β-榄香烯对骨癌痛大鼠吗啡耐受的影响及作用机制研究

目的研究β-榄香烯对骨癌痛大鼠吗啡耐受的影响及作用机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、吗啡组及β-榄香烯低、高剂量(0.7、2.8 mg/kg)组和艾芬地尔(5 mg/kg)组,每组15只;对照组予以生理盐水胫骨注射并ip二甲基亚砜,其余各组构建骨癌痛-慢性吗啡耐受模型后,分别ip相应药物,通过检测机械撤退阈值和热退潜伏期对各组大鼠进行疼痛行为学评估;采用qRT-PCR检测各组大鼠脊髓组织肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、μ阿片受体(μopioid receptor,MOPR)、N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位2B(N-methyl-D-asparate receptor subunit 2B,NR2B)和环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的mRNA表达;采用Western blotting检测各组大鼠脊髓组织NR2B、cAMP和MOPR的蛋白表达。分别采用不同质量浓度(5、10、20、25µg/mL)的β-榄香烯处理人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,采用CCK-8法检测SH-SY5Y细胞活性,采用试剂盒测定细胞内cAMP含量,确定β-榄香烯作用于SH-SY5Y细胞的适宜质量浓度;设置对照组、吗啡组、β-榄香烯(5µg/mL)组和艾芬地尔(10µmol/L)组,对照组予以常规培养,其余各组采用10µmol/L吗啡作用SH-SY5Y细胞48 h,以构建吗啡耐受细胞模型,而后β-榄香烯组和艾芬地尔组分别给予相应药物,采用qRT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、NR2B、cAMP和MOPR的mRNA表达,采用Western blotting检测NR2B、cAMP和MOPR的蛋白表达。结果给药第1天,相较于对照组,其余各组大鼠机械撤退阈值和热退潜伏期明显升高(P<0.001),随给药时间延长,吗啡组机械撤退阈值和热退潜伏期逐渐下降,各给药组机械撤退阈值和热退潜伏期明显高于吗啡组(P<0.05、0.01、0.001)。β-榄香烯显著抑制SH-SY5Y细胞活性(P<0.001),且呈剂量和时间相关性;β-榄香烯对SH-SY5Y细胞内cAMP含量无明显影响。吗啡耐受可促进大鼠脊髓组织和SH-SY5Y细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6、NR2B及cAMP表达(P<0.001),抑制MOPR表达(P<0.001);给予艾芬地尔或β-榄香烯后,则呈现相反趋势(P<0.01、0.001),且β-榄香烯的作用呈剂量相关性。结论β-榄香烯具有一定的镇痛作用,可通过调控MOPR/NR2B有效缓解骨癌痛大鼠吗啡耐受。