤切除效果优于对照组,差异有统计学意义(U=2.286,P<0.05);观察组手术时间、术中出血量及住院时间均少于对照组,差异有统计学意义(t=4.780、11.438、11.842,P<0.05);术后3 d、7 d时观察组血清MMP-9和IGF-1水平低于对照组,差异有统计学意义(F=7.526、4.985,P<0.05);术后1个月、3个月时观察组NAR及T&T嗅觉测试评分低于对照组,差异有统计学意义(F=6.359、8.436,P<0.05);两组视力视野改善情况及并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:3D打印技术用于经鼻蝶窦入路垂体腺瘤切除术可提高肿瘤切除效果,优化手术操作,减少创伤,有利于减轻疼痛,改善嗅觉功能与视力视野,并能降低血清MMP-9、IGF-1水平,且安全性较高。

针刀对肌性斜颈模型兔胸锁乳突肌中calpain-1、CD45、MMP-2、TIMP-2蛋白表达的影响

目的:应用肌性斜颈兔动物模型,探讨针刀治疗肌性斜颈的作用机制及意义。方法:无水酒精注射制备动物肌性斜颈兔子模型后,选取模型兔子48只,随机分为正常组、模型组、针刀组、按摩组,每组12只。分别给予各组对应治疗,治疗2个月后各组分别取部分胸锁乳突肌制作标本,免疫组化法观察钙蛋白酶1(calpain-1)、分化抗原决定簇45(CD45)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)在各组肌纤维中的表达情况。结果:与正常组比较,其余各组实验动物明显出现颈部活动受限、斜颈、头颈不对称症状,而治疗结束后,针刀组和按摩组实验动物颈部活动受限改善,无明显头颈不对称症状。calpain-1、CD45、TIMP-2的表达,与正常组比较,模型组、按摩组上调(P<0.01);与模型组比较,针刀组、按摩组下调(P<0.01);与针刀组比较,按摩组上调(P<0.01)。MMP-2表达,与正常组比较,模型组下调(P<0.01),与模型组比较,针刀组、按摩组上调(P<0.05)。结论:针刀治疗肌性斜颈效果显著,其作用机制可能与减少calpain-1、CD45、TIMP-2表达,增加MMP-2表达有关。

益气养阴活血方对肺纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的观察益气养阴活血方对肺纤维化大鼠的影响,探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法采用博来霉素气管滴注制备肺纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、醋酸泼尼松组和益气养阴活血方高、中、低剂量组(中药高、中、低剂量组),每组8只,另取8只正常大鼠作为空白组,给药组予相应药物灌胃28 d,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃。末次给药后,行肺功能检测,HE和Masson染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测肺组织纤连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)表达,RT-PCR检测肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA表达,Western blot检测肺组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3、MMP9和TIMP1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠吸气时间和呼气时间显著缩短,每分钟通气量和呼吸频率显著增加(P<0.01),肺组织结构损伤明显,肺泡塌陷、萎缩、间隔变宽,有大量胶原纤维沉积,肺组织FN和LN表达显著升高(P<0.01),TGF-β1、Smad3、MMP9 mRNA和TGF-β1、p-Smad3、MMP9蛋白表达显著升高,TIMP1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,中药高剂量组大鼠吸气时间和呼气时间显著延长,每分钟通气量和呼吸频率显著减少(P<0.01),肺泡形态较完整、间隔变窄,炎性细胞浸润减少,胶原纤维沉积减少,肺组织FN和LN表达显著降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、Smad3、MMP9 mRNA和TGF-β1、p-Smad3、MMP9蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),TIMP1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论益气养阴活血方可能通过调控TGF-β1、Smad3、p-Smad3表达,调节MMP-9/TIMP-1平衡,降解细胞外基质,延缓肺纤维化发展。

推拿㨰法对骨骼肌钝挫伤兔MMP-9、TIMP-1、TGF-β_(1)和COL-Ⅰ表达的影响

目的观察推拿㨰法对家兔骨骼肌钝挫伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))以及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)表达的影响,探讨推拿㨰法对骨骼肌钝挫伤的修复作用机制。方法将15只健康成年新西兰兔随机分为空白组、模型组和推拿㨰法组,每组5只。使用自制改良重力锤打击装置对模型组和推拿㨰法组家兔建立骨骼肌钝挫伤模型。推拿㨰法组家兔于造模成功后第7天给予法干预,滚动频率140次/min,2次/d,3 min/次,连续干预3 d。干预结束后第3天进行取材,HE和Masson染色观察股四头肌病理形态,Western blot法检测股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β_(1)、COL-Ⅰ表达情况。结果HE染色显示,模型组肌细胞形态大小不均,细胞边界模糊,间隙显著增宽,结缔组织增多,炎细胞浸润明显;推拿㨰法组肌细胞结构相对完整,见少量炎细胞浸润,结缔组织减少。Masson染色显示,模型组肌纤维形态多样且不规整,间隙增宽,部分肌纤维融合成片状,胶原纤维沉积明显;推拿㨰法组肌纤维结构、形态变化及胶原纤维增生程度均明显轻于模型组。模型组家兔股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β_(1)、COL-Ⅰ蛋白相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05),推拿㨰法组家兔股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β_(1)、COL-Ⅰ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论推拿㨰法能通过下调MMP-9、TIMP-1、TGF-β_(1)、COL-Ⅰ的表达,抑制胶原蛋白沉积,调控细胞外基质的生降平衡,进而抑制骨骼肌纤维化,促进骨骼肌损伤修复。

手足口病合并脑炎患儿血清和脑脊液中MMP-9和TIMP-1水平的临床价值分析

目的 探讨手足口病合并脑炎患儿血清和脑脊液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平及其比值对病情评估的临床价值。方法 选取2018年1月至2022年2月青海省妇女儿童医院收治的107例手足口病患儿为研究对象,根据是否伴有颅内感染性脑炎将患儿分为研究组(n=62)与对照组(n=45),再根据感染程度将研究组分为轻症组(n=38)与重症组(n=24)。收集患儿的临床资料及实验室检测指标,经过临床2~3周治疗后,对处于恢复期的研究组患儿复查血清和脑脊液有关指标。比较研究组与对照组的临床资料,以多因素Logistic回归分析手足口病患儿无合并脑炎向合并脑炎进展的独立危险因素,比较研究组患儿治疗前后血清和脑脊液中MMP-9、TIMP-1水平及其比值的变化情况,采用Pearson分析血清和脑脊液中MMP-9、TIMP-1的相关性,以受试者工作特征(ROC)曲线预测MMP-9、TIMP-1及其比值对手足口病合并脑炎的诊断价值。结果 研究组与对照组的病程、白蛋白(Alb)、C反应蛋白(CRP)、血清白细胞计数(WBC)、血清中性粒细胞百分比(NEUT)、血清MMP-9、血清TIMP-1、血清MMP-9/TIMP-1、免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG、脑脊液WBC、脑脊液蛋白、脑脊液MMP-9、脑脊液TIMP-1、脑脊液MMP-9/TIMP-1比较差异均有统计学意义(t=2.134~226.271,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,病程、CRP、血清WBC、血清NEUT、血清MMP-9、血清TIMP-1、血清MMP-9/TIMP-1、IgA、脑脊液蛋白、脑脊液MMP-9、脑脊液TIMP-1、脑脊液MMP-9/TIMP-1均是影响手足口病患儿无合并脑炎向合并脑炎进展的独立危险因素(Waldχ^(2)=1.725~9.225,P<0.05)。治疗前,轻症组和重症组患儿血清和脑脊液中MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1均明显高于对照组(轻症组治疗前与对照组比较:t值分别为77.410、10.873、3.396、18.046、3.244、5.095,重症组治疗前与对照组比较:t值分别为123.273、19.895、4.401、40.734、11.649、5.539),重症组均明显高于轻症组(t值分别为40.463、10.986、3.014、23.026、8.452、3.020),差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,轻症组和重症组患儿血清和脑脊液中MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1均明显低于组内治疗前,差异均有统计学意义(t=2.279~106.034,P<0.05)。Pearson相关分析显示,血清和脑脊液中MMP-9与TIMP-1水平均呈正相关(r分别为0.779、0.828,P<0.05)。ROC分析显示,血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1诊断手足口病合并脑炎的曲线下面积分别为0.729、0.782、0.858,最佳临界值分别为186.32ng/mL、128.78ng/mL、1.25;脑脊液MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1诊断手足口病合并脑炎的曲线面积分别为0.812、0.864、0.912,最佳临界值分别为25.48ng/mL、22.36ng/mL、1.46,脑脊液MMP-9/TIMP-1诊断价值最高。结论 手足口病合并脑炎患儿血清和脑脊液中MMP-9、TIMP-1水平及其比值随着病情严重程度的增加而升高,其均为手足口病无合并脑炎向合并脑炎进展的独立危险因素,脑脊液中MMP-9/TIMP-1具有更高的诊断价值。

芪蛭通脉颗粒对冠心病模型大鼠MMP-9/TIMP-1影响的研究

目的观察芪蛭通脉颗粒对冠心病模型大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的调节作用,研究芪蛭通脉颗粒治疗冠心病的作用机理。方法将Wistar大鼠随机分为芪蛭通脉颗粒低、中、高剂量组,血塞通滴丸组、模型组和空白组,每组10只,共60只。造模成功后,连续用药4周。治疗结束后,ELISA法检测血清MMP-9、TIMP-1和心肌组织MMP-9、TIMP-1水平,检测凝血功能[活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)]及大鼠肝、肾功能[谷丙转氨酶(ALT)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)]。结果与空白组比较,模型组、血塞通滴丸组、芪蛭通脉低剂量组大鼠血清MMP-9水平显著升高(P<0.01);与空白组比较,模型组TIMP-1水平降低(P<0.05)。芪蛭通脉中、高剂量组与模型组比较MMP-9水平降低(P<0.05)。芪蛭通脉中、高剂量组与模型组比较TIMP-1水平显著升高(P<0.01)。各组凝血功能未见异常,模型组ALT、Cr升高(P<0.05)。结论芪蛭通脉颗粒可以降低MMP-9水平,升高TIMP-1水平,可能的作用机制是抑制MMP-9的释放,促进TIMP-1生成,抑制细胞外基质的降解,稳定斑块,延缓动脉粥样硬化进程。未发现低、中、高剂量芪蛭通脉颗粒致凝血功能障碍及肝肾功异常。

UHRF1通过WNT/MMP9信号通路抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移

目的探索UHRF1基因与结直肠癌(CRC)患者临床病理特性的关系,慢病毒转染过表达和敲减UHRF1对CRC细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能的信号通路。方法免疫组织化学和RT-PCR法检测112例CRC癌组织与癌旁组织UHRF1的表达。构建慢病毒转染过表达和敲减UHRF1载体,分别转染SW480和HCT116细胞株,RT-PCR和Western blot检测转染前后及IWP-2(WNT拮抗剂)和HLY78(WNT活化剂)干预前后的UHRF1、WNT信号通路关键分子和MMP9的表达。EDU检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果(1)TCGA数据库和临床数据中,癌组织中UHRF1 m RNA和蛋白表达均高于正常组织。UHRF1表达量与TNM分期、N和M分期密切相关。TCGA中UHRF1低表达患者有更长的5年OS和疾病相关存活时间(DSS),UHRF1预测1、3和5年OS的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.634、0.652和0.771;在临床数据中3年OS也有相同生存获益,UHRF1高表达是CRC不良预后因素。(2)过表达UHRF1后,SW480中WNT3a、GSK3β和MMP9分子表达明显升高,p-β-catenin表达下降(P<0.05);敲减UHRF1后,HCT116细胞中WNT3a、GSK3β、MMP9表达下降,而p-β-catenin表达升高(P<0.05);分别用IWP-2和HLY78进行“拯救”实验,能够获得一致结果。(3)过表达组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组;IWP-2处理后,细胞增殖、迁移及侵袭能力则受到抑制。敲减实验呈现与过表达实验相反的结果。结论UHRF1在CRC发生发展中可能具有重要作用,UHRF1高表达可能是CRC不良预后因素,UHRF1可能通过WNT/MMP9信号通路来影响CRC的增殖、迁移和侵袭。

腮腺多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤组织中Kiss-1、MMP-9蛋白的表达

目的:探讨腮腺多形性腺瘤(PA)和癌在多形性腺瘤(CPA)组织中肿瘤转移抑制基因Kiss-1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达情况。方法:采用免疫组织化学染色法检测正常腮腺、PA、CPA组织中Kiss-1和MMP-9蛋白的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:正常腮腺、PA和CPA组织中Kiss-1蛋白阳性表达率分别为100.0%、76.7%、24.4%,逐渐降低;而MMP-9蛋白阳性表达率分别为20.0%、53.3%、88.9%,逐渐升高(P<0.05)。CPA组织中Kiss-1和MMP-9蛋白的表达呈负关联(r_(S)=0.416,P=0.002);且MMP-9蛋白的表达与CPA的侵袭性、TNM分期有关(P<0.05)。结论:Kiss-1、MMP-9蛋白可能与CPA的发生、发展及转移密切相关。

MMP-2/9活性与TIMP-1/2蛋白表达在大鼠肺纤维化形成中的变化特点

目的：观察大鼠肺纤维化形成过程中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2／9的活性及其活性抑制物——基质金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP）-1／2蛋白表达的动态变化，探讨肺纤维化形成过程中细胞外基质（extracellular matrix，ECM）降解的调控规律。方法：SD大鼠48只，随机分为模型组（30只）与正常对照组（18只）。模型组大鼠予以1次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型，正常对照组大鼠于气管内注入等量生理盐水。每组再各设1d、3d和1、2、3、4周共6个时间观察点，动态观察大鼠肺系数的变化。HE染色观察大鼠肺组织病理学的改变；Masson染色观察大鼠肺组织胶原沉积情况；Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）的含量；Western印迹法分析肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达变化；明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性。结果：与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠染毒后2周其肺组织发生局灶性病变，肺泡壁与间隔增厚，肺泡腔与间质内有大量炎细胞浸润，伴有少量成纤维细胞；肺系数明显增高；肺组织内Hyp含量稍升高；MMP-2／9蛋白的表达与活性增加，以活化型MMP-2增加更为明显；TIMP-1／2蛋白的表达则逐渐增加。模型组大鼠染毒后3～4周时，肺泡结构遭到破坏，部分肺泡腔塌陷消失，由胶原纤维和成纤维细胞占据，肺泡壁与间隔进一步增厚，形成严重的肺纤维化；肺系数较2周时有所下降，肺组织Hyp含量和TIMP-1／2蛋白的表达明显增加，至染毒后4周时最为明显；MMP-2／9活性较2周时有所下降，尤以活化型MMP-2的活性下降较为明显。结论：博来霉素诱导肺纤维化形成过程中，早期肺组织的病理学变化以肺泡炎症为主，肺组织内MMP-2／9活性增高；后期以纤维化为主，肺组织TIMP-1／2表达明显增加，MMP-2／9活性则有所下降。

MMP-9与TIMP-1在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的研究结扎大鼠单侧输尿管(UUO)制备的实验性肾纤维化模型梗阻肾基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)表达的动态变化,探讨MMP-9和TIMP-1在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法将64只雄性大鼠随机分为假手术组和UUO组(n=32),UUO组结扎单侧输尿管,术后3d、7d、14d、21d每组各处死8只大鼠,用免疫组化法检测大鼠梗阻肾组织MMP-9、TIMP-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SAM)及纤维连接蛋白(FN)的表达。结果UUO术后3d,PAS染色见少量肾小管基底膜(TBM)局灶性断裂。术后7d,TBM断裂程度加重,基底膜断裂的肾小管数增多。术后14d直至术后21d,可见部分TBM增厚、扭曲,基底膜断裂程度和基底膜断裂的肾小管数较7d时略减轻和减少。与假手术组相较,UUO组随着梗阻时间的延长,肾间质中α-SMA、FN、TIMP-1蛋白表达逐渐增多。UUO组术后3d可见MMP-9在肾小管间质有强阳性表达,术后7d达高峰,14～21d呈下降趋势。α-SMA、MMP-9、TIMP-1主要表达于肾小管上皮和肾间质。MMP-9阳性染色面积与α-SMA阳性染色面积、TBM的断裂程度、基底膜断裂的肾小管个数均呈正相关(r分别为0.894,0.854,0.821,P均<0.05)。结论肾小管间质MMP-9和TIMP-1蛋白表达的动态变化影响TBM完整性与ECM堆积。MMP-9与TIMP-1相互拮抗调节肾小管基底膜代谢,参与肾小管上皮细胞转分化,影响肾纤维化进展。

MMP9、TIMP1及VEGF在子宫内膜异位症患者在位内膜的表达

研究基质金属蛋白酶 9(matrixmetalloproteinase 9,MMP9)及其抑制剂 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP1)和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在子宫内膜异位症 (endometriosis,EM)患者的在位内膜中的表达。采用免疫组化SP法分别检测 4 5例EM(研究组 )在位内膜及 32例子宫肌瘤 (对照组 )的在位内膜中MMP9、TIMP1及VEGF的表达。MMP9、TIMP1、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组和对照组的表达分别为 0 336 ,0 2 76 ;0 2 5 3,0 2 6 7和 1 2 93,1 0 34;0 372 ,0 2 88。其中MMP9、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组中的表达显著高于对照组内膜 (P <0 0 1)。EM患者的在位内膜中MMP9、VEGF高表达可能是EM发生发展的重要原因。诊刮筛选出高MMP9、VEGF表达的在位内膜可望成为预测和诊断EM的方法之一。

肺癌组织中MMP-9及TIMP-1的表达与转移、预后相关性研究

目的 探讨MMP 9及其抑制剂TIMP 1在人肺癌中的表达及其与肺癌转移、预后的相关性 ,分析肺癌发生、发展、侵袭和转移的机制。方法 应用免疫组化S P法检测 65例肺癌、3 5例其他肺部疾患病变支气管粘膜增生及不典型增生上皮和 3 0例正常支气管粘膜上皮组织中MMP 9和TIMP 1的蛋白表达。结果 肺癌与正常、增生上皮相比 ,增生与正常上皮相比 ,MMP 9和TIMP 1阳性表达率的升高均具有显著性(P <0 .0 5 )。不同组织学类型中MMP 9的阳性表达有显著性差异 (P <0 .0 2 5 ) ;MMP 9的阳性表达与肺癌细胞分化程度负相关 (P <0 .0 5 ) ,与TNM分期正相关 (P <0 .0 2 5 )。生存期小于 2年者的MMP 9和TIMP 1阳性表达率显著高于生存期大于或等于 2年者 (P <0 .0 5 )。MMP 9阳性表达上调与肺癌转移相关 (P <0 .0 0 5 ) ,TIMP 1与转移无关。结论 MMP 9阳性表达上调可出现在癌前病变及肺癌发病的早期阶段 ,MMP 9基因激活可能是肺癌癌变的重要因素 ;MMP 9、TIMP 1在肺肿瘤浸润转移中发挥重要作用 ,其过度表达可作为评估肺癌浸润转移和预后不良的参考指标。

MMP-2、MMP-9、TIMP-1在血管成形术后再狭窄中的表达及其意义的实验研究

目的观察PTA后MMP-2、MMP-9和TIMP-1在血管壁各层随时间的演变规律,探讨其在血管再狭窄过程中的表达及意义。方法48只大鼠制作成颈动脉再狭窄动物模型,选取30只内膜增生满意的标本,分别代表动脉损伤后1、3、7、14、28、42天6个观察时间点,对胶原纤维进行Masson染色。MMP-2、TIMP-1、PCNA进行免疫组织化学染色,MMP-9进行免疫组织化学和原位杂交两种染色。分析它们的表达与内膜增生和血管重塑的关系。结果正常血管不表达MMP-9mRNA及蛋白,损伤后第3天中膜、外膜mRNA表达达高峰,第7天内膜表达达高峰。MMP-9蛋白第7天内膜表达达高峰,且阳性细胞率高于中膜和外膜。第14、28天,血管壁各层表达逐渐下降至基线水平,内膜的阳性细胞主要集中在新生内膜靠近管腔的一侧。内膜MMP-2表达高峰出现晚至第14天,且近内弹力板处MMP-2也有明显的表达。正常血管壁不表达TIMP-1,损伤后第3天,中膜和外膜表达达高峰。第7天,新生内膜表达达高峰,中膜和外膜仍有较高水平表达。结论MMP-9、MMP-2、TIMP-1参与再狭窄,内膜MMP-9表达与早期增殖的细胞向内膜迁移形成新生内膜有关。MMP-2表达与晚期内膜形成、内膜重塑有关。TIMP-1的表达对内膜增生和重塑没有直接作用,其表达升高是机体为适应MMPs升高做出的代偿反应,在维持自身平衡中起作用。

口服普萘洛尔对婴幼儿血管瘤MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的影响

目的研究口服普萘洛尔前后婴幼儿血管瘤病灶内MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的影响。方法选择2010年5月至2011年12月来我院就诊、年龄≤3个月、血管瘤病灶位于肢体或隐蔽部位、家属要求手术治疗却具备单独口服普萘洛尔治疗条件、排除口服普萘洛尔禁忌证、先前未接受过其他任何相关治疗的病例作为研究对象,共39例。经过与家属沟通并征得其书面同意,先按口服普萘洛尔诊疗常规,口服用药前在局麻下夹取血管瘤体组织活检,后口服8周普萘洛尔[剂量:2 mg/(kg.d),分2次,每12小时用药],继而手术切除瘤体。采用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR的方法,检测口服用药前后病灶组织内MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的变化,计算口服用药前后病灶微血管密度(MVD)。结果免疫组化与实时荧光定量RT-PCR结果均提示,口服普萘洛尔后血管瘤病灶内MVD值明显减低且具有统计学意义(t=18.458,P<0.01),MMP-2、MMP-9表达水平较用药前明显减少(P<0.01),TIMP-1、TIMP-2表达水平明显增高(P<0.01)。且口服用药后上述4个因子免疫组化平均积分光密度、mRNA相对表达量变化与MVD值变化密切相关。结论普萘洛尔可下调血管瘤病灶内MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1、TIMP-2的表达,从而抑制新生血管的形成。

VEGF-C MMP9及TIMP-1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF-C)、基质金属蛋白酶MMP9及其抑制物TIMP-1在宫颈癌组织中的表达,及与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接染色法(SP法),检测62例宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期患者癌组织中VEGF-C、MMP9及其抑制物TIMP-1的表达,并进行统计学分析。结果:VEGF-C、MMP9及其抑制物TIMP-1在宫颈鳞癌Ⅰ、Ⅱ期均为高表达。VEGF-C在宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期和有淋巴转移者的表达率分别为73.8%、85%、100%。MMP9为66.7%、75%、93.3%。TIMP-1为64.3%、60%、66.7%,VEGF-C、MMP9及TIMP-1在浸润间质≥1/2的表达高于<1/2(P<0.05)者;其表达与浸润深度及淋巴结转移相关。结论:VEGF-C与宫颈癌的侵袭和转移密切相关;MMP9及其抑制物TIMP-1与肿瘤的浸润及侵袭转移有关,VEGF-C、MMP9及TIMP-1在宫颈癌转移中发挥了重要作用。

虎杖苷对肾纤维化模型大鼠肾组织中MMP-9和TIMP-1蛋白表达的影响

目的:考察虎杖苷对肾纤维化模型大鼠肾组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)蛋白表达的影响,探讨其延缓大鼠肾纤维化的作用机制。方法:将40只大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、虎杖苷组(100 mg/kg)和贝那普利组(阳性对照,5 mg/kg)。除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管梗阻法制备肾纤维化大鼠模型。术后1 h,各组大鼠灌胃相应药物,每天给药1次。连续给药4周后,检测各组大鼠尿液中β_2微球蛋白(β_2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量和血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量;苏木素-伊红染色观察大鼠肾组织病理改变,并进行评分;免疫组织化学法检测大鼠肾组织中MMP-9和TIMP-1蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠尿液中β_2-MG、NAG含量和血清中BUN、Cr含量均显著升高(P<0.05),并且大鼠肾组织的病理评分和组织中MMP-9、TIMP-1蛋白的表达水平也显著升高(P<0.01)。与模型组比较,虎杖苷组和贝那普利组大鼠肾组织中MMP-9蛋白表达水平持续增高(P<0.01),其余各指标水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);且虎杖苷组与贝那普利组比较大鼠各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:虎杖苷延缓大鼠肾纤维化进程的机制可能与上调大鼠肾组织中MMP-9蛋白表达和下调TIMP-1蛋白表达,升高MMP-9/TIMP-1的比值有关。