微生物制剂MP喷施烟叶后的差异蛋白分析

为明确微生物制剂MP(芽孢杆菌)喷施烟叶后对其品质的影响,以喷施微生物制剂MP和清水的烟叶作为研究材料,采用蛋白质双向凝胶电泳法分析了烟叶中蛋白质的表达差异。结果显示,在MP制剂诱导烟叶后,有6个蛋白质的表达量发生了显著变化,其中5个蛋白点上调表达,1个蛋白点下调表达。利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱法(MALDI TOF/TOF MS)对这6个差异蛋白进行了分析,结果共鉴定出4个差异蛋白,分别为烟草酸性几丁质酶PR-P、烟草几丁质酶前体、内切几丁质酶A前体和逆渗透蛋白。几丁质酶和逆渗透蛋白与植物的抗病性密切相关,说明在喷施MP制剂后烟叶可能产生抵御外源病菌的应急机制并进而提高其抗病性。

微生物制剂MP代谢产物的蛋白质组分析

为明确微生物制剂MP提高烟叶品质的原因,以该制剂的代谢产物作为研究材料,采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析了微生物制剂MP代谢产物的蛋白质组成分。结果共鉴定出35个非重复蛋白质,蛋白等电点几乎均在4-7范围内,分子量均大于20 kD。KEGG代谢通路分析显示,所鉴定的蛋白几乎都与代谢有关,其中参与氨基酸代谢、糖酵解、三羧酸循环、丙酮酸盐代谢的蛋白最多。其中,氨基酰组氨酸二肽酶、嗜热菌状金属蛋白酶、尿刊酸水合酶和组氨酸氨裂解酶能有效降低烟叶中蛋白质。

烟草组织蛋白酶B基因的结构特征分析及mRNA表达

为了明确烟草中组织蛋白酶B基因的功能,对烟草组织蛋白酶B基因(NbCathB)进行了序列分析。该基因ORF长951 bp,编码316个氨基酸。该基因蛋白质的预测分子量为35.2 kD,等电点为6.14。对NbCathB的基因结构分析显示,该基因具有8个外显子,外显子/内含子边界处均符合GT-AG规则。比较NbCathB和AtCathB基因,显示两者编码氨基酸序列一致性为61%。通过SMART软件分析,NbCathB和AtCathB基因的结构域很相似。在上清液、菌体、菌液以及水4种处理烟叶中的表达谱鉴定显示,在喷施MP制剂(巨大芽孢杆菌)菌体和菌液的烟叶中NbCathB的表达量明显高于在喷施MP制剂上清液的烟叶中的表达量,而在喷施水的烟叶中的表达量最低。说明NbCathB很可能发挥了AtCathB相同的作用。