代谢型谷氨酸受体亚型5拮抗剂MPEP在小鼠癫痫治疗中的作用

目的：观察2-甲基6-苯基乙炔基嘧啶（MPEP）在毛果芸香碱诱导的癫痫小鼠动物模型中的抗抽搐及对小鼠大脑神经元的保护作用。方法：取5—6周瑞士雄性小鼠行颈静脉插管。插管后第3天腹腔注射毛果芸香碱诱导小鼠癫痫模型。待癫痫发作1或2h通过颈静脉插管给予四种不同剂量（25mg／kg，50mg／kg，100mg／kg，200mg／kg）的MPEP（实验组）或10％蓖麻油-生理盐水（实验对照组），观察其抗癫痫活性。给药后24h断头取脑行病理观察，并计算海马齿状回门区中间神经元的密度。结果：与实验对照组相比①25mg／kg，50mg／kg两种剂量组在癫痫发作后1及2h给药均无明显抗抽搐活性，对海马齿状回门区中间神经元亦无明显保护作用（P〉0．05）。②100mg／kg剂量组在癫痫发作后1h及2h给药均有明显抗抽搐活性。1h给药对海马齿状回门区中间神经元密度似有增加，但差异无显著性意义（P〉0．05）；2h给药对海马齿状回门区中间神经元无明显保护作用。③200mg／kg剂量组有更好的抗抽搐活性。1h给药海马齿状回门区中间神经元的密度显著增加（P〈0．05）。2h给药对海马齿状回门区中间神经元无明显保护作用（P〉0．05）。结论：MPEP对毛果芸香碱诱导的癫痫小鼠模型有明显的抗抽搐活性，如果给药及时MPEP对海马齿状回门区中间神经元有明显保护作用，并在实验剂量范围内随着剂量的增加有明显的增强趋势。

MPEP对幼年FVB小鼠旷场行为的影响

目的探讨MPEP对野生型FVB幼年小鼠旷场行为的影响。方法将MPEP溶解在二甲茎亚砜(DMSO)中,将18只幼年野生型FVB小鼠分成两组,实验组(n=11)注射MPEP(10 mg/kg),对照组(n=7)注射DMSO,注射量为70μL,注射30 min后,进行旷场实验,观察MPEP对小鼠旷场行为的影响。结果 10 mg/kgMPEP对小鼠认知能力及兴奋性、运动性有抑制作用,主要表现在中央区活动时间增加,运动速度减慢,运动距离缩短。结论 10 mg/kg MPEP对野生型FVB幼年小鼠旷场行为有抑制性作用。

mGluR5拮抗剂MPEP抑制大鼠NPCs增殖

目的研究代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)拮抗剂2-甲基-6-(苯乙炔)吡啶盐酸盐(MPEP)对大鼠胚胎皮质NPCs增殖的影响以及其分子机制。方法大鼠胚胎皮质NPCs分为4组:正常对照组、MPEP(1μmol/L)、MPEP(10μmol/L)和MPEP(100μmol/L)组。应用MTT比色法和神经球直径测量分析MPEP对大鼠胚胎皮质NPCs增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;免疫蛋白印迹法观察磷酸化ERK,JNK和p38 MAPKs表达变化。结果 mGluR5拮抗剂MPEP抑制大鼠胚胎皮质NPCs增殖;与对照组相比MPEP处理组S期与G2/M期细胞数量显著减少(P<0.01),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.01);MPEP组早期凋亡和晚期凋亡细胞显著增加(P<0.01);与对照组相比,MPEP组ERK1/2和JNK2的磷酸化表达显著下调,p38 MAPKs的磷酸化表达显著上调。结论 mGluR5拮抗剂MPEP通过抑制ERK和JNK的磷酸化激活抑制大鼠胚胎皮质NPCs增殖。

底丘脑核中MPEP对治疗早期帕金森病模型大鼠运动行为的影响

目的:探讨底丘脑核(STN)中代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)拮抗剂MPEP对部分损毁的帕金森病(PD)模型大鼠运动行为的影响及神经保护作用。方法:将大鼠随机分为假手术组(n=12)、损毁+生理盐水组(n=12)、损毁+MPEP组(n=12)。采用行为学和神经化学检测方法,观察3组大鼠在旷场实验中的自发运动能力和斜板实验中的停留角度,以及纹状体中多巴胺(DA)含量。结果:与假手术组大鼠相比较,损毁+生理盐水组大鼠的水平运动能力(P<0.001)、垂直运动能力(P<0.001)和斜板停留角度(P<0.001)均明显降低,而损毁+MPEP组大鼠均恢复至假手术组水平(P>0.05)。神经化学检测结果显示,与假手术组大鼠相比较,损毁+生理盐水组大鼠纹状体DA含量降低了56.3%(P<0.001),而损毁+MPEP组大鼠与假手术组大鼠无明显差异(P>0.05),且与损毁+生理盐水组比较明显升高(P<0.001)。结论:慢性STN局部应用MPEP对早期PD模型大鼠的运动行为和神经元具有保护作用。

MPEP阻断mGlu5抑制肝癌细胞HepG2增殖

代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptors 5,mGlu 5)在神经系统的多种病理生理过程中发挥重要作用.mGlu5与肝细胞癌的发生发展关系密切,其抑制剂2-甲基-6-(苯乙基)-吡啶(2-methyl-6-(phenylethyl)-pyridine,MPEP)能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞的迁移.在此基础上,进一步探讨了MPEP与肝癌细胞增殖之间的关系.结果显示:在无血清和有血清的条件下,MPEP均能显著降低肝癌细胞HepG2的细胞活力.同时发现,有血清条件下MPEP能使HepG2细胞周期停滞在G1期,显著降低HepG2细胞的DNA合成能力和克隆形成能力,并能下调细胞增殖信号ERK通路的活性.该研究结果为进一步认识MPEP对肝癌细胞的抑制作用提供了新的实验证据.

mGluR5拮抗剂MPEP调控MAPK信号通路缓解大鼠子痫前期脑损伤

目的探讨mGluR5拮抗剂MPEP缓解大鼠子痫前期脑损伤的作用。方法 SPF级妊娠大鼠被随机分为6组,妊娠对照组(PN)、妊娠同型半胱氨酸组(PH)、PH+神经递质mGluR5受体拮抗剂MPEP组(PHM)、PHM+U0126组、PHM+SB202190组及PHM+SP600125组,于妊娠第10天,PH组每日腹腔内注射同型半胱氨酸200 mg/kg以制备子痫前期模型;PHM组每日腹腔皮下注射神经递质mGluR5受体拮抗剂MPEP(1.5mg/kg);PHM+U0126组,PHM+SB202190组,PHM+SP600125组,在MPEP注射前1 h,分别腹腔注射U0126(4mg/kg),SB202190(20 mg/kg)和SP600125(30 mg/kg)共计10天。检测各组大鼠血压、尿蛋白;氧化应激水平;炎症因子释放量;并检测了MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2,p38 MAPK,JNK,p-ERK1/2,p-p38 MAPK及p-JNK蛋白表达。结果 MPEP降低大鼠血压及尿蛋白含量,增加NO、NOS、SOD及GSH-Px活性,并抑制炎症因子IL-1、IL-6及TNF-α的水平;同时,MPEP能够抑制ERK1/2,p38 MAPK,JNK蛋白的磷酸化;但MPEP的上述作用被U0126,SB202190及SP600125所阻断。结论 mGluR5拮抗剂MPEP对子痫前期导致的大鼠脑损伤与调控MAPK信号通路相关。

代谢型谷氨酸受体5拮抗剂(MPEP)在大鼠颞下颌关节疼痛中的作用和可能机制

目的探讨应用代谢型谷氨酸受体5拮抗剂(MPEP)后,福尔马林致颞下颌关节疼痛大鼠三叉神经节内降钙素基因相关肽(CGRP)的表达变化,为临床颞下颌关节疼痛治疗提供实验依据。方法 SD大鼠36只,随机均分为4组,正常对照组(不做任何处理),阴性对照组(右侧颞下颌关节内注射50μl生理盐水),甲醛组(右侧颞下颌关节内注射50μl5%formalin),MPEP(2-甲基-6苯基乙炔嘧啶)组[25μlMPEP(5mmol/L)+50μl5%formalin]。将5%甲醛注入右侧颞下颌关节腔内,诱导大鼠颞下颌关节疼痛。计数各组大鼠60min内伤害性行为反应(包括刮擦头面部及缩头)。并利用免疫组织化学方法检测三叉神经节内CGRP的蛋白定位与表达。结果甲醛组大鼠搔刮头面部及缩头反应持续时间明显高于正常对照组及阴性对照组(P<0.05),MPEP组搔刮头面部及缩头等伤害性行为反应明显低于甲醛组(P<0.05)。免疫组化结果显示甲醛组、MPEP组三叉神经节内CGRP免疫反应阳性物质与正常对照组比较显著增加(P<0.05),生理盐水组与正常组比较无统计学差异(P>0.05),MPEP组与甲醛组比较CGRP免疫反应阳性物质明显降低(P<0.05)。结论代谢型谷氨酸受体5拮抗剂减轻福尔马林引起的大鼠颞下颌关节疼痛可能与其下调三叉神经节内CGRP的表达水平相关。

促代谢型谷氨酸受体mGluR5参与膀胱的生理与伤害性感受

促代谢型谷氨酸受体(mGluRs)是一类G蛋白偶联受体,参与中枢神经系统的突触可塑性和学习记忆等过程。一些研究资料表明,mGluRs还在躯体痛的外周信号转导和信号传递中起重要作用,但其在内脏感受中的作用尚不清楚。本研究的目的在于考察Ⅰ组促代谢型谷氨酸受体(mGluR5)是否参与膀胱的生理与伤害性感受。在用戊巴比妥钠(50mg/kg,ip)麻醉的大鼠,mGluR5拮抗剂MPEP(3.0mg/kgiv)能明显提高排尿反射的容积阈值,并能减弱快速充胀膀胱引起的腹肌收缩反应,提示mGluR5参与膀胱的生理和伤害性感受过程。在取自正常小鼠的膀胱/盆神经模型,MPEP(0.1￣100μM)对充胀膀胱引起的传入神经活动没有明显影响,而在环磷酰胺(125mg/kgip)致间质性膀胱炎(IC)的小鼠,MPEP(0.3μm)能抑制高阈值膀胱传入神经放电。在清醒、自由活动的IC小鼠,MPEP(1μmol/kg,ip)还明显抑制其后肢对机械刺激的反应。上述结果表明,mGluR5可能并不参与正常膀胱的外周机械性感受的信号转导,但可能参与膀胱生理和伤害性感受信息向脊髓和在中枢内的传递过程;外周和中枢mGluR5在实验性间质性膀胱炎时有上调现象,故可能是治疗内脏感觉过敏的一个潜在药物作用靶点。

小鼠岛叶皮质5型代谢型谷氨酸受体对神经病理性疼痛的调控作用

目的:通过保留性神经损伤(SNI)模型,探索神经病理性疼痛发生后,岛叶皮质(IC)中FOS蛋白和5型代谢型谷氨酸受体(m Glu R5)及其下游分子的表达变化,并观察对岛叶皮质局部应用m Glu R5激动剂DHPG和拮抗剂MPEP对动物疼痛行为的影响。方法:将健康成年的雄性C57BL/6小鼠随机分为SNI组和假手术组(Sham组),SNI组采用SNI模型制造神经病理性疼痛模型。造模后通过机械痛行为学检测造模是否成功,通过免疫荧光染色检测岛叶皮质FOS蛋白的表达变化,通过Western Blot检测小鼠IC中m Glu R5和下游分子p-ERK与PI3K的表达变化;通过埋管注射的方式向实验组与假手术组IC内给予m Glu R5拮抗剂MPEP与激动剂DHPG,观察两种药物对小鼠机械性痛行为的影响。结果:SNI术后,小鼠的机械性痛的痛阈出现明显下降,并可维持至术后4周。免疫荧光组织化学染色结果显示:与假手术组相比,SNI组小鼠在术后1、2周IC中FOS蛋白表达增加(P<0.05)。Western Blot检测岛叶皮质m Glu R5及其下游分子p-ERK、PI3K的表达结果显示:术后SNI组m Glu R5表达水平相比假手术组增高(P<0.05),SNI组p-ERK表达水平相比假手术组增高(P<0.05),而PI3K仅在第2周时出现升高(P<0.05)。IC内置管给予MPEP后假手术组小鼠痛阈出现下降(P<0.05),而给予DHPG后SNI组的痛阈出现升高(P<0.05)。结论:小鼠IC中m Glu R5参与神经病理性疼痛的发生或调控,并且IC中m Glu R5表现出抑制性作用。在SNI后m Glu R5出现保护性增高,而m Glu R5激动剂DHPG可起到镇痛作用。

mGluR5拮抗剂对FMR1基因敲除小鼠树突棘的影响及其机制探讨

目的:探讨代谢性谷氨酸受体5(mGluR5)拮抗剂2-甲基-6-苯基乙炔嘧啶(MPEP)对脆性X综合征树突棘发育的影响及其机制。方法:新生FMR1基因敲除(KO)小鼠腹腔注射MPEP1次、1周,以同龄KO鼠和野生鼠(WT)注射生理盐水对照。免疫印迹法检测微管相关蛋白1B(MAP1B)含量改变,并以单片Golgi染色方法观察皮质感觉区第Ⅴ层锥体神经元树突棘长度和密度。结果:KO小鼠树突棘长度和密度都显著高于WT小鼠,MAP1B含量也明显增高。MPEP干预1周MAP1B表达显著减少,树突棘长度、密度明显降低。MPEP1次干预明显减少MAP1B,对树突棘无影响。结论:脆性X综合征树突棘的发育异常与mGluR5信号的过度激活有关,MAP1B的过表达可能是主要环节。

mGluR5对大鼠视网膜对光反应的调控

目的 探索代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）对大鼠暗适应视网膜电图（ERG）不同成分的贡献。方法 实验研究。出生后30日龄大鼠（RCS-rdy＋-p＋）12只，暗适应大于12 h后，分别行视网膜下腔注射mGluR5激动剂CHPG[（R，S）-2-chloro-5-hydroxyphenylglycine] 200 μmol（6只，CHPG组）和抑制剂MPEP[2-methyl-6-（phenylethynyl）-pyridine] 200 μmol（6只，MPEP组），对侧眼注射同等体积PBS作为对照。注射后2 d采用RETI-scan系统记录其系列刺激光强度下（-4.5、-2.5、-0.5、-0.02、0.5 1 logcd×m×s-2）的暗适应ERG。导出数据，采用配对t检验进行双眼间数据比较。结果 CHPG组，a、b波幅值在不同光强下均显著降低（除最低光强）（-4.5〈t〈-2.3，P〈0.05），进一步分析得出a、b波最大幅值（Rmax和Vmax）均明显降低（-4.5〈t〈-2.3，P〈0.05），但其敏感度均未出现明显变化，且b/a未见明显变化。MPEP组，a、b波幅值在不同光强下均显著升高（除最低光强）（-3〈t〈-2，P〈0.05），进一步分析得出a、b波Rmax和Vmax均明显升高（-3〈t〈-2，P〈0.05），但其敏感度均未出现明显变化，且b/a未见明显变化。2组的振荡电位（OPs）与相应的对照眼比较未见明显差别。结论 mGluR5激动后，ERG a、b波幅值明显降低，mGluR5主要调控外层视网膜的对光反应。

代谢型谷氨酸受体5拮抗剂对临床早期帕金森病模型大鼠行为变化的影响及神经保护作用

目的探讨代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)拮抗剂6-甲基-2-苯基吡啶(MPEP)对黑质-纹状体通路部分损伤的帕金森病(PD)大鼠行为活动的影响及神经保护作用。方法雄性SD大鼠37只随机分为假手术组(11只)、生理盐水组(15只)和MPEP治疗组(11只)。生理盐水组和MPEP组内侧前脑束(MFB)注射6-羟多巴胺(6-OHDA)建立临床早期PD大鼠模型。术后第8d及15d分别对各组大鼠进行行为学和免疫组织化学检测,观察自发和诱发行为的变化及黑质致密部(SNpc)多巴胺能神经元丢失的比例。结果各组动物并未出现姿势异常。与假手术组相比,生理盐水组大鼠在术后第8d和第15d产生了明显的阿朴吗啡(APO)诱发旋转行为(P<0.05),且第15d较第8d严重(P<0.05),而APO未能诱发MEEP组大鼠的旋转行为(P>0.05)。免疫组化染色结果显示,生理盐水组SNpc约39%的多巴胺能神经元丢失,而MPEP治疗减轻了神经元的丢失(P<0.01)。结论在黑质-纹状体通路部分损伤的大鼠,MPEP治疗具有抗PD和神经保护效应。