MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化

MNDA蛋白是与免疫反应相关的HIN-200家族成员之一,可作为模式识别受体来识别外源性双链DNA,它在人类免疫性疾病中发挥重要作用。通过PCR扩增获得的MNDA全长cDNA和MNDA-HIN200基因片段克隆到原核表达载体pET-28a中,使其N端带有一个His标签,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,经IPTG诱导后,分别经过亲和层析和分子筛层析对MNDA和MNDA-HIN200进行纯化。DNA测序表明,构建的重组质粒正确,筛选了蛋白最适表达菌株BL21(DE3);由于PYD(88 aa)结构域之间的相互作用影响MNDA的表达量及聚集状态,因此设计了PYD缺失的只含有HIN-200结构域的突变体MNDA-HIN200,最终获得了大量的、均一性好、高纯度的MNDA-HIN200蛋白,为MNDA的蛋白的晶体筛选和结构解析奠定基础。