MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列多态性分析

目的:分析MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列的特征,了解MNS血型基因的多态性。方法:随机选取无偿献血者500人份离体24 h内的抗凝血各8 ml,以血型血清学方法鉴定MN、Ss、Mia血型。从500例样本中随机选取MNS与Mia血型不同组合的5例样本,使用密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞(PBMC)并提取总mRNA,使用逆转录试剂盒制备cDNA,采用巢式PCR(nested PCR)方法扩增目标片段,切胶回收后分别对GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列进行测序,通过Oligo 6.0软件分析碱基序列。结果:血清学检测得到MN、Ss和Mia表现型,不同个体间的红细胞与抗-Mia血清反应存在凝集强度差异。检测了5例不同表现型组合样本的GYPA、GYPB、GYPE基因mRNA全长序列,1例样本的GYPA mRNA中exon-6完整缺失,其他4例样本的GYPA mRNA全长完整;2例样本的GYPB mRNA中exon-2完整缺失,Mia血型阴性;2例样本的GYPB mRNA全长完整,Mia血型阳性;1例样本的GYPB mRNA中exon-5存在碱基替换;5例样本的GYPE mRNA全长完整。结论:MNS血型相关基因具有明显的多态性,mRNA全长序列的检测为GYPA、GYPB、GYPE基因结构的分析与MNS血型抗原表达的深入研究奠定了基础。

检测MNS抗体性质在血型鉴定及交叉配血中的应用价值

目的探讨检测MNS抗体性质在血型鉴定及交叉配血中的应用价值。方法选取龙岩市第一医院2020年1月—2022年10月经血清学检测存在MNS抗体的70例患者,均接受ABO血型正反定型及交叉配血,分析MNS血型系统(melnick-needles syndrome)抗体性质在血型鉴定及交叉配血中的应用价值。结果经检测MNS抗体特异性结果以抗-M最多,占比为88.57%,而抗-N、抗-S、抗-Mur分别次之,占比为5.71%、4.29%、1.43%;意外抗体以免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)为主,占比为84.29%,其次为免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、IgM+IgG,分别占比为12.86%、2.86%。70例患者中,A型血24例(34.29%);B型血20例(28.57%);O型血13例(18.57%);AB型血13例(18.57%)。结论MNS抗体的患者中,在血清抗体分析上,主要是以抗-M为主,抗体性质则主要以IgM为主;在临床上,可以根据ABO血型是否出现正反定型不符及明确交叉配血结果,并结合实际病情,完善相关的综合性评估结果,可确保对于患者开展输血治疗的准确度,为确保临床输血治疗的安全性,提供相关的支持依据。

健康献血者血浆可溶性糖蛋白A(GPA)在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性及阴性中表达差异的分析研究

目的分析健康献血者血浆中可溶性糖蛋白A(glycoprotein A,GPA)表达量与抗-M及抗-“Mia”抗体的相关性。方法收集2022年2月9日~2023年2月15日的健康献血者血浆:不规则抗体阴性的NN型(Ⅰ组,n=118)与MM型(Ⅱ组,n=51),抗-M抗体阳性的NN型(Ⅲ组,n=145)与抗-“Mia”抗体阳性的随机型(Ⅳ组,n=87),分别检测4组人不同个体血浆中GPA的含量,t检验分析GPA表达量的差异。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GPA平均含量分别为:9.941±0.252,10.97±0.256,5.139±0.129和4.28±0.139ng/ml。Ⅰ组与Ⅱ组的GPA平均含量较高,Ⅲ组与Ⅳ组的GPA平均含量较低,显示GPA平均含量在不规则抗体阴性(Ⅰ组与Ⅱ组)的血浆中较高,在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性(Ⅲ与Ⅳ组)的血浆中较低,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论含有抗-M与抗-“Mia”抗体的健康献血者血浆中GPA含量明显低于抗体阴性的群体。该研究结果为深入探讨血浆中GPA是否有中和抗-M与抗-“Mia”抗体的能力,提高疾病诊断与安全输血打下基础。

先天性心脏病患儿血型及抗体分布研究

目的:分析先天性心脏病患儿ABO、Rh、MN血型和抗体分布规律,更精准安全的为临床提供血液。方法:收集2023年1月至2023年11月,来我院行先天性心脏病手术患儿病历资料和备血标本,对备血标本进行ABO血型、Rh(C、c、D、E、e抗原)血型、MN血型和抗体筛选检测,抗体筛选阳性患儿进行抗体特异性鉴定。结果:ABO血型分布频率特征为O型(32.1%)>B型(29.2%)>A型(24.9%)>AB型(13.8%),其中O型患儿531例在ABO血型中所占比例最高;Rh血型抗原阳性率为D(99.4%)e(93.9%)C(88.5%)c(62.9%)E(50.5%),Rh D阳性患儿Rh表型分布情况为Ccee(25.5%)CcEe(22.9%)CCee(18.3%)CCEe(16.8%)ccee(5.5%)ccEe(5.1%)CCEE(2.0%)ccEE(0.7%),Rh D阴性患儿最常见的分型是ccee(占比30%);MN血型M抗原阳性率78.4%,N抗原阳性率71.8%,MN血型构成MN(50.2%)MM(28.2%)NN(21.6%);不规则抗体筛查阳性率为1.3%,最常见的是抗-M(64.3%)。结论:临床上先天性心脏病患儿最常见的血型为O型、Rh D阳性Ccee表型、MN型,而抗-M是最常见的不规则抗体。

MN血型GYPA基因测序方法的建立及应用于汉族人群检测

目的建立适合检测中国汉族人群MN血型GYPA基因的测序技术,用于中国汉族人群MN血型基因的分子遗传背景及遗传多态性的研究。方法根据GenBank的NG-007470基因参照序列,自行设计GYPA基因第1—7外显子共7对引物,以随机选取的55份中国汉族人群标本的DNA为检材,探索最佳反应体系与PCR扩增条件,同时扩增GYPA的第1—7外显子,含括了GYPA基因的全长外显子序列。使用PrismTM ABI3730XL DNA测序仪进行碱基序列分析,以Oligo分析软件分析碱基序列。检测结果的可靠性通过血型血清学、PCR-SSP基因分型方法进行验证。结果应用该方法可以在同一扩增条件下同时扩增GYPA基因的全部外显子,同步检测到GYPA基因共7个外显子的碱基序列,55份标本的基因测序结果与血清学、PCR-SSP基因分型结果完全一致。结论本研究的GYPA基因测序方法准确、可靠,适用于中国汉族人群的GYPA基因测序。

广东省深圳地区汉族人群MN血型表现型的特点及基因频率调查

目的探讨深圳地区汉族人群MN血型表现型的特点及分布情况。方法以试管法检测246倒汉族人的红细胞M，N血型抗原，流式细胞术定量检测血清学凝集反应有明显差异的样本，分析其红细胞上抗原数量的差异；并进行基因型鉴定。结果试管法定量检测中发现抗原、抗体反应凝集强度存在差异，以流式细胞术验证单个红细胞M抗原的荧光强度同样存在强弱之分，同时以SSP—PCR基因分型技术鉴定血型特异性，基因分型结果与血清学分析结果相符。深圳地区汉族人群中M，N基因频率分另日为0．4756，0．5244。结论深圳地区汉族人群MN血型分布特征基本符合中国汉族人群的分布特征，红细胞M，N血型血清学反应的个体差异是否与红细胞表面抗原数量或质量相关有待进一步探讨，同时增加样本数量对该血型系统遗传多态性进行研究。

中国汉族人群MN血型相关基因gypa分子多态性的研究

本研究探讨中国汉族人群MN血型相关基因gypa的多态性。随机选取中国汉族人群中无血缘关系的无偿献血者202人份,以血清学方法鉴定样本的MN血型表现型。根据GenBank的NG-007470基因参照序列设计gypa第2外显子引物,对202人份的DNA进行PCR扩增,同时对扩增产物进行直接测序。结果表明:所有样本的gypa第2外显子第1、56位碱基均发生了变异,其中MN表现型杂合子主要以1A>C、22T/C、34A/G、35T/G、56T>C的形式存在;MM表现型纯合子主要以1A>C、22C、34G、35T、56T>C的形式存在;NN表现型纯合子主要以1A>C、22T、34A、35G、56T>C的形式存在。结论:中国汉族人群MN血型相关基因的多态性主要由gypa第2外显子的第1、22、34、35、56共5个位点的多态性所决定,其中第1、56位为非功能性SNP位点。

Rh和MNS血型系统临床输血患者不规则抗体的分布特点及意义

目的分析Rh和MNS血型系统临床输血患者不规则抗体的分布特点及意义。方法调查试验选取2014年1月至2019年1月采用微住凝胶卡方法对55789例临床输血患者进行不规则抗体筛查,统计不规则抗体筛查阳性患者,并采用谱细胞以及相关试剂对不规则抗体的特异性进行鉴别,同时还重点分析Rh和MNS系统血型中不规则抗体的分布特点以及相关疾病占比情况。结果55789例临床输血患者中共抗筛阳性患者255例,阳性率0.46%。255例患者中,男、女占比分别为35.69%、61.18%。Rh和MNS血型系统占比分别为44.71%、18.04%。在Rh血型系统中,不规则抗体从高到低的排序分别为抗-Ec(27.84%)、抗-E(10.98%)、抗-Ce(3.14%)、抗-D(1.18%)、抗-C(0.78%)、抗-Dc(0.78%)。在MNS血型系统中全部为抗-M,占比为18.04%。在78例无输血史、妊娠史患者中,Rh和MNS血型系统占比分别为44.87%、30.77%,Rh血型系统中不规则抗体从高到低的排序分别为抗-Ec(28.21%)、抗-E(14.10%)、抗-Ce(2.56%),MNS血型系统全部为抗-M,占比为30.77%。抗筛阳性患者的疾病分布情况从高到低的排序为肿瘤疾病(26.72%)、内科疾病(20.24%)、外科疾病(15.79%)、血液疾病(12.96%)、肝胆疾病(11.74%)、心血管疾病(5.67%)、妇科疾病(4.45%)、灼伤类疾病(2.43%)。结论临床输血患者中,其主要以Rh和MNS血型系统为主,Rh血型系统的不规则抗体主要以抗-Ec、抗-E为主,而MNS血型系统均为抗-M,不规则抗体筛查对于临床输血的安全性具有重要的价值和意义,输血科和临床应给予高度的关注和重视。

中国人群部分GPA分子结构的改变对MN血型抗原表达影响的研究

目的通过对GPA相关基因GYPA部分intrion-1、intrion-2及exon-2区域的研究,探讨中国人群部分GPA肽链中氨基酸的改变与MN血型抗原表达的相关性。方法在无血源关系的部分中国无偿献血者人群中鉴定MN血型,以血清学方法分别与抗-M、抗-N反应,随机选择凝集强度上无明显差异的150例样本提取DNA,应用自主设计的一对特异性引物直接检测以上样本的exon-2及部分intron-1、intron-2的碱基序列,分析GPA分子中氨基酸的改变与M、N血型抗原特异性表达之间的关系。结果通过基因测序,发现了GPA肽链中4个座位的氨基酸发生了改变,此改变未对MN血型抗原表达造成影响,但可以把M、N血型基因细分为:MGMTMGMG,MTMT,N1N1、N1N2、N2NV,MGN1,MGN2、MGNV、MTN1、MTN2、MTNV基因型。结论 GPA肽链中部分分子结构的改变,并未影响MN血型抗原的表达,这一发现可以帮助研究中国人群GPA分子特征与MN血型抗原表达间的关系,并为追踪中国人群血型糖蛋白家系的分子生物学多态性奠定基础。

华北地区汉族的Lewis、ABO、MN、Rh、P等血型系统和ABH分泌型的分布

调查了原籍华北地区汉族的ABO、Lewis、MN、Rh、P等血型系统和ABH分泌型的分布,结果表明:O型(33.44％)和B型(29.38％)较多;N型(27.97％)略多于M型(27.65％);Le(a+)型的频率很高(24.17％)。在94人中还发现四名Le(a+)型属于ABH分泌型,且都属于分泌A或B血型物质的类型,无一例为分泌H血型物质的类型;Rh(D)阴性率仅0.3％,CCDee和CcDE型占75％以上;P_1(+)型占39.1％;ABH分泌型占72％,低于全国其他民族中已知的分布。

序列特异性引物PCR法检测MN血型基因型

目的 建立MN血型系统基因分型的方法 ,检测人群中MN基因的频率。方法 用快速盐析法抽提样本DNA ,序列特异性引物PCR法检测MN基因。结果 115例汉族人群中MM基因型为 2 5例 ,MN基因型为 6 0例 ,NN基因型为 30例。M基因频率为 0 .4 78,N基因频率为 0 .5 2 2。结论 该方法可以检测MN血型基因型。

泰兴地区人群中MN及P血型表型分布频率调查

目的了解本地区汉族人群中MN及P血型系统的表型分布频率。方法试管法检测1 013名大样本健康体检者红细胞上M、N、P1血型抗原,根据红细胞凝集与否判定被检者MN及P血型表型。结果男性501名,其中M表型133名、N表型211名、MN表型157名,P1型192名、P2型309名;女性512名,M表型126名、N表型212名、MN表型174名,P1型183名、P2型329名。结论本地区汉族人群中MN血型的表型分布频率依次为N、MN和M,P血型中P2型分布频率明显高于P1型,MN及P血型系统中各表型分布无性别间差异(P>0.05)。

MN血型M基因单核苷酸多态性在中国北京汉族人群中分布状态的初步调查

目的MN血型M基因的第一内含子中有一个G/T颠换位点,检测该单核苷酸多态性在中国汉族人群中分布状态。方法在104名中国北京地区汉族人群中,使用PCR-ASP方法进行MM,MN和NN基因型检测以及使用PCR-RFLP方法进行MGMG,MTMT,MGMT,MGN,MTN和NN基因型检测,并进行了有关统计学计算。结果MG,MT和N等位基因的频率分别为:0.414,0.091和0.495。杂合度(H):0.5753,多态信息容量(PIC):0.4844。结论单核苷酸多态性作为第三代遗传标记,受到广泛关注。我们检测出的我国北京地区汉民族MG等位基因的频率低于日本人(0.547),而MT等位基因频率高于日本人(0.040)。在该方面的研究提供了初步数据资料。

人类红细胞MN血型中抗-M与GYPA基因表达的相关性

目的研究人类红细胞MN血型系统中抗-M的产生与相关基因GYPA表达的相关性,同时揭示M抗原的表达与抗-M产生之间的关系。方法选择无偿献血者和临床中发现的血浆中含有IgG、IgM或两者共存的16例抗-M血液样本,以血清学及分子生物学方法对样本进行MN血型检测,应用自行设计的一对特异性引物检测MN血型相关基因GYPA第二外显子的碱基序列。结果 16例样本中12例表现型为NN型,2例为MN型,2例为MM型。基因测序结果与GenBank参比序列比对,未发现突变碱基,血型表现型的基因定型与血清学定型相一致,经过谱细胞鉴定,该16例患者的血浆中全部携带抗-M抗体。结论人类红细胞MNS血型中抗-M的产生与M抗原是否存在没有必然关联,与相关基因GYPA的表达也无明显关联。

中国人群MNS血型低频抗原Vr,Mta,Ria,Cla,Nya,Or,Osa,SD和Mit基因座多态性调查研究

目的 调查中国人群MNS血型低频抗原Vr,Mta,Rr,CP,Nva,Or,Osa,SD和Mit基因座碱基变异点,为MNS血型低频抗原的研究、临床输血与免疫血液病的诊断与治疗打下基础.方法 随机选取深圳市血液中心无偿献血人群500人份提取血样DNA,应用自主设计的引物直接测序分析GYPA的A3,GYPB的B4碱基序列,分析中国人群MNS血型低频抗原Vr,Mta,Rr,CP,Nya,Or,Osa,SD和Mit基因座的突变位置.结果 从GYPA的A3,GYPB的B4中分析了MNS血型低频抗原Vr,Mta,Rr,CP,Nya,Or,Osa,SD和Mit基因突变位点,鉴定了相关抗原基因的变异点分别为：GYPA的A3中197,230,226,138,148和217;GYPB的B4中173和161.结论 MNS血型抗原Vr,Mta,Rr,CP,Nva,Or,Osa,SD和Mit虽为低频抗原,但在免疫条件下同样会引起输血反应与严重的新生儿溶血病（HDN）,使用基因检测的方法可以解决低频抗体血清的短缺,为临床输血与免疫性疾病诊断以及人类群体遗传学研究打下基础.

海南岛地区各民族ABO、MN血型之研究

本文提供海南岛地区各民族血型资料。血型分析认为该岛各民族处于遗传平衡状态,其相互间是婚配隔离的。通过ABO血型的分布,重点讨论了黎族与仲家人、傣族的遗传关系。并从MN血型的分布特点,探讨我国南方民族与南亚地区的人种联系。

编码MNS血型抗原的GYP基因组研究进展

MNS血型系统包括大约40多种抗原,其中最为重要的是M、N、S、s 4种抗原。M和N抗原决定簇位于红细胞膜的血型糖蛋白A(GPA)上。GPA是一种红细胞上的主要唾液酸糖蛋白。S和s抗原决定簇位于红细胞膜上血型糖蛋白B(GPB)的唾液酸糖蛋白上。编码GPA的基因GYPA和编码GPB的基因GYPB位于4号染色体的长臂,两者具有95%的同源序列,同时又与不表达产物的同源基因GYPE紧邻,构成GYPA-GYPB-GYPE结构,为杂交基因的形成创造了条件。这些杂交基因的表达产物具有不同的抗原性。本综述简要介绍GYP基因组的分子基础,特别对Miltenberger抗原系统杂交基因的多态性做了较为深入的阐述。

GYP mRNA基因可变剪接对MNS血型糖蛋白GPA和GPB在细胞表面定位的影响

目的分析MNS血型相关基因GYPA、GYPB mRNA剪接体多态性,探讨各种剪接体编码的GPA和GPB蛋白异构体的亚细胞定位与MNS血型抗原表达的相关机理。方法随机选取无偿献血者10份血液,提取外周血总mRNA,反转录为cDNA后,以巢式PCR方法扩增GYPA、GYPB基因的开放阅读框并进行Sanger测序,碱基序列与GYPA(NCBI:NM_002099)、GYPB(NCBI:NM_002100.5)比对。得到的GYPA、GYPB开放阅读框的野生型及各种剪接异构体编码序列后,通过融合PCR技术分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码基因融合并克隆后转染到HEK293细胞进行过表达,通过聚焦激光扫描显微镜监测GPA-GFP和GPB-GFP融合荧光蛋白的亚细胞定位。结果2例标本的GYPA mRNA中缺失外显子1与外显子2,预测的GPA蛋白异构体缺失2~26位氨基酸,GYPB mRNA全长序列完整。6例标本的GYPA mRNA完整,GYPB mRNA中缺失外显子2,预测的GPB蛋白异构体缺失13~45位氨基酸,其他外显子序列完整。1例标本的GYPA mRNA完整,GYPB mRNA的外显子5中364~385位碱基被AG替换,显示氨基酸信号肽截短。其他标本的GYP mRNA全长序列完整。GP-GFP融合蛋白的荧光信号的观察结果表明,根据各RNA剪接体克隆表达的GPA、GPB糖蛋白异构体均可表现出细胞膜表面定位分布,其中的一些可变剪接导致蛋白异构体发生不同程度的细胞内弥散,影响蛋白在细胞表面分布的速度和比例,可能构成MNS抗原强弱的原因之一。结论GYP mRNA剪接体有明显多态性特征,但GYP mRNA的部分片段缺失不影响其编码的蛋白异构体在细胞表面的定位分布,能够确保其展示MNS抗原特性。

ABO、MN血型及其与测量体征关系的初步探讨

本文提供了男、女两性共404人ABO、MN血型各表现型的35个体质特征测量数据,对血型和测量体征的关系进行了初步讨论。统计分析表明,不同血型群体的某些单个体征平均值之间有显著差异。对所调查的35个体征作整体分析,可见男性MN系统和女性ABO、MN系统各血型群体平均值之间差异显著。在MN血型系统,MN型群体的测量体征平均值低于M型和N型与MN基因型的杂合状态有密切关系。本文还分析了4个民族的血型资料,表明MN血型在ABO血型系统是随机分布的。