苏北地区布-加综合征患者MPLW515L/K点突变测定研究

目的:探究在苏北地区布-加综合征(BCS)患者MPLW515L/K的突变情况,为发病机制的研究,疾病的诊断和治疗提供依据。方法:收集102例BCS患者和102例健康对照者外周血,从全血中提取DNA,采用等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)及基因测序方法检测MPLW515L/K的突变情况。结果:102例BCS病例组及102例健康对照均未发现MPLW515L/K的突变。结论:BCS发病可能与MPLW515L/K的突变没有相关性。

联合检测JAK2V617F、MPLW515L/K和CALR基因突变在原发性血小板增多症患者中的意义

目的研究成人原发性血小板增多症(PT)患者外周循环血液中JAK2V617F、MPLW515L/K和CALR基因的突变率,并分析联合检测的诊断价值。方法共纳入342例单纯血小板持续升高(≥300×109/L)的患者,分别行血常规、骨髓活检和基因检测,共确诊PT患者154例(45.03%),继发性血小板增多症188例。采用等位基因特异性-聚合酶链反应(AS-PCR)检测JAK2V617F和MPLW515L/K的点突变,直接测序法检测CALR基因突变。结果 3种基因的突变型有两条电泳条带,野生型仅有一条;JAK2V617F和MPL突变不引起读码框改变,而CALR突变可导致读码框改变。PT组JAK2V617F和CALR基因突变率显著高于继发组,差异有统计学意义(P<0.05);MPL阳性突变率为4.55%。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析,单独检测JAK2V617F突变诊断PT的曲线下面积(AUC)为0.721,敏感度为72.4%,特异度为79.5%;单独CALR突变的AUC为0.664,敏感度为68.4%,特异度为82.4%;JAK2V617F联合CALR突变的AUC为0.862,敏感度为85.9%,特异度为87.8%。结论 PT中以JAK2V617F和CALR突变率较高,联合二者检测可明显提高PT的诊断价值。

骨髓增殖性疾病MPLW515L点突变研究

为了探讨MPLW515L和JAK2V617F点突变在南京地区骨髓增殖性疾病(MPD)中的突变情况,采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)及基因测序方法检测190例MPD患者的MPLW515L和JAK2V617F点突变。结果表明:102例原发性血小板增多症(ET)患者有1例存在MPLW515L点突变,突变率为1.0%;43例存在JAK2V617F点突变,突变率为42.2%。13例特发性骨髓纤维化(IMF)患者未检测到MPLW515L点突变;5例存在JAK2V617F点突变,突变率为38.5%。32例真性红细胞增多症(PV)患者未检测到MPLW515L点突变;20例存在JAK2V617F点突变,突变率为62.5%。43例慢性髓系白血病(CML)患者未检测到MPLW515L和JAK2V617F点突变。结论:AS-PCR检测MPLW515L和JAK2V617F点突变简便可靠。ET患者中可存在MPLW515L点突变,JAK2V617F点突变存在于PV、ET、IMF中,而CML患者不存在JAK2V617F点突变。

87例骨髓增殖性肿瘤患者JAK2及MPL基因突变位点研究

目的:探讨JAK2V617F及MPLW515L/K点突变在骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者中的发生情况及临床意义。方法:回顾性统计分析87例MPN患者的临床及实验室检查资料,应用等位基因特异性-聚合酶链反应(AS-PCR)及序列测定方法,检测MPN患者骨髓/外周血单个核细胞JAK2V617F及MPLW515L/K点突变的发生情况,结合JAK2V617F及MPLW515L/K点突变阳性与阴性2组患者的临床及实验室检查指标,探讨其在疾病诊断及分子发病机制中的意义。结果:87例MPN患者[真性红细胞增多症(PV)36例,原发性血小板增多症(ET)33例,原发性骨髓纤维化(PMF)18例]中共检出55例患者存在JAK2V617F突变,总突变率为63.2%(55/87),其中PV28例,突变率77.8%(28/36);ET17例,突变率51.5%(17/33);PMF10例,突变率55.6%(10/18)。JAK2V617F阳性PV和ET患者WBC及Hb水平高于阴性患者(P<0.05);JAK2V617F阳性PMF患者WBC及PLT高于阴性患者(P<0.05)。JAK2V617F阳性MPN患者血栓发生率高于阴性患者(P<0.05)。24例JAK2阴性的ET及PMF患者中未能检测到MPLW515L/K。结论:MPN患者JAK2V617F发生率较高,JAK2V617F阳性MPN患者血细胞计数高于阴性患者,更易罹患血栓栓塞。

30例早期骨髓增殖性疾病疑似患者JAK2V617F和MPLW515L／K突变基因的表达

目的探讨BPC及Hb水平轻微升高，但未达真性红细胞增多症（PV）或原发性血小板增多症（ET）诊断标准的患者JAK2V617F及MPLW515L的表达情况与某些临床特征的相关性在早期骨髓增殖性疾病（MPD）中的诊断价值。方法、采用等位基因特异性PCR方法，检测30例BPC或Hb值偏高的早期MPD疑似患者JAK2V617F和MPLW515L／K基因表达，并定期随访其病情进展。结果30例患者中有14例（46．7％）存在JAK2V617F突变，且此14例患者中有5例（35．7％）曾有血栓史；30例患者中无一例存在MPLW515L表达；有效随访22例，JAK2V617F阳性12例，阴性10例，12例阳性患者经过6至24个月后均发展为典型的MPD，而10例阴性患者只有2例发展成MPD。结论JAK2V617F阳性表达有可能作为诊断早期MPD的重要依据。

JAK2V617F及MPLW515L／K在骨髓增殖性肿瘤中的表达和意义

骨髓增殖性肿瘤（MPNs）是一类起源于多能造魄干细胞的疾病。近年来，JAK2V617F等突变基因的发现使得人们对MPNs发病机制的研究取得了长足的进步，认识到JAK2V617F可引起蛋白酪氨酸激酶信号途径（JAK-STAT）过度活化，进而导致疾病发生。此外，MPLW515L／K等其他一系列新发现的异常基因更进一步阐明了JAK2-MPNs的发病机制。本文就BCR／ABL-MPNs中的特征性突变基因的结构功能、在MPNs发病中所起的作用、对于疾病诊断的意义以及应用JAK2抑制剂靶向治疗MPNs的前景作一综述。

骨髓增殖性肿瘤小鼠模型的构建及评价体系的建立

目的:构建携带JAK2-V617F,MPLW515L及CALR-Type I基因突变的骨髓增殖性肿瘤(MPN)移植小鼠模型,并建立移植小鼠模型构建成功的评价体系。方法:获取小鼠骨髓c-kit+细胞:颈椎脱位处死小鼠,分离股骨、胫骨及髂骨,收集骨髓细胞,经过CD117磁珠孵育,分选出c-kit+细胞。构建小鼠原代突变细胞:利用逆转录病毒体系构建GFP标记的基因突变载体,将带有基因突变的逆转录病毒载体经Platinum-E细胞包装后,获取病毒上清,感染小鼠的骨髓c-kit+细胞。构建MPN移植小鼠模型:收集感染后含有突变基因的小鼠原代c-kit+细胞,再经尾静脉植入经致死剂量(8.0 Gy)γ射线照射的同种雌性受鼠体内。评价MPN移植小鼠模型:移植后定期通过尾静脉采血检测小鼠外周血血象变化;观察小鼠脾脏大小及骨髓纤维化的程度。结果:成功获得携带突变基因的小鼠骨髓c-kit+细胞。成功构建MPN移植小鼠:移植小鼠外周血细胞中携带外源植入的GFP阳性细胞,且白细胞(WBC)、血小板(PLT)以及红细胞压积(HCT)均升高;移植小鼠重量减轻、饮水量与摄食量减少;病理分析显示移植小鼠脾脏肿大,并伴有骨髓纤维化,提示MPN模型构建成功。根据MPN模型建立过程中3种移植小鼠表现出的共性和异性,归纳总结出可以作为判定MPN模型构建成功的一个初步评价体系,主要包括以下指标:小鼠外周血GFP阳性细胞比例;WBC、PLT及HCT计数;脾脏肿大程度及骨髓纤维化程度。结论:成功建立JAK2-V617F、MPLW515L及CALR-Type I逆转录病毒介导的MPN小鼠模型,可为针对MPN发病机制及药物靶向治疗的研究提供重要的实验动物模型。