食品微生物检验中大肠菌群MPN计数法培养基质量控制措施分析

食品安全已经成为食品领域重点关注的问题之一,食品微生物检验不仅是食品安全的重要保障,也对公众健康有着直接的影响。目前,食品微生物频繁地引发食品安全问题,亟需采取有效措施对食品微生物检验质量加以控制。在开展食品微生物检验的过程中,检验结果会很大程度上受到培养基质量的影响。鉴于此,文章在简要分析MPN计数法的基础上,指出在食品微生物检验中采用MPN计数法面临的挑战,并以大肠菌群为例,总结MPN计数法应用过程中对培养基质量的控制措施,以期为提高食品微生物检验质量提供可靠参考。

基于ttr基因的mini-MPN-qLAMP法快速定量检测食品中沙门氏菌

该研究通过3管型微量MPN计数法(Mini Most Probable Number,mini-MPN)建立了一种快速定量检测食源性沙门氏菌的荧光定量环介导等温扩增(Quantitative Loop-Mediated Isothermal Amplification,qLAMP)方法。依据沙门菌属ttr基因设计了qLAMP和荧光定量PCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)引物,结合5 h BPW增菌和MPN计数法建立了mini-MPN-qLAMP沙门氏菌快速定量检测方法;使用两种人工污染样品对mini-MPN-qLAMP法进行验证,使用Bland-Altman分析比较不同检测方法检测结果的一致性。结果表明,建立的qLAMP法与qPCR法反应特异性均良好,纯培养时qLAMP法检出限为500 CFU/mL。通过Bland-Altman分析表明所建立的mini-MPN-qLAMP法在速冻乌米饭中检测结果与mini-MPN-qPCR、mini-MPN计数法、平板计数法相比均具有较高的一致性,r^(2)≥0.994,检出限为-0.44 lg MPN/mL;而在速冻鸡胸肉中该法检测结果与mini-MPN-qPCR结果一致性最佳,r^(2)=0.990,检出限为-0.64 lg MPN/mL。肉制品中腐败杂菌会影响mini-MPN计数和平板计数结果,mini-MPN-qLAMP可排除肉制品中腐败杂菌对检测结果的影响。该研究所建立的mini-MPN-qLAMP法简单易行,准确度高,可用于食品中沙门氏菌的快速定量检测。

MPN相关突变基因及JAK2抑制剂治疗

骨髓增殖性肿瘤(MPN)是一组由髓系细胞过度产生而引起的疾病,大多数MPN都有一个可识别的驱动突变,如JAK2V617F突变、MPL突变、CALR突变,此外还包括一些其他非驱动突变,如ASXL1、DNMT3A和TET2等。由JAK2V617F、MPL和CALR突变激活的JAK2信号通路已成为MPN患者靶向治疗开发的一个重点,JAK2抑制剂已成为治疗MPN不可或缺的一部分,本综述将讨论MPN相关突变基因的发病机制、JAK2抑制剂的相关治疗。

大肠菌群MPN计数法不确定度评估

目的为减少大肠菌群检测中的实验误差,提高检验精确度,对大肠菌群MPN计数法不确定度进行评估。方法使用大肠杆菌标准菌株,分析大肠菌群检测结果的不确定度来源,对测定过程中引入的不确定度分量进行评定。采用合成的方法计算检验结果的不确定度。结果合成不确定度为0.06398,扩展不确定度为0.1446（以对数计）。大肠杆菌含量范围结果为1212~2358 MPN/m L。结论本研究发现重复性对不确定度影响最大,应在分析过程中注意控制。

对基于MPN数据清洗算法的改进

相似重复记录的清除是数据清洗领域中的一个很重要的方面,它的目的是清除冗余的数据。介绍了该问题的流行算法—多趟近邻排序算法MPN(Multi-Pass Sorted Neighborhood),该算法能较好地对相似重复记录进行清除,但也有其不足:一是在识别中窗口大小固定,窗口的大小选取对结果影响很大。二是采用传递闭包,容易引起误识别。提出了基于MPN算法的一种改进算法,试验结果证明改进算法在记忆率和准确率上优于MPN算法。

精确模型化学中MPn微扰外推的一个问题

通过对 BH、 AlH、 BF和 AlF的高级别 ab initio势能曲线计算和理论分析 ,发现在分子的几何构型偏离平衡时 ,由于参考态组态不充分的问题 ,Hartree-Fock单参考态的 MPn微扰计算可能给出错误的能量值 .从而表明，目前的精确模型化学方法 (G1、 G2、 G3和 CBS系列 )中用 MPn微扰外推的办法拟合高级别 ab initio,对偏离平衡构型体系 (如动力学研究中的过渡态、中间体等 )的能量计算 ,在一般意义上是不可靠的 .但是 ,在相同的参考态上 ,即使 MPn微扰能已经发生错误 ,QCISD(T)、 CCSD(T)方法却能较好地描述分子解离过程的能量 ,且 QCISD(T)比 CCSD(T)更好 .因此 ,在单参考态理论框架内，发展以严格的 QCISD(T)方法为基础的模型化学方法 ,似更适用于反应动力学方面的研究 .

基于MPN原理的TEMPO/TVC法检测食品中的细菌总数及其测量不确定度的评定

细菌总数(也称需氧细菌数)的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣,是最常见的食品卫生指标之一。本文比较了传统的菌落计数方法和基于最大近似值(MPN)原理的TEMPO/TVC仪器法,对多个种类的190个食品样品进行了检测。实验数据的比对表明TEMPO/TVC法与菌落计数方法一致性程度较好(符合率97.4%,准确度和精确度无差异),测量不确定度相近,具有简便、快速、高效、人为误差较小的特点。

对基于MPN的相似重复记录识别算法的改进

相似重复记录识别是数据清理中的一个关键问题。文章针对常用的多趟邻接排序法提出了两点改进:一是在多趟排序识别过程中直接合并有重叠的相似记录集,取消了最后计算传递闭包的环节;二是利用关键字按字典序排序的特性,在求编辑距离之前先过滤前面的公共子串,减少了相似记录比较的开销。文章最后给出了改进算法与原算法的对比试验结果。

盐度对MPN法测定沿岸海水粪大肠菌群数的影响

粪大肠菌群是在44℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的微生物生理群，是总大肠菌群中的一部分，水质污染的生物学指标之一。文中使用五管发酵MPN法研究了培养液和稀释水盐度在5，10，15，20，25，30，35七个盐度梯度下对沿岸海水粪大肠菌群数量的影响，结果表明：5～35的七个盐度梯度间的粪大肠菌群数量差异极显著（P〈0．01），在盐度为10～25时，粪大肠菌群数量较为丰富，而在两端盐度的范围，粪大肠菌群数量较少，表明使用MPN法测定近岸海水的粪大肠菌群数量时，培养液和稀释水的盐度不宜过高和过低。调查站位间粪大肠菌群数的水平差异与陆源排污及其影响有关。

LAIR-1通过阻断JAK2 V617F突变的人HEL细胞JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)对Janus激酶2(JAK2)V617F突变的人急性髓系白血病HEL细胞JAK/信号转导子与转录激活子(STAT)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的调节作用,以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用反转录PCR和基因测序鉴定JAK2 V617F突变;应用免疫共沉淀和Western blot法鉴定LAIR-1募集的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)种类;采用CCK-8法检测HEL细胞的增殖;采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测HEL细胞的凋亡率;采用Western blot法检测JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白酪氨酸磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果在JAK2 V617F突变的HEL细胞中,LAIR-1与其配体胶原蛋白结合后可募集含Src同源域2磷酸酶2(SHP-2);LAIR-1可以下调HEL细胞JAK2、STAT1、STAT3、STAT5、AKT和mTOR的蛋白酪氨酸磷酸化水平,并能够显著抑制cyclin D1和Bcl2的表达,而对BAX的表达水平未见显著影响;LAIR-1能够明显抑制HEL细胞的增殖,促进HEL细胞凋亡。结论在JAK2 V617F突变的人白血病HEL细胞中,LAIR-1可通过募集SHP-2抑制JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路的活化,进而抑制HEL细胞的增殖,促进细胞凋亡。

油田硫酸盐还原菌APS-MPN-PCR快速定量检测方法

为了解决现有油田污水中硫酸盐还原菌检测周期长、检测费用较高的问题，应用聚合酶链式反应（PCR）技术与倍比稀释法（MPN）相结合的APS-MPN-PCR法，对硫酸盐还原菌进行快速定量检测．从污水中制备了直接用于PCR扩增的菌液，保证了定量检测的准确性；建立以腺苷酰硫酸还原酶基因（APS）为靶位点的通用探针APS7F和APS8R的反应体系和扩增条件．研究结果表明，与液体稀释培养法相比，该方法检测灵敏度提高了两个数量级，操作时间缩短（整个检测过程只需要3～4h），检测费用也降低．该方法检测结果非常稳定，真实的表征了污水中实际的SRB菌数量，可以在生产中应用．

大肠菌群MPN检测法用于药品微生物限度检查的探讨

采用大肠菌群作为卫生指示菌，对口服药品进行细菌学检验，实验结果表明有利于口服药品染菌状况的监督与控制。

MPN-PCR法定量检测武汉鸡肉制品中的空肠弯曲菌

空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是引起人类细菌性腹泻的主要人畜共患病原菌之一,严重时可导致人类格林-巴利综合征。其中鸡肉污染导致的食源性传播是人类感染的重要原因。为了调查武汉市鸡肉制品的空肠弯曲菌污染情况,运用最可能数法（MPN）及聚合酶链式反应（PCR）技术结合,即MPNPCR方法 ,对市场采集的128份鸡肉样品进行了空肠弯曲菌的定量检测,结果阳性检出率为18.75%,其中鲜鸡肉检出率为28.26%,冻鸡肉检出率为13.41%,含菌量范围为3.6-92.0 MPN/g。

MPN法测油田水及工业循环水中铁细菌的阳性反应判定

通过ICP测铁离子浓度,革兰氏染色,扫描电镜,证明MPN法可测水样中铁细菌数量。当测试瓶内仅出现红棕色沉淀,测试瓶上层液体棕色并未消失变透明时,并非铁细菌的阳性反应,为油田测铁细菌时的阳性反应判定提供参考。

MPN法的原理与局限性分析

1915年，McCrady首次发表了用MPN法(最大可能数法)来估算细菌浓度的方法，这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。目前，我国仍普遍将MPN法用于大肠菌群，大肠杆菌等的检测。因此了解MPN法的原理及局限性，对实验室的微生物检测及食品工业的微生物控制都有着重要的指导作用。

应用概率理论拓宽MPN值的计算与实用性

应用多管法检测大肠菌群细菌数是一种适用各种水样的行之有效的检验方法，但此方法操作繁琐，数据处理较难。本文应用概率理论，推导出多种情况下大肠菌群最可能数ＭＰＮ值计算公式，并编制了方便可靠的ＨＢＧ程序，从而进一步提高了此法的实用价值。

湖泊中军团菌的巢式PCR-MPN检测法

为了直接检测环境水体中军团菌的存在,文章将巢式PCR与倍比稀释法相结合(巢式PCR-MPN法),采用两对引物扩增环境样品基因组DNA。将检测到含有军团菌的样品DNA模板进行十倍梯度稀释,由最低检测的稀释度,计算出样品中军团菌的细胞数,同时确定方法检测的灵敏度。并用克隆建库、构建系统树的方法来验证该文研究方法的特异性。研究结果表明,巢式PCR第二步后获得的序列均为军团菌序列,该方法军团菌DNA的检出限可以低至2.74 fg/μL。该研究建立的水体军团菌检测方法具有简便快捷、特异性好、灵敏度高的特点。

应用概率理论拓宽MPN值的计算

应用概率理论拓宽ＭＰＮ值的计算１前言大肠菌群细菌的检验方法有多管发酵法及滤膜法。滤膜法使用的时间、设备和材料比较经济，但仅适用于杂质较少的水样。多管法克服了滤膜法的缺点，从生理生化和镜检两个方面进行检定，检测可靠程度高，适用于淡水及咸水多种水样，还可...

乙炔还原-MPN(最可能数)法测水稻根系固氮菌数的研究

本文重点介绍了乙炔还原-MPN法测定水稻根系固氮菌数的结果,并与经典方法滤纸条-MPN法及TTC-MPN法进行了比较。乙炔还原-MPN法具有实验周期短、专一性强和判断客观等优点,是一种快速准确地测定水稻根系固氮菌数及初步筛选高活性固氮菌株的有效手段。

肺炎支原体MPN 668蛋白的克隆和表达与纯化

目的克隆表达与纯化肺炎支原体mpn 668蛋白。方法以Mp 129株基因组DNA为模板,PCR法扩增目的基因mpn 668,将其亚克隆至pGEX-6 P-1载体中。经鉴定后将其转化至表达菌E.coli BL 21中进行诱导表达。采用SDS-PAGE和蛋白质印迹等方法对表达产物进行分析鉴定并纯化GST融合蛋白。结果成功扩增出总长度为423 bp的mpn 668基因,所构建的原核重组质粒经PCR、双酶切以及测序鉴定与预期目的基因相符。SDS-PAGE显示,IPTG可诱导一分子量约为41 kD的可溶性GST融合蛋白,经GST·BindTMPurification Kit纯化后,纯度可达95%以上。结论本研究成功克隆表达出mpn 668融合蛋白,为下一步研究其功能奠定了基础。