MN/CA9蛋白在富糖原型肾细胞癌中的表达及其意义

目的:研究MN/CA9蛋白在富糖原型肾细胞癌中的表达。方法:对正常肾组织、肾损伤、肾细胞癌及非肾性富糖原癌中MN/CA9蛋白的表达进行分析。结果:仅在肾细胞癌上可见MN/CA9蛋白的表达,而其它切片中未见表达。结论:MN/CA9蛋白表达可以作为肾细胞癌,尤其是富糖原型肾细胞癌的一种肿瘤标志物,以辅助其早期诊断。

逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因的表达

目的:克隆、分析ICR小鼠MN/CA9基因序列,并检测MN/CA9基因在ICR小鼠各组织中的表达。方法:分别取ICR小鼠小肠、肝、肾、脾、胃、胸腺、心脏、卵巢、肺、胰腺、肌肉、皮肤、子宫和膀胱新鲜组织,采用胍尼啶异硫氢酸呱酚氯仿提取法(GIT)提取总RNA。合成cDNA的第1链和第2链,连接EcoRⅠ载体,EcoRⅠ末端磷酸化,XhoⅠ消化,将cDNA构建到ZAPexpressvector进行包装、种植培养,筛选、切取噬菌体,使用引物扩增后进行DNA序列分析。用逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因在上述组织中的表达。结果:使用人类MN/CA9基因片段做探针,用放射性同位素32P标记探针,筛选1·47×103大肠埃希菌落,杂交后发现一阳性cDNA信号,序列测定确定其含1671bp核苷酸序列(已在GenBank登录,登录号AB086322),这个序列与人类的MN/CA9(基因序列号Z54349)有69·1%的同源性。在引物P521-P1193区间,MN/CA9基因在小鼠小肠、子宫、肌肉、胰腺、心脏、肺、胸腺、脾、肾、卵巢、胃和膀胱组织表达均较强,在皮肤和肝脏不表达。结论:MN/CA9基因在ICR小鼠组织中的表达与人类基本相同,可以用ICR小鼠进行MN/CA9基因的研究。

宫颈癌特异抗原MN/CA9的多糖蛋白表达载体的构建及鉴定

目的克隆宫颈癌MN/CA9抗原的多糖蛋白cDNA,并构建表达载体。方法从宫颈癌HeLa细胞中提取总RNA,RT-PCR法扩增MN/CA9抗原的多糖蛋白cDNA,将其插入载体pCA13,转化大肠杆菌JM109,构建MN/CA9抗原的多糖蛋白表达载体pCA13-MN。酶切及测序鉴定。结果酶切及序列分析结果证明,目的基因成功克隆入载体。结论成功构建了MN/CA9多糖蛋白表达载体。

肾细胞癌MN/CA9蛋白的表达及其生物学意义

目的 :研究MN/CA9蛋白的表达和肾细胞癌的关系 ,探讨MN/CA9蛋白在肾细胞癌诊断研究中的应用。方法 :应用免疫组化和免疫印迹的方法 ,对正常肾组织、良性肾损害和肾细胞癌组织的MN/CA9蛋白的表达进行了分析。结果 :正常人肾组织和良性肾损害均为MN/CA9阴性 ,而在 30例肾癌中却有 2 8例为MN/CA9阳性 ,尤其是 2 6例富糖原型RCC均呈现MN/CA9强阳性。结论

MN/CA9基因检测与肾细胞癌的诊断

目的 探讨MN CA9基因的检测在诊断肾细胞癌 (RCC)中的价值。方法 本组共有 70例病人 (无临床转移的RCC病人 4 2例 ,有转移的RCC病人 3例 ,其他肾脏疾病病人 2 5例 ) ,采用RT PCR方法检测癌组织、正常肾组织及血液和尿液中MN CA9基因的表达。结果 4 2例RCC病人的癌组织中 38例检测到MN CA9基因的表达 ,其中16例外周血中有MN CA9基因表达 ,6例尿液中检测到该基因 ,3例已有转移病人中 2例血液有该基因表达 ,1例尿液中有表达 ,而其他肾脏疾病的 2 5例肾组织中仅 1例有MN CA9的表达 ,外周血及尿液中未检测到该基因。结论 MN CA9基因是RCC病人的一个有诊断意义的生物指标 。

MN/CA9基因检测与肾细胞癌的意义

目的 :探讨MN/CA9基因的检测在诊断肾细胞癌 (RCC)中的价值。方法 :对无临床转移的RCC患者 4 2例 ,有转移的RCC患者 3例 ,其他肾脏疾病患者 2 5例 ,采用RT PCR方法检测癌组织 ,正常肾组织及血液和尿液中MN/CA9基因的表达。结果 :4 2例无临床转移的RCC患者的癌组织中 38例检测到MN/CA9基因的表达 ,其中 1 6例外周血中有MN/CA9基因表达 ,6例尿液中检测到该基因 ;3例已有肺转移患者中 2例血液有该基因表达 ,1例尿液中有表达。而其他肾脏疾病的 2 5例肾组织中仅 1例有MN/CA9的表达 ,外周血及尿液中未检测到该基因。结论 :MN/CA9基因是RCC患者的一个有诊断意义的生物指标 。

MN／CA9和Ep-cam基因检测在良恶性胸腔积液鉴别中的价值

目的探讨MN／CA9和Ep—cam基因检测对良、恶性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法选择35例恶性胸腔积液（MPE）和30例良性胸腔积液（BPE），采用SYBRGreenIFQRT—PCR检测胸水沉淀细胞中MN／CA9mRNA、Ep—cammRNA的表达，胸水找脱落细胞，免疫化学发光法检测胸水CEA水平。结果MN／CA9和Ep—cam基因在良、恶性胸腔积液中的表达均有明显差异（均P〈001）。对MPE的诊断，用FQRT—PCR方法检测MN／CA9mRNA和Ep—cammRNA的敏感性（SN）均高于其它两项检查，差异均有统计学意义（均P〈005），而特异性（SP）无统计学差异（均P〉0．05）。细胞学阴性的MPE，MN／CA9诊断的SN为55．6％，SP为100％；Ep—cam诊断的SN为61.5％，SP为100％；两者联合检测的细胞学阴性MPE的SN为76．9％，SP为100％。结论SYBRGreenIFQRT—PCR检测MN／CA9和Ep—cam基因有助于鉴别良、恶性胸腔积液；联合检测MN／CA9和Ep—cam基因的表达有助于提高细胞学阴性MPE诊断的敏感性。

双靶向溶瘤腺病毒MD55对肿瘤细胞与正常细胞的杀伤作用比较

应用分子克隆和同源重组技术构建双靶向溶瘤腺病毒MD55。分析MD55病毒在细胞中的复制能力,并用MTT和结晶紫方法检测MD55对肿瘤细胞和正常细胞生长的影响,West-ern印迹检测病毒感染后细胞中E1A蛋白和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)片断的表达。结果显示,MD55能在MN/CA9阳性的肿瘤细胞SW620和OSRC-2中特异性表达E1A蛋白,并且在这些细胞中的复制能力和对这些细胞的杀伤性与对照病毒ZD55基本相同,而其在正常细胞中的复制能力很弱,对正常细胞的伤害很小;同时MD55可诱导肿瘤细胞SW620和OSRC-2的凋亡,而对正常细胞的凋亡无影响。实验结果表明双靶向溶瘤腺病毒MD55靶向性和安全性比单靶向病毒ZD55更高,有望成为一种很好的肿瘤靶向基因-病毒治疗载体。