晶体膜蛋白2(MP19)的信号肽在蛋白成熟过程中未被切除

目的:探讨MP19的N端是否具有信号肽的功能,引导MP19到细胞膜,证实此信号肽在蛋白质的成熟过程中未被切除。方法:用MP19 cDNA做模板,通过PCR以获得距MP19 N端不同长度的核苷酸序列:1～25 bp、1～36 bp及1～64 bp。完整的cDNA及PCR所获得的不同片段的核苷酸分别克隆到四环素调控的哺乳类表达载体pcDNA4/TO,获得克隆MP19/EGFP、MP19—25/EGFP、MP19—36/EGFP及MP19-64/EGFP,确保插入的片段在EGFP的5’端。

L人晶体膜内蛋白MP19基因(LIM2)启动子上一个晶体特异顺式元件的鉴定(英文)

使用重叠和变异的寡核苷酸作为探针 ,凝胶迁移分析和竞争实验分析了LIM2转录起始位点上游 - 4 7至- 32的区域 ,与其高度亲和结合的一个蛋白复合体看来仅仅结合到这个DNA双链区域的“敏感”位点。这个位点的序列由 4个G核苷 ,接着 7个其他核苷酸 (AACCTAA)及连着另外 4个G核苷组成 ,即GGGGAACCTAAGGGG ;我们称其为Hsu元件。使用含有这个元件或相应的变异元件所构建的LIM2基因启动子 CAT质粒的活性分析表明Hsu元件是位于LIM2基因启动子之内 ,它是LIM2基因表达所必须的。结合到Hsu元件的反式因子存于晶体发育期间 ,看来是晶体特异性的。由于LIM2基因启动子并不包含一个经典的TATA盒 ,这个Hsu元件可能充当RNA复制酶复合体结合的位点。