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转基因玉米MON88017旁侧序列分析及定性PCR检测 被引量:18
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作者 袁磊 孙红炜 +3 位作者 杨崇良 尚佑芬 路兴波 赵蕾 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期361-364,共4页
采用基因组步移法和巢式PCR方法研究转基因玉米MON88017外源基因插入位点旁侧序列特征,获得了外源基因插入位点的左边界旁侧序列504bp,包括336bp的插入载体序列和168bp的玉米基因组序列。根据此旁侧序列,设计MON88017转化事件特异性引... 采用基因组步移法和巢式PCR方法研究转基因玉米MON88017外源基因插入位点旁侧序列特征,获得了外源基因插入位点的左边界旁侧序列504bp,包括336bp的插入载体序列和168bp的玉米基因组序列。根据此旁侧序列,设计MON88017转化事件特异性引物并进行定性PCR扩增,扩增片段为446bp,建立了转基因玉米MON88017转化体特异性检测方法。该方法特异性强、灵敏度高(0.1%),为转基因玉米品种MON88017进出口检测和标识检测提供了技术基础。 展开更多
关键词 转基因生物 事件特异性检测 定性PCR mon88017转化事件 左边界旁侧序列
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以实时荧光定量PCR技术检测转基因玉米MON88017 被引量:12
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作者 袁磊 孙红炜 +3 位作者 李凡 李宁 赵蕾 路兴波 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2117-2121,共5页
根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的... 根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的标准曲线。检测了5个已知MON88017含量(0.01%、0.05%、0.10%、0.50%和1.00%)的混合样品中的转基因含量,结果表明检测底限可以达到19~30个阳性拷贝。该研究建立的实时荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强。 展开更多
关键词 转基因生物 实时荧光定量PCR mon88017 标准分子
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON88017 被引量:3
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作者 宋君 王东 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期992-998,共7页
为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方... 为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方法分析转基因玉米MON88017特异性很强;29次重复测量含量为1.50%的转基因玉米MON88017样品,平均测量值(1.541%)接近真实值(1.50%),相对偏差为2.70%,测量值的变异系数为0.110 4,回收率为100.00%,测量不确定度为0.096;在97.5%的置信水平下能检测到最低含量为5个拷贝的MON88017分子片段。因此,本研究建立的转基因玉米MON88017实时荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确度和灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供良好的技术支撑。 展开更多
关键词 转基因玉米mon88017 实时荧光定量PCR 特异性 灵敏度 精确度 测量不确定度
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转基因玉米MON88017测量不确定度的评定 被引量:1
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作者 宋君 李洁 +4 位作者 常丽娟 王东 张富丽 刘文娟 雍彬 《四川师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第5期681-689,共9页
为了解"不确定度传播"(GUM)和"概率分布传播"(MCM)2种方法在转基因成分测量不确定度评定中的差异及验证GUM法评定转基因成分测量不确定度的适用性,首次采用MCM和GUM法同时评定试样中转基因玉米MON88017质量分数的... 为了解"不确定度传播"(GUM)和"概率分布传播"(MCM)2种方法在转基因成分测量不确定度评定中的差异及验证GUM法评定转基因成分测量不确定度的适用性,首次采用MCM和GUM法同时评定试样中转基因玉米MON88017质量分数的测量不确定度.研究结果表明:MCM与GUM法计算得到的转基因玉米MON88017质量分数的概率密度分布都为正态分布;MCM计算获得的MON88017质量分数的标准不确定度(0.04%)小于GUM法获得的不确定度(0.1%),MCM获得的MON88017质量分数的95%包含区间的范围(1.43%~1.59%)小于GUM法计算得到的95%包含区间范围(1.34%~1.74%).因此,采用MCM评定MON88017质量分数不确定度的结果优于GUM法的相应评定结果.由于GUM法对MON88017质量分数不确定度评定结果的概率分布呈正态分布,因此GUM法适用于转基因生物及产品的测量不确定度评定. 展开更多
关键词 转基因玉米mon88017 不确定度 不确定度传播 概率分布传播
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环介导等温扩增法检测转基因玉米MON88017品系 被引量:6
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作者 马丹 张沫琦 +3 位作者 魏海燕 魏咏新 徐蕾蕊 曾静 《检验检疫学刊》 2017年第2期1-5,共5页
建立了转基因玉米MON88017品系环介导等温扩增法检测方法。针对MON88017玉米基因组与外源基因结合处序列,设计5条特异引物,并对反应条件、特异性、灵敏度、稳定性、结果判断方法等参数进行研究,同时与实时荧光PCR检测方法进行比较,最终... 建立了转基因玉米MON88017品系环介导等温扩增法检测方法。针对MON88017玉米基因组与外源基因结合处序列,设计5条特异引物,并对反应条件、特异性、灵敏度、稳定性、结果判断方法等参数进行研究,同时与实时荧光PCR检测方法进行比较,最终进行了5家同类型实验室的协同验证。结果表明本研究所建立的MON88017环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,其最低检出限为0.5%,在特异性、灵敏度和检测范围等指标上均优于传统的PCR技术,并且不依赖昂贵的大型设备,可以实现现场快速检测,检测成本与检测所需时间远低于实时荧光PCR。该方法具有快速、简便的优点,能满足实际工作要求。 展开更多
关键词 转基因玉米 环介导等温扩增法 mon88017
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A Real-time Fluorescent Quantitative PCR Method for Detection of Genetically Modified Maize MON88017
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作者 Jun SONG Dong WANG 《Asian Agricultural Research》 2017年第9期53-58,共6页
In order to improve the standardized technical system of quantitative analyses for genetically modified organisms( GMOs) and protect China's bio-safety and reduce ecological risk,we establish a quantitative detect... In order to improve the standardized technical system of quantitative analyses for genetically modified organisms( GMOs) and protect China's bio-safety and reduce ecological risk,we establish a quantitative detection method for the genetically modified( GM) maize MON88017 using real-time fluorescent quantitative PCR. Meanwhile,the method is evaluated by several methodological indicators such as specificity,sensitivity,accuracy and uncertainty of measurement. The results show that the method has strong specificity in analysis of genetically modified maize MON88017. The mean value(1. 54%) repeatedly measured for 29 times with the relative deviation of 2. 7% was close to the real value(1. 50%) and the variation coefficient of the measured value was 0. 1. The tested recovery rate is 100% and the uncertainty of measurement is 0. 096. 5 copies of the MON88017 molecular fragment can be detected at 97. 5% confidence level. Consequently,the quantitative detection method established in this paper for the GM maize MON88017 has fairly high specificity,accuracy and sensitivity and this technology established in this paper can provide good technical support for the safety supervision of genetically modified organisms in China. 展开更多
关键词 GM maize mon88017 Quantitative detection method Evaluation method
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