香蕉线条病毒MP功能域基因的克隆、原核表达及抗血清制备

[目的]制备香蕉线条病毒广东分离物（ BSV-GD） MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清，为BSV基因编码蛋白功能的研究提供条件．[方法]对BSV-GD ORF3基因氨基酸序列进行生物信息学分析，得出MP功能域基因序列，克隆该基因并插入载体pET-28b（＋）构建原核表达载体，经IPTG诱导表达后，采用超声波裂解法进行蛋白可溶性分析，利用组氨酸标签纯化试剂盒对目的融合蛋白进行纯化和回收，然后以纯化的目的蛋白为抗原免疫健康家兔制备其多克隆抗血清；通过Western-blot分析该抗血清的特异性，间接ELISA法检测该抗血清的效价．[结果和结论]MP功能域基因在ORF3中的序列为61～311 aa处，核酸序列长753 bp．试验克隆了该基因并成功构建了其原核表达载体pET28b-MP，经IPTG诱导1 h后表达了相对分子质量约为30800的融合蛋白6His＆#183; MP．可溶性分析表明该融合蛋白以包涵体形式存在，纯化获得了高纯度的目的融合蛋白，以其为抗原成功制备了BSV-GD MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清；分析表明该抗血清具有很强的特异性，其效价高达204800倍以上．