单克隆非特异性抑制因子-β(MNSFβ)在大肠杆菌中的表达、抗体的制备及在小鼠子宫内膜上的组织定位

为了获得足够量的单克隆非特异性抑制因子-β蛋白(monoclonal nonspecific supressor factor β,MNSFβ)及其抗体用于探讨MNSFβ在着床中的作用机理,本研究构建了表达质粒pBV220/MNSFβ-hCGβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白MNSFβ-hCGβ,用抗hCGβ抗体对表达产物进行鉴定,结果表明融合蛋白MNSFβ-hCGβ得到了正确表达,且分子量和理论值相近。表达产物MNSFβ-hCGβ经初步纯化后用于免疫Balb/C小鼠,制备抗体。同时,我们还构建了表达质粒pGEX-4T-2/MNSFβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白GST-MNSFβ。用融合蛋白GST-MNSFβ对融合前的免疫小鼠回忆刺激并进行检测,制备了抗MNSFβ多克隆抗体和单克隆抗体。应用所制备的多克隆抗体进行免疫组化研究,对MNSFβ在小鼠子宫内膜上进行了组织定位,结果显示,MNSFβ在着床日(受精后第4.5天)小鼠子宫非着床位点的表达和着床位点相比明显提高。

猪免疫抑制因子MNSFβ的克隆、表达与组织分布

MNSFβ(Monoclonal nonspecific suppressor factorβ)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道。文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次从猪脾脏中克隆了包含完整开放阅读框的MNSFβcDNA(GenBank登录号:KF77642500)片段,测序正确后分析猪MNSFβ的核酸序列和蛋白质序列。将猪MNSFβ基因编码区序列插入表达载体pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-MNSFβ;用脂质体将重组质粒转染到猪脐静脉内皮细胞(SUVEC)中,利用荧光检测、Western blot和激光共聚焦分析SUVEC中猪MNSFβ的表达;并用实时荧光定量PCR对猪MNSFβ在不同组织的表达丰度进行分析。结果表明:猪MNSFβ基因全长402 bp,编码133个氨基酸,含一个外显子。生物信息学分析表明,猪MNSFβ为无信号肽的稳定蛋白,由泛素样结构域与核糖体蛋白S30组成。对猪MNSFβ与已发现的18个物种的MNSFβ氨基酸序列进行相似性分析和进化树分析,显示其蛋白相似度均在91%以上,且进化距离都小于0.05,说明MNSFβ在各物种间高度保守。荧光检测和Western blot结果显示,猪MNSFβ在SUVEC中成功表达,激光共聚焦显示其在细胞质与细胞核内均有分布。组织表达谱分析表明,猪MNSFβ在各免疫相关组织广泛表达,但在肺脏中未检测到表达,说明其在机体免疫反应中发挥重要作用。

MNSF-β在子宫内膜异位症异位内膜中的研究

目的探讨小鼠单克隆非特异性抑制因子-β（MNSF-β）在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法选取24例经病理证实为子宫内膜异位症的异位内膜标本为实验组，以14例非子宫内膜异位症患者的子宫内膜标本为对照组。采用RT-PCR方法检测MNSF-βmRNA的相对表达。并对子宫内膜异位症患者异位内膜中MNSF-β表达水平与内异症严重程度及月经周期进行相关性分析。结果实验组异位内膜中MNSF-β表达相对水平明显低于对照组在位内膜（t=-11．581，P〈0．01）；实验组的异位内膜MNSF-9水平，中、重度组与轻度组的差别有显著性（t=-2．731，P〈0．05）；实验组异位内膜和对照组在位内膜在各自组中增殖期和分泌期比较，MNSF-β表达水平均无显著性差异（P〉0．05）；实验组异位内膜增殖期、分泌期与对照组在位内膜增殖期、分泌期在位内膜分别比较，均有统计学差异（t增殖期=-3．858，t分泌期=-3．187，均P〈0．05）。结论MNSF-β表达降低与子宫内膜异位症的发生发展有着密切关系。

免疫抑制因子MNSFβ在母-胎界面作用机制的研究进展

母-胎界面免疫耐受状态的形成是胚胎植入和妊娠维持过程中的一个关键环节,唯其机制尚不十分清楚。单克隆非特异性抑制因子-β(MNSFβ)(Fau)是一种在体内广泛分布的非抗原特异性的免疫抑制因子,能抑制激活型T细胞和B细胞的增殖,以及T细胞和巨噬细胞中TNFα等细胞因子的表达,并在胚胎植入及妊娠维持过程中发挥重要作用。由文献报道推测:MNSFβ蛋白有分泌型和非分泌型2种表达形式,而且前者是以完整的MNSFβ蛋白分子单体或多聚体形式分泌到细胞外,后者以MNSFβ蛋白的Ubi-L肽段分别与Bcl-G或endophilin II形成复合物的形式存在于细胞质中。MNSFβ对蜕膜巨噬细胞(dMac)中Cox-2和p53表达的抑制是不利于胚胎植入和妊娠维持的。

多节段间隔性脊柱骨折21例临床分析

目的 :探讨多节段间隔性脊柱骨折的受伤机制及漏诊原因 ,以提高诊断正确率和治疗效果。方法 :总结性分析我院近 6年来连续收治的 2 45例脊柱骨折病例 ,其中多节段间隔性脊柱骨折 2 1例 ,延迟诊断和漏诊 10例 ,结合伤因及骨折表现 ,通过复习文献 ,阐述受伤机制 ,对漏诊原因及治疗效果进行分析。结果 :多节段脊柱间隔性骨折占整个脊柱骨折的 8 6 % ,其具有损伤暴力大 ,致伤机制复杂 ,常合并其他损伤 ,易于漏诊或延迟诊断 (本组占 47 6 % )的特点。结论 :对多发伤患者应常规拍摄脊柱X线片 ,提高对本损伤的认识 ,尽早排除有否脊柱损伤 。

多节段非相邻型脊柱骨折的诊断与手术治疗

目的探讨多节段非相邻型脊柱骨折（multi—level noncontiguous spinal fractures，MNSF）的受伤机制、诊断与手术治疗方式。方法对我院1997年1月至2008年1月手术治疗并得到随访的36例MNSF患者的临床资料，按ASIA分级、感觉运动评分进行回顾性分析。结果36例MNSF患者共累及椎体78个节段，关键损伤部位骨折分型以爆裂型和压缩型骨折为主。脊髓不完全性损伤病例（B、c级），感觉运动评分明显提高，随访时与术前比较有显著性差异（P〈0．05），术后ASIA分级分别提高1～2级；脊髓完全性损伤病例（A级）ASIA分级无改善。感觉运动评分随访时与术前比较无显著性差异。结论MNSF具有暴力损伤大、致伤机制复杂、脊髓损伤严重、合并损伤多、易于漏诊或延误诊断等特点，治疗上应明确多节段骨折的关键部位及骨折的性质，并根据多节段脊柱骨折的类型选择相应的固定融合节段。