人类红细胞MN血型中抗-M与GYPA基因表达的相关性

目的研究人类红细胞MN血型系统中抗-M的产生与相关基因GYPA表达的相关性,同时揭示M抗原的表达与抗-M产生之间的关系。方法选择无偿献血者和临床中发现的血浆中含有IgG、IgM或两者共存的16例抗-M血液样本,以血清学及分子生物学方法对样本进行MN血型检测,应用自行设计的一对特异性引物检测MN血型相关基因GYPA第二外显子的碱基序列。结果 16例样本中12例表现型为NN型,2例为MN型,2例为MM型。基因测序结果与GenBank参比序列比对,未发现突变碱基,血型表现型的基因定型与血清学定型相一致,经过谱细胞鉴定,该16例患者的血浆中全部携带抗-M抗体。结论人类红细胞MNS血型中抗-M的产生与M抗原是否存在没有必然关联,与相关基因GYPA的表达也无明显关联。

健康献血者血浆可溶性糖蛋白A(GPA)在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性及阴性中表达差异的分析研究

目的分析健康献血者血浆中可溶性糖蛋白A(glycoprotein A,GPA)表达量与抗-M及抗-“Mia”抗体的相关性。方法收集2022年2月9日~2023年2月15日的健康献血者血浆:不规则抗体阴性的NN型(Ⅰ组,n=118)与MM型(Ⅱ组,n=51),抗-M抗体阳性的NN型(Ⅲ组,n=145)与抗-“Mia”抗体阳性的随机型(Ⅳ组,n=87),分别检测4组人不同个体血浆中GPA的含量,t检验分析GPA表达量的差异。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GPA平均含量分别为:9.941±0.252,10.97±0.256,5.139±0.129和4.28±0.139ng/ml。Ⅰ组与Ⅱ组的GPA平均含量较高,Ⅲ组与Ⅳ组的GPA平均含量较低,显示GPA平均含量在不规则抗体阴性(Ⅰ组与Ⅱ组)的血浆中较高,在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性(Ⅲ与Ⅳ组)的血浆中较低,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论含有抗-M与抗-“Mia”抗体的健康献血者血浆中GPA含量明显低于抗体阴性的群体。该研究结果为深入探讨血浆中GPA是否有中和抗-M与抗-“Mia”抗体的能力,提高疾病诊断与安全输血打下基础。

热解离试验合并ELISA检测微量血痕的MN血型

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)代替指示红细胞检测血痕热解离液中的微量血型抗体,通过酶促反应判定血痕的血型。并根据血痕抗N侧反应的强弱区别MN型血痕的抗N反应和M型血痕的“类N”反应。实验证明用ELISA检测溶液中微量MN血型抗体比用指示红细胞作凝集反应更为敏感。共检测血痕625例。九年以内的N型血痕、3个月以内的M型血痕、2个月以内的MN型血痕,检测的正确率为100％。

抗人M和N型GPA特异性单克隆抗体的制备和鉴定

目的:为了建立“血型糖蛋白A(GlycophorinA,GPA)突变分析”技术。方法:采用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。结果:获得3株分泌抗GPA特异性McAb的杂交瘤细胞系,这3株McAb均属于IgG2a亚类、Kappa型轻链,其中2株特异性抗M型GPA,另外1株特异性抗N型GPA。3株McAb所针对的抗原决定簇位于GPA多肽链N末端第1～39位氨基酸之内,抗体与其结合依赖糖链的完整性。结论:制备的McAb可用于“GPA突变分析”的研究,也可以作为血型试剂在血液免疫学、遗传学和法医学的领域中应用。

Rh和MNS血型系统临床输血患者不规则抗体的分布特点及意义

目的分析Rh和MNS血型系统临床输血患者不规则抗体的分布特点及意义。方法调查试验选取2014年1月至2019年1月采用微住凝胶卡方法对55789例临床输血患者进行不规则抗体筛查,统计不规则抗体筛查阳性患者,并采用谱细胞以及相关试剂对不规则抗体的特异性进行鉴别,同时还重点分析Rh和MNS系统血型中不规则抗体的分布特点以及相关疾病占比情况。结果55789例临床输血患者中共抗筛阳性患者255例,阳性率0.46%。255例患者中,男、女占比分别为35.69%、61.18%。Rh和MNS血型系统占比分别为44.71%、18.04%。在Rh血型系统中,不规则抗体从高到低的排序分别为抗-Ec(27.84%)、抗-E(10.98%)、抗-Ce(3.14%)、抗-D(1.18%)、抗-C(0.78%)、抗-Dc(0.78%)。在MNS血型系统中全部为抗-M,占比为18.04%。在78例无输血史、妊娠史患者中,Rh和MNS血型系统占比分别为44.87%、30.77%,Rh血型系统中不规则抗体从高到低的排序分别为抗-Ec(28.21%)、抗-E(14.10%)、抗-Ce(2.56%),MNS血型系统全部为抗-M,占比为30.77%。抗筛阳性患者的疾病分布情况从高到低的排序为肿瘤疾病(26.72%)、内科疾病(20.24%)、外科疾病(15.79%)、血液疾病(12.96%)、肝胆疾病(11.74%)、心血管疾病(5.67%)、妇科疾病(4.45%)、灼伤类疾病(2.43%)。结论临床输血患者中,其主要以Rh和MNS血型系统为主,Rh血型系统的不规则抗体主要以抗-Ec、抗-E为主,而MNS血型系统均为抗-M,不规则抗体筛查对于临床输血的安全性具有重要的价值和意义,输血科和临床应给予高度的关注和重视。

母婴ABO血型不合合并IgG抗-M抗体引起新生儿溶血病1例

目的分析ABO血型不合合并低效价免疫球蛋白G(IgG)抗-M抗体引起的新生儿溶血病的临床特点。方法报告ABO血型不合合并低效价IgG抗-M抗体引起的新生儿溶血病(HDN)1例,病例样本为2017年11月河北省血液中心接收的临床病人标本,对病儿及其父母进行血型鉴定,利用抗体鉴定谱细胞检测病儿及其母亲血清、病儿红细胞放散液中存在的抗体,并进行抗体效价测定。结果母亲与病儿血清及放散液中均含有抗-M抗体且病儿合并ABO-新生儿溶血病,即ABO-HDN,母亲血清在盐水介质测得免疫球蛋白M(IgM)抗-M效价为64;母亲血清经2-巯基乙醇(2-Me)处理后,抗人球蛋白试验测得IgG抗-M效价为4。结论IgG抗-M抗体引起的新生儿溶血病极其少见,但极易造成严重的新生儿溶血病,在临床产前筛查时应给予重视。

Jk(a-b-)表型和基因多态性分析方法的建立及其应用

目的建立筛检Jk(a-b-)表型及其基因分型的方法,探讨Jk(a-b-)形成的分子机制。方法采用红细胞在2mol/L尿素中溶血试验筛选20000名无偿献血者的Jk(a-b-)表型;以IgM型单克隆抗-Jka和-Jkb确认Jk(a-b-);PCR-SSP对Kidd血型做基因分型;PCR扩增JK基因4-11外显子及侧翼内含子,并对扩增产物进行测序。结果在2mol/L尿素溶血试验中,除1例红细胞未发生溶血,初步认定为Jk(a-b-)型外,其他19999例标本均发生溶血。该例不溶血的Jk(a-b-)型与单克隆抗-Jka和-Jkb不发生凝集反应,该Jk(a-b-)表型个体的JK基因在第5内含子3'端拼接接受位点g突变为a,携带纯合子的IVS5-1g>a基因突变,第7外显子499A>G杂合,588A>G突变。结论尿素溶血初筛、单克隆抗体确认、基因分型和测序方法可以用于Kidd系统Jk(a-b-)血型的表型和分子机制研究。

IgA类鼠抗人A血型单抗的研制和临床应用

应用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术，以Ａ血型物质ＭＳＳ１０％２×（Ａ１）为抗原，经ＰＥＧ细胞融合，获得两株分泌ＩｇＡ类鼠抗人Ａ血型单抗杂交瘤细胞，细胞培养上清液效价为１０２４～２０４８，亲和力２～３ｓ。其中２Ｈ１０Ｅ１１杂交瘤细胞经血凝特异性试验、血凝抑制试验、吸收放散试验、红细胞标准谱细胞试验，表明２Ｈ１０Ｅ１１单抗仅对Ａ血型红细胞特异。２Ｈ１０Ｅ１１细胞置液氮中贮存３年，复苏传代后分泌抗体能力不变。单抗置５６℃水浴３０ｍｉｎ，－２０℃和３７℃反复冻融３次，效价不变。临床试用近百万人次，无一例错型，准确率１００％。证明可以替代标准血清，用于临床血型定型。

人MNS_s血型系统抗N单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术,将 NS-1细胞与完整的红细胞免疫的 BALB/c 鼠脾细胞融合,获得MNS_s 血型系统分泌 IgG 抗 N 抗原的杂交瘤细胞株——10D_6。细胞培养上清效价1∶1024,亲和力7秒,经过8个月以上的连续传代培养,细胞增殖良好,性状稳定,持续分泌高效价,高亲和力,抗N 抗原的单克隆抗体。可作为血型检测的又一标准试剂。

人O型外周血淋巴细胞制备人单克隆抗-A细胞株

目的以正常O型人外周血淋巴细胞为实验对象,制备能稳定分泌人单克隆抗-A或抗-B的杂交瘤细胞株,在本实验室建立人血型单克隆抗体制备流程。方法使用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs),从狨猴B95-8细胞培养上清收获EB病毒(Epstein-Barr virus),用于转化B淋巴细胞,血清学微量板法筛选能够分泌目标抗体的细胞孔。显微镜下挑选分离单个克隆的细胞团,分泌特异性抗体的转化细胞与SHM-D33瘤细胞进行融合,经HOTD选择性培养,血清学筛选,得到分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。结果从随机O型个体的外周血淋巴细胞,成功构建持续稳定分泌人源IgM单克隆抗-A的细胞株。结论本研究提供一种可行的技术路线,为从人外周血淋巴细胞制备有诊断和筛选价值的人源血型单克隆抗体细胞株奠定基础。

抗人A型红细胞单克隆抗体的研制及初步应用

本研究在用人A型红细胞悬液免疫BaIb/C小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞融合屡次失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株:3B_2、2H_2、8C_3细胞株。这些杂交瘤细胞可持续分泌抗A单克隆IgM类抗体。

抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的： 制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B（GPA/GPB）的单克隆抗体（mAb）, 并进行特性鉴定.方法： 用人“O”型血红细胞作为免疫源, 免疫BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb, 用谱红细胞筛选阳性克隆; 采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价.分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位.用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性.结果： 获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株.杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2^-4 ～1×2^-8之间, 腹水mAb的效价在1×2^-7 ～1×2^-12之间.除1株mAb 1C1C9C4为IgM外, 其他7株mAb均为IgG.通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局, 结合mAb抗原表位的检测, 确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位; 另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11 与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示, 均可结合GPA、GPB蛋白.结论： 成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株, 可用于MNSs血型系统的研究及鉴定, 并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础.

抗人A型红细胞单克隆抗体的研究及其初步应用

在用人A型红细胞悬液免疫的Balb/c小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合屡遭失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株,即为:3B_2、3H_2、8C_3细胞株。3株抗人A型红细胞单克隆抗体3B_2、3H_2、8C_3血清学检验和应用结果表明:3株单抗均可作为血型诊断试剂,可用以取代人源标准血清。

影响抗A杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素

目的研究影响抗 A杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素。方法通过试管法和玻片法检测抗 A抗体的效价和亲和力。结果 0 .2 5 m mol/ L、0 .5 mm ol/ L丁酸钠和 0 .0 1U / ml胰岛素能明显提高抗 A抗体的效价和亲和力 ;HAT重筛选可使部分小体积细胞迅速死亡 ,抗 A抗体的效价和亲和力明显提高。结论丁酸钠、胰岛素和 HAT重筛选可提高抗

A血型单克隆抗体的抗原结合部位结构多样性研究

应用杂交瘤技术，以Ａ型红细胞，Ａ１血型物质ＭＳＭ（Ａ１）和Ａ－ＲＢＣ＋ＭＳＭ（Ａ１）为免疫原，制备了一组抗人Ａ血型单克隆抗体：Ａ１２１８，Ｂ５７，ＤＥ９２３－Ｇ８，Ｄ２８６－Ｅ１２经Ｔａｋａｔｓｙ微量血细胞凝集试验证明：这组单抗仅能凝集Ａ１，Ａ２及ＡＢ型红细胞，不能凝集Ｂ，Ｏ型红细胞．采用ＥＬＩＳＡ定量抑制试验法，精确测定了它们抗原结合部位的结构，互补于Ａ活性寡糖。Ａ１２１８互补于具有双岩藻糖结构的Ａ活性五糖（Ａ－Ｐｅｎｔａ）；Ｂ５７，ＤＥ９２３－Ｇ８互补于具有单岩藻糖结构的Ａ活性六糖（Ａ－Ｈｅｘａ）；而Ｄ２８６－Ｅ１２则互补于具有单岩藻糖的Ａ活性四糖（Ａ－Ｔｅｔｒａ）．结果表明：血凝特异性相同的抗Ａ单抗，其抗原结合部位的结构可呈现多样性。即Ａ活性寡糖的糖基组成数目和含有岩藻糖数目均可不相同，各种抑制剂对不同单抗的抑制作用强弱也不相同。

IgA类单克隆抗体血型定型试剂研制和应用

目的研制IgA类单克隆抗体血型定型试剂。方法根据新生物制品注册和《中国生物制品规程》等有关要求,筛选合适细胞株,建立生产工艺,对中试产品进行检定和临床试验。结果研究、选择了2株细胞株,建立了经济、实用的生产工艺,中试和正式生产的产品所有指标均达到或超过国家标准,通过国家法定检定,临床应用1亿人份以上,没出现血型错判或误判。结论研制成功国际唯一的IgA类单克隆抗体血型定型试剂。

抗人A型红细胞ZMC_9单克隆抗体的纯化及理化性质

本文应用葡聚糖凝胶G-200柱层析和聚丙烯酰胺凝胶板状电泳,将细胞培养上清液及小鼠腹水中的单克隆抗体分离提纯,并对它的理化性质进行了研究.结果表明:①ZMC_9单克隆抗体(小鼠IgM)分子量为871000道尔顿.②纯化单克隆抗体在56℃加热5 min,即失去抗体活性,而未经纯化的单克隆抗体即使加热30min,抗体活性也毫无损失.③纯化单克隆抗体在pH 6～8环境中活性不变,pH超过8.0时活性有所下降,而未经纯化的单克隆抗体在pH 6～10范围内仍表现有活性.④将试剂冻干或加叠氮钠4℃保存,效价至少可维持一年以上.

单克隆抗体斑点ELISA快速检测血痕ABO血型

本文利用酶标记单克隆抗A、抗B抗体进行直接斑点ELISA检测血痕ABO血型。此法可检测出含量相当于0.005μl的全血,整个实验过程仅需1.5小时。对48份血痕标本均能正确鉴定。与常规方法相比,具有快速、简便、灵敏等特点,有一定的实用价值。

单克隆抗-A(B)试剂质量鉴定与分析

目的 :检测国产单克隆抗 A(B)试剂质量 ,观察对 ABO血型检测的影响。方法 :测定四个厂家单克隆抗 - A(B)试剂效价、亲和力等 ,并检测稀有的 ABO亚型红细胞与单克隆试剂反应情况。结果 :合格的仅有一个厂商的产品 ,但其仍有漏检稀有的 ABO亚型现象 ,另有一家仅在距出产 2个月内合格 ,其它均不合格原因主要为效价、亲和力。结论 :目前临床实验室所用的单克隆抗 - A(B)试剂 ,可能存在一些质量问题 ,应定期测定其效价、亲和力 ,血型鉴定必须用 ABO反定型试验复核。

人类A、B抗原单克隆抗体的研制和初步应用

作者用人类A、B型红细胞及A、B型分泌型唾液免疫8周龄的BALB/C小鼠,用经免疫的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,用血凝法筛选出分泌抗A抗体和抗B抗体的细胞株各3株。经一年多的传代,仍然能稳定地分泌抗A、抗B抗体,抗体特异性专一,培养上清液效价能达到2048倍,并初步应用于血液及体液(斑)的检验。