siRNA沉默α-TAT1对肝肺综合征中内皮细胞迁移行为的影响

目的 探究siRNA沉默微管乙酰化转移酶1(alpha tubulin acetyltransferase 1,α-TAT1)对肝肺综合征(hepatopulmonary syndrome,HPS)中内皮细胞迁移行为的影响。方法 通过在线数据库Tabula Muris分析肺组织各细胞亚群α-TAT1的表达。24只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(Sham组,n=6)、胆管结扎组(HPS组,n=18)。造模后在第2、4周分别取材HPS组大鼠,通过免疫荧光共定位检测2周和4周HPS大鼠肺血管内皮细胞中α-TAT1表达水平变化。收集Sham和HPS大鼠血清处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) 12 h和24 h,之后进行小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰实验,分为Sham血清+siRNA NC组、Sham血清+siRNA α-TAT1组、HPS血清+siRNA NC组、HPS血清+siRNA α-TAT1组。Western blot检测各组HUVECs中α-TAT1、Ace-α-tubulin表达水平变化。免疫荧光观察各组诺考达唑(10μmol/L)预处理后HUVECs中α-Tubulin微管聚合水平,评估微管的结构稳定性;细胞划痕实验联合细胞免疫荧光观察HUVECs的细胞迁移能力和高尔基体的定位。体外成血管实验检测HUVECs成血管能力。结果 体内及体外实验表明HPS中肺血管内皮细胞α-TAT1表达显著增加(P<0.01)。siRNA α-TAT1干扰组中α-TAT1和Ace-α-tubulin表达量均显著下调,且微管稳定性减弱(P<0.01)。另外,siRNA α-TAT1干扰组中GM130标记的高尔基体在核周细胞突出段方向的分布比例降低,且迁移能力下降(P<0.01)。同时,成血管长度及网络水平显著减弱(P<0.01)。结论 沉默α-TAT1可减弱HPS中内皮细胞迁移和成血管能力,其机制与减弱微管稳定性有关。

MORTM1-TAT对吗啡诱导的大鼠小胶质细胞M1型激活状态的影响

目的研究μ/δ阿片受体异聚体(MDOR)干扰肽(MOR^TM1-TAT)对吗啡诱导的大鼠小胶质细胞M1型激活状态的影响。方法将大鼠小胶质细胞接种于6孔板中,待融合度约60%时,采用随机数字表法分为对照组(A组)、溶剂组(B组)、吗啡组(C组)、吗啡+MOR^TM1-TAT组(D组)4组。A组不进行任何处理,B组加入PBS溶剂,C组加入终浓度为100μmol/L的吗啡溶液,D组加入MOR^TM1-TAT孵育2 h后再加入等剂量吗啡。孵育72 h后,采用细胞免疫荧光技术检测细胞M1表型标志物CD86的表达及MDOR的含量;采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1β)的表达水平。结果与A组相比,B组细胞各项指标表达差异无统计学意义(P>0.05);与B组相比,C组细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及细胞M1表型标志物CD86、MDOR表达水平明显升高(F=104.87~463.50,P<0.05);与C组相比较,D组细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及细胞M1表型标志物CD86、MDOR表达表达水平显著降低(P<0.05)。结论MOR^TM1-TAT通过干扰MDOR形成抑制了吗啡诱导的大鼠小胶质细胞M1型分化及促炎细胞因子的释放,该研究为防治吗啡耐受提供了一定的理论依据。